20xx年醫(yī)學專題—第四章-細胞破碎-資料下載頁
2024-11-16 00:59本頁面
【正文】 p242。 su236。)法（Ultrasonication)利用超聲波振蕩器發(fā)射的1525kHz的超聲波探頭處理細胞懸浮液。 超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質兩種型式，一般破碎效果后者比前者好。 超聲波的細胞破碎效率與細胞種類、濃度和超聲波的聲頻、聲能有關。,56,第五十六頁，共六十八頁。,超聲波破碎(p242。 su236。)的機理,JY92II D超聲波 細胞(x236。bāo)粉碎機,一般認為在超聲波作用下液體發(fā)生空化作用（cavitation), 液體中局部空穴的形成、增大和閉合產生極大的沖擊波和剪切力，引起的粘滯性旋渦在細胞上造成了剪切力，使細胞內液體發(fā)生流動，從而使細胞破碎(p242。 su236。)。 操作過程產生大量的熱，因此操作需在冰水或外部冷卻的容器中進行。,57,第五十七頁，共六十八頁。,超聲波破碎(p242。 su236。)的適用范圍,超聲波破碎是很強烈的破碎方法，適用于多數(duōsh249。)微生物的破碎。 一般桿菌比球菌易破碎，G細菌比G+細菌易破碎，對酵母菌的效果較差。 但超聲波產生的化學自由基團能使某些敏感性活性物質失活。 超聲波破碎的有效能量利用率極低 由于對冷卻的要求相當苛刻，所以不易放大，但在實驗室小規(guī)模細胞破碎中常用。,58,第五十八頁，共六十八頁。,不同機械破碎方法(fāngfǎ)的比較,59,第五十九頁，共六十八頁。,3 其它(q237。tā)方法,自溶作用(zu242。y242。ng) 凍結融化法 干燥法,60,第六十頁，共六十八頁。,1）.自溶作用(zu242。y242。ng),自溶作用是酶解的另一種方法，利用生物體自身產生的酶來溶胞，而不需外加其他的酶。 在微生物代謝過程中，大多數都能產生一種能水解(shuǐjiě)細胞壁上聚合物的酶，以便生長過程繼續(xù)下去。 自溶作用：改變其生長環(huán)境（溫度、ｐＨ、緩沖液），可以誘發(fā)產生過剩的這種酶或激發(fā)產生其它的自溶酶，以達到自溶目的。 缺點是：易引起所需蛋白質的變性，自溶后細胞懸浮液粘度增大，過濾速度下降。,61,第六十一頁，共六十八頁。,2）凍結(d242。ngji233。)融化法,將細胞放在低溫下冷凍（約15℃），然后(r225。nh242。u)在室溫中融化，反復多次而達到破壁作用。 一方面能使細胞膜的疏水鍵結構破裂，從而增加細胞的親水性能， 另一方面胞內水結晶，形成冰晶粒，引起細胞膨脹而破裂。 適用于細胞壁較脆弱的菌體，破碎率較低，需反復多次，此外，在凍融過程中可能引起某些蛋白質變性。,62,第六十二頁，共六十八頁。,使細胞(x236。bāo)結合水分喪失，從而改變細胞(x236。bāo)的滲透性。當采用丙酮、丁醇或緩沖液等對干燥細胞(x236。bāo)進行處理時，胞內物質就容易被抽提出來。 氣流干燥主要適用于酵母菌，一般在2530℃的氣流中吹干； 真空干燥多用于細菌。 冷凍干燥適用于不穩(wěn)定的生化物質,3）干燥(gānz224。o)法,63,第六十三頁，共六十八頁。,64,第六十四頁，共六十八頁。,選擇破碎(p242。 su236。)方法的依據：,細胞處理量； 細胞壁強度和結構(高聚物交聯(lián)程度、種類和壁厚度)； 目標產物(chǎnw249。)對破碎條件的敏感性； 破碎程度； 目標產物的選擇性釋放,65,第六十五頁，共六十八頁。,選擇性釋放目標(m249。biāo)產物的一般原則,⑴僅破壞或破碎存在目標產物的位置周圍 當目標產物存在于細胞膜附近時，可采用較混和的方法，如酶溶法、滲透壓沖擊法和凍結－融化法等。當目標產物存在于細胞質內時，則需采用強烈的機械破碎法． 當目標產物處于與細胞膜或細胞壁結合的狀態(tài)時，調節(jié)溶液PH值，離子強度或添加與目標產物具有親和性的試劑如：螯合劑、表面活性劑等，使目標產物容易溶解釋放(sh236。f224。ng)。 (2)機械破碎法和化學法并用可使操作條件更加溫和，在相同的目標產物釋放率條件下，降低細胞的破碎程度。,66,第六十六頁，共六十八頁。,思考題,常用的細胞破碎方法有哪些 在選擇(xuǎnz233。)細胞破碎方法時需要考慮哪些因素？,67,第六十七頁，共六十八頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,第四章 細 胞 破 碎。微生物（細菌/酵母/真菌）胞內、胞外。植物細胞壁的主要成分是纖維素，常采用纖維素酶和半纖維素酶裂解。181。0H20——標準化學電勢。VH2o——水的偏摩爾體積。x1——細胞內所有溶質的總摩爾分數。若包內物為稀溶液，其偏摩爾體積等于純水的摩爾體積。同樣，這種清潔劑既有親水基團(jī tu225。n)又有疏水基團(jī tu225。n)。含有包含體的基因工程菌（因包含體堅硬，易損傷勻漿閥）。徑向盤使磨料沿徑向運動，傾斜盤則產生軸向運動。67,第六十八頁，共六十八頁
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