【正文】 藥散劑，需加適量水或其他賦形劑時，也應參考臨床使用(shǐy242。ng)方法，合理配制。,第四十二頁，共五十三頁。,三、試驗方法 至少用3只家兔或5只豚鼠。給藥前24h，動物背部去毛。分完整皮膚給藥區(qū)、破損皮膚給藥區(qū)、完整皮膚對照區(qū)、破損皮膚對照區(qū)4個區(qū)，每區(qū)均為體表面積的3％—5％，各區(qū)之間留有適當距離。破損皮膚制造方法、給藥和固定方法等同皮膚毒性試驗。給藥區(qū)涂抹受試物 (固體)或1ml(液體)，對照區(qū)涂以等量賦形劑，二層紗布覆蓋，適當方法固定。 一次給藥的皮膚刺激實驗，24h后以溫水或無刺激性溶劑洗去殘留受試物和賦形劑，觀察(guānch225。)1h，24h、48h、72h涂抹部位的紅斑和水腫等反應。原發(fā)反應在1—2日內達到最劇，消退較快，多次給藥的皮膚刺激實驗，每日涂抹1次，連續(xù)1星期或以上。其他同1次給藥的皮膚刺激實驗。,第四十三頁，共五十三頁。,第四節(jié) 皮膚過敏性試驗 皮膚過敏性試驗的目的足觀察在重復接觸受試物后，受試物作為致敏原引起的變態(tài)反應在皮膚上的表現(biǎoxi224。n)。皮膚過敏性試驗可以分成兩大類，一類是使用佐劑(或稱免疫增強)的方法，一類是不用佐劑的方法。 一、動物 原則上選擇敏感性高的動物。一般用白色豚鼠，250—300g(或1—3個月齡)，雌雄齊半。每組10只，或由是否會影響結果評價決定。 二、陽性對照 對—苯二胺，1—氯—2，4—二硝基苯、二鉻化鉀、璜胺新霉素、磺化鎳等。,第四十四頁，共五十三頁。,三、受試物 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑(如羊毛脂、凡士林、橄欖等)混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。 確定劑量應考慮受試物的溶解性等性質，局部、全身的耐受性等。必要時應能陳述所用劑量的理由。 四、試驗方法 給受試物(致敏或激發(fā))前24h，動物頸背部兩側脫毛，—側用于致敏涂敷，另—側用激發(fā)涂敷。脈鼠去毛范圍(f224。nw233。i)約3cm~3cm(或2cmx4cm)。試驗組動物背部 側脫毛處涂敷受式物，陰性對照組動物背部．脫毛處涂敷賦形劑，陽性對照組動物背部一側脫毛處涂敷1％DNCB(或其他陽性對照藥)，均持續(xù)6h動物分籠飼養(yǎng)。14日后，在動物背部另一側，試驗組涂敷受試物，陰性對照組涂敷賦形劑，陽性對照組涂敷o．1％DNCB(或其他陽性對照藥)。6h后，去掉涂敷物，即刻觀察皮膚過敏反應情況，之后于24h、48h、72h再次觀察。以上是代表性步驟。測試皮膚過敏反應的還有其他方法，據報道認為福氏完全佐劑法的敏感忭略高。簡述如下：,第四十五頁，共五十三頁。,(一)不用佐劑的方法 l，Buehler試驗法 包敷封閉式涂敷受試物致敏，2星期后包敷封閉式涂敷受試物激發(fā)。 2，Dmize試驗法 皮內注射受試物致敏，2星期后皮內注射受試物激發(fā)。 3．敞開式敷皮試驗法(open eplcutmeo test) 按臨床擬用方法，反復涂敷受試物致敏。2星期后涂敷受試物激發(fā)。 (二)使用佐劑的方法 1 佐刑貼敷試驗法 ①頸背部脫毛區(qū)四角(s236。 jiǎo)各皮內注射蒸餾水和福氏完全佐劑(1；1)乳化劑(油包水，W／O)0．1ml。②在注射部位用注射針呈井字擦傷皮膚，③24h，將受試物(0．1mI或0. lg)涂敷破損皮膚上。①步驟②—③每日重復1次，連續(xù)3次。⑤致敏第一日起計算，1星期后，皮內注削部位涂敷10％月桂醇硫酸鈉的凡士林液。⑥在同一部位包封式涂敷受試物(0．2ml或0，1g)致敏，保持48h。⑦致敏結束2期后，在背部或側腹脫毛處，敞開式涂敷受試物激發(fā)。⑧根據24h，48h的皮膚反應，坪價受試物的過敏性反應。,第四十六頁，共五十三頁。,2 . 最大限度試驗法 ①頸背部脫毛區(qū)左右對稱皮內注射燕餾水和福氏完全佐劑(1：1)乳化劑(油包水，W／O)0．1ml．受試物0．1ml，受試物和FCA乳化劑0．1ml。②1星期后，皮內注射部位涂敷含10％月桂醇硫酸鈉的凡士林液。③包封式涂敷受試物(0．2mi或0. 2z)致敏，保竹48h。④致敏結束1星期后，在背部或側腹預先脫毛處，包封式徐敷受試物(0．1ml或0．1g)24h激發(fā)。⑤貼敷除后24h、48h觀察(guānch225。)皮膚反應。 3．福氏完全佐劑法(FCA) 受試物溶解在蒸餾水與福氏完全佐劑的等量混合液中，再皮下注射。 4．最佳試驗法(optmnzatmn test) 先用福氏完全佐劑加強，包封式涂敷或皮內注射受試物致敏。 5 破損皮膚佐劑試驗法(split od juvant) 用冰接觸損傷皮膚，使用FCA，包封式涂敷受試物致敏。,第四十七頁，共五十三頁。,第五節(jié) 皮膚光敏性試驗 光敏性反應由太剛光線與制劑相作用而產生。凡含有類似已知光敏性物質或根據其他試驗推測可能有光敏性的黏膜外用藥，均應做光敏性試驗。 一、動物 原則上選樣敏感性高的動物。一般用白色豚鼠，500g以下(即1～3個月齡)，雌雄各半，雌性動物應是來受孕過的功物。每組10只，或由是否會影響結果評價決定(ju233。d236。ng)。 二、陽性對照 6—甲基香豆素、3，3’，4’，5—四氯水楊酸苯胺等。,第四十八頁，共五十三頁。,三、受試物 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形刑(如羊毛脂、凡士林、橄欖抽等)混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。 確定劑量應考慮受試物的溶解性等理化性質，局部、全身的耐受性等。必要時應能陳述所用劑量的理由。 四、注意事項及結果評價 1．注意事項 實驗動物(d242。ngw249。)的選擇同皮膚過敏性試驗。受試物的處理同皮膚過敏性試驗。 結果報告時要注明光照條件，包括：裝置概要、光源種類、制造廠家、亮度或強度、光照距離等。 結果評價 同皮膚過敏性試驗。,第四十九頁，共五十三頁。,第六節(jié) 黏膜刺激性試驗 試驗目的是觀察接觸受試物后產生的動物黏膜刺激反應情況。分為單次給藥和多次給藥的黏膜刺激試驗。 一、動物 首選成年健康的白色家兔(2kg左右)，其次是大鼠(0．25kg左右)。雌雄各半。嬰兒(yīng 233。r)用藥應用更年輕的動物，如白色家兔1．5kg左右，白色豚鼠0．2kg左右。 二、受試物 應盡量與臨床用制刑—致。粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形刑時，也應參考臨床使用方法，合理配制。,第五十頁，共五十三頁。,三、實驗方法 盡量模擬臨床的用藥途徑。保證受試物與黏膜接觸4h以上。如盲腸或陰道(yīnd224。o)或滴鼻或吸入用藥時，可將動物固定；口腔用藥時，可將藥物涂抹在下唇與齒齦之間；或提高受試物的黏稠度；或增加用藥次數。如為液體制劑，或去除賦形劑可做成液體制劑的，也可以眼結膜刺激性試驗代替。 需設賦形劑對照組。如賦形劑有刺激性，應再設空白對照組。 單次給藥的黏膜刺激實驗，受試物接觸4h后，再經1h處死動物，取出相應的組織，觀察涂抹部位有無充血和腫脹等反應。必要時應進行病理組織學檢查。 多次給藥的黏膜刺激實驗，每日1次，每次接觸4h，連續(xù)1星期或以上。末次給受試物后lh處死動物，觀察內容同單次給藥。,第五十一頁，共五十三頁。,第七節(jié) 眼刺激性試驗 試驗目的是觀察接觸受試物后動物眼睛產生的刺激反應情況。分為單次給藥和多次給藥的眼刺激試驗。 一、動物 最常用白色家兔(2kg左右)，至少4只。 二、受試物 應盡量與臨床用制劑一致。需加適量水或其他賦形劑時，也應參考臨床使用方法，合理配制。 三、實驗方法 將受試物滴入或涂敷于—側眼結膜囊內，劑量為0．1ml或0．1g，另—惻作賦形劑對照。紿受試物后，用手將動物眼瞼被動閉合5～l0s，記錄給受試物后6h、24h、48h、72h至7日的局部反應情況。 凡臨床用藥超過1星期的受試物，要進行(j236。nx237。ng)多次給藥的刺激性試驗，與單次給藥方法相同，連續(xù)給藥1星期或以上。,第五十二頁，共五十三頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,急性毒性試驗。大鼠口服最大容量不超過2ml／l00g(體重)，其他途徑不超過lml／l00g(體重)。如仍未見毒性反應或體重正常增加，則可認為該藥物小鼠最大給藥量未見毒性反應，或LD50大于最大給藥量。皮膚長期毒性試驗和皮膚急性毒性試驗的皮膚準備(zhǔnb232。i)相同。每組家兔6只或小型豬4只，如用豚鼠需10只。至少用3只家兔或5只豚鼠,第五十三頁，共五十