【正文】 ,。每組家兔6只或小型豬4只，如用豚鼠需10只。皮膚長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)和皮膚急性毒性試驗(yàn)的皮膚準(zhǔn)備(zhǔnb232。大鼠口服最大容量不超過2ml／l00g(體重)，其他途徑不超過lml／l00g(體重)。ir243。,第五十二頁(yè)，共五十三頁(yè)。nx237。紿受試物后，用手將動(dòng)物眼瞼被動(dòng)閉合5～l0s，記錄給受試物后6h、24h、48h、72h至7日的局部反應(yīng)情況。需加適量水或其他賦形劑時(shí)，也應(yīng)參考臨床使用方法，合理配制。 一、動(dòng)物 最常用白色家兔(2kg左右)，至少4只。,第七節(jié) 眼刺激性試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康氖怯^察接觸受試物后動(dòng)物眼睛產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。末次給受試物后lh處死動(dòng)物，觀察內(nèi)容同單次給藥。必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。如賦形劑有刺激性，應(yīng)再設(shè)空白對(duì)照組。如為液體制劑，或去除賦形劑可做成液體制劑的，也可以眼結(jié)膜刺激性試驗(yàn)代替。如盲腸或陰道(yīnd224。,三、實(shí)驗(yàn)方法 盡量模擬臨床的用藥途徑。粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形刑時(shí)，也應(yīng)參考臨床使用方法，合理配制。r)用藥應(yīng)用更年輕的動(dòng)物，如白色家兔1．5kg左右，白色豚鼠0．2kg左右。雌雄各半。分為單次給藥和多次給藥的黏膜刺激試驗(yàn)。,第四十九頁(yè)，共五十三頁(yè)。 結(jié)果報(bào)告時(shí)要注明光照條件，包括：裝置概要、光源種類、制造廠家、亮度或強(qiáng)度、光照距離等。)的選擇同皮膚過敏性試驗(yàn)。 四、注意事項(xiàng)及結(jié)果評(píng)價(jià) 1．注意事項(xiàng) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(d242。 確定劑量應(yīng)考慮受試物的溶解性等理化性質(zhì)，局部、全身的耐受性等。,第四十八頁(yè)，共五十三頁(yè)。ng)。每組10只，或由是否會(huì)影響結(jié)果評(píng)價(jià)決定(ju233。 一、動(dòng)物 原則上選樣敏感性高的動(dòng)物。,第五節(jié) 皮膚光敏性試驗(yàn) 光敏性反應(yīng)由太剛光線與制劑相作用而產(chǎn)生。 5 破損皮膚佐劑試驗(yàn)法(split od juvant) 用冰接觸損傷皮膚，使用FCA，包封式涂敷受試物致敏。 3．福氏完全佐劑法(FCA) 受試物溶解在蒸餾水與福氏完全佐劑的等量混合液中，再皮下注射。⑤貼敷除后24h、48h觀察(guānch225。③包封式涂敷受試物(0．2mi或0. 2z)致敏，保竹48h。,2 . 最大限度試驗(yàn)法 ①頸背部脫毛區(qū)左右對(duì)稱皮內(nèi)注射燕餾水和福氏完全佐劑(1：1)乳化劑(油包水，W／O)0．1ml．受試物0．1ml，受試物和FCA乳化劑0．1ml。⑧根據(jù)24h，48h的皮膚反應(yīng)，坪價(jià)受試物的過敏性反應(yīng)。⑥在同一部位包封式涂敷受試物(0．2ml或0，1g)致敏，保持48h。①步驟②—③每日重復(fù)1次，連續(xù)3次。 jiǎo)各皮內(nèi)注射蒸餾水和福氏完全佐劑(1；1)乳化劑(油包水，W／O)0．1ml。2星期后涂敷受試物激發(fā)。 2，Dmize試驗(yàn)法 皮內(nèi)注射受試物致敏，2星期后皮內(nèi)注射受試物激發(fā)。簡(jiǎn)述如下：,第四十五頁(yè)，共五十三頁(yè)。以上是代表性步驟。14日后，在動(dòng)物背部另一側(cè)，試驗(yàn)組涂敷受試物，陰性對(duì)照組涂敷賦形劑，陽(yáng)性對(duì)照組涂敷o．1％DNCB(或其他陽(yáng)性對(duì)照藥)。i)約3cm~3cm(或2cmx4cm)。脈鼠去毛范圍(f224。必要時(shí)應(yīng)能陳述所用劑量的理由。,三、受試物 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚；如是固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑(如羊毛脂、凡士林、橄欖等)混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。 二、陽(yáng)性對(duì)照 對(duì)—苯二胺，1—氯—2，4—二硝基苯、二鉻化鉀、璜胺新霉素、磺化鎳等。一般用白色豚鼠，250—300g(或1—3個(gè)月齡)，雌雄齊半。皮膚過敏性試驗(yàn)可以分成兩大類，一類是使用佐劑(或稱免疫增強(qiáng))的方法，一類是不用佐劑的方法。,第四節(jié) 皮膚過敏性試驗(yàn) 皮膚過敏性試驗(yàn)的目的足觀察在重復(fù)接觸受試物后，受試物作為致敏原引起的變態(tài)反應(yīng)在皮膚上的表現(xiàn)(biǎoxi224。其他同1次給藥的皮膚刺激實(shí)驗(yàn)。)1h，24h、48h、72h涂抹部位的紅斑和水腫等反應(yīng)。給藥區(qū)涂抹受試物 (固體)或1ml(液體)，對(duì)照區(qū)涂以等量賦形劑，二層紗布覆蓋，適當(dāng)方法固定。分完整皮膚給藥區(qū)、破損皮膚給藥區(qū)、完整皮膚對(duì)照區(qū)、破損皮膚對(duì)照區(qū)4個(gè)區(qū)，每區(qū)均為體表面積的3％—5％，各區(qū)之間留有適當(dāng)距離。,三、試驗(yàn)方法 至少用3只家兔或5只豚鼠。ng)方法，合理配制。 二、受試物 應(yīng)盡量與臨床用制劑—致。 一、動(dòng)物 選成年健康的白色家兔(2kg左右)，其次是白色豚鼠(0．3kg左右)。,第三節(jié) 皮膚刺激試驗(yàn) 試驗(yàn)?zāi)康淖阌^察動(dòng)物皮膚接觸受試物后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。 三、觀察記錄與檢查 皮膚黏膜用藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，觀察項(xiàng)包括血液學(xué)，血液生化和病理學(xué)檢查均同全身給藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，只是受試物涂抹的局部皮膚應(yīng)列為檢查劉象。,3．給藥周期(zhōuqī) 皮膚黏膜用藥長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)時(shí)，給藥時(shí)間不少于臨床用藥療程的兩倍，具體用藥周期(zhōuqī)可參照全身用藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。nɡ)制劑，也可用全身給藥途徑(如皮下注射等)反應(yīng)具毒性。 毒性很小的中藥外用(w224。 受試物劑量應(yīng)以同面積不同濃度為宜。 黏膜用藥，如直腸或陰道或滴鼻或吸入用藥時(shí)，可將動(dòng)物固定后進(jìn)行；口腔用藥，可將藥物涂抹在下唇與齒齦之間(不能排除動(dòng)物舔食受試物)；或提高受試物的黏稠度；或增加用藥次數(shù)。,2 給藥方法 受試物如為膏劑或液體劑型，可直接涂抹于去毛皮膚上；固體粉末或中藥散劑，需加適量水或其他賦形劑(如羊毛脂、凡士林、橄欖油等)混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好， 藥物涂抹后應(yīng)以適當(dāng)?shù)牧Ψü潭?，如用無刺激性紗布、膠布或有孔尼龍繃帶固定；豚鼠或大鼠可用剪去指套的乳膠手套包住整個(gè)背部和腹部；如受試物是液體，應(yīng)先覆以聚乙烯薄膜，防液體揮發(fā)。每組家兔6只或小型豬4只，如用豚鼠需10只。具體方法可參見本篇“長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)”。 1．劑量設(shè)置 皮膚黏膜用藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，一般設(shè)高、低兩個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組。n)的皮膚準(zhǔn)備相同。n)和皮膚急性毒性試驗(yàn)(sh236。,二、實(shí)驗(yàn)方法 (一)皮膚準(zhǔn)備 皮膚長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(sh236。嬰兒用藥應(yīng)用更年輕的動(dòng)物，如白色家兔(1．1kg左右)、白色豚鼠(0．2kg左右)。 sǔn)皮膚)或黏膜反復(fù)多次接觸受試物，因吸收作用而使機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。,第三十七頁(yè)，共五十三頁(yè)。n shēn)給藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)相同。給約24h后，用溫水或無刺激溶劑除去殘留受試物。,3．給藥周期 皮膚黏膜用藥的急性毒性試驗(yàn)時(shí)，受試物與皮膚或黏膜接觸不超過24h。如采用其他方法，應(yīng)說明理由。 有些毒性很小的外用制劑，也可用全身給藥途徑(如皮下注射等)反應(yīng)其毒性。同時(shí)要注意防止試驗(yàn)動(dòng)物舔食受試物。o)散劑，需加適量水或其他賦形劑(如羊毛脂、凡上林、橄欖油等)混合均勻，以保證受試物與皮膚接觸良好。,第三十五頁(yè)，共五十三頁(yè)。每組家兔或豬4只，如用豚鼠需10只。動(dòng)物宜采用大鼠或豚鼠。n shēn)給藥的原則，沒置幾個(gè)劑量組(完整皮膚組和破損皮膚組備數(shù)個(gè)劑量組)。,(三)受試藥 原則上盡量與臨床用制劑一致，并保證受試物與皮膚接觸良好。如賦形劑有毒性，應(yīng)再設(shè)空白對(duì)照組。保證受試物與黏膜接觸4h以上。破損皮膚的制作采用不同方法將去毛消毒皮膚劃破(消毒手術(shù)刀作井字劃破或砂紙磨擦打毛)，以滲血為度。)約150cm2，豚鼠約40cm2，小型豬約300cm2)。,第三十三頁(yè)，共五十三頁(yè)。nɡ)動(dòng)物為成年健康的白色家兔、白色豚鼠、白色大鼠或白色小型豬，雌雄各半。 一、動(dòng)物 常用(ch225。,第三十二頁(yè)，共五十三頁(yè)。)做長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，但需做局部刺激試驗(yàn)、過敏試驗(yàn)，必要時(shí)需做光敏試驗(yàn)。如果是局部用藥治療全身疾患的，還應(yīng)參照全身用藥的規(guī)定做長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。,皮膚黏膜用藥即局部用藥，包括皮膚用藥、直腸或陰道給藥、滴眼藥、滴鼻藥、滴耳劑、吸入劑及口腔咽喉用藥等。nm243。,第三十頁(yè)，共五十三頁(yè)。在同一張片上盡量含有同一器官組織的不同層面。剖取的實(shí)質(zhì)性臟器應(yīng)稱重?？紤]到中藥的特點(diǎn)，可根據(jù)急毒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有病變的器官組織和中藥藥性可能出現(xiàn)中毒的靶器官、靶組織具體確定。取出的組織應(yīng)放在頂先排定組織器官名稱扦盛有生理鹽水的容器中．以防漏取及干燥。 (2)進(jìn)行剖檢時(shí)，應(yīng)觀察皮膚、口鼻、眼耳等外觀，再剝離皮膚觀察皮下組織，最后剪開腹腔(f249。 (1)處死動(dòng)物時(shí)，要考慮到組織器官免受損傷，也要考慮到動(dòng)物免受痛苦和應(yīng)激反應(yīng)。正確肉眼觀察記錄的同時(shí)要保留相應(yīng)的影像、照片等資料。,(三)病理組織學(xué)檢查 病理組織學(xué)檢查目的足了解受試藥物毒性引起的質(zhì)性改變，是診斷毒性反應(yīng)的重要指標(biāo)。