【導(dǎo)讀】培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌的多樣性分析。三顆胡楊莖稈液混合之后采用常規(guī)培養(yǎng)法分離得到。其中25株從LB培養(yǎng)基，21株從NB培養(yǎng)基，16株從KB培養(yǎng)?；?8株從MA培養(yǎng)基所分離到的。有32株桿狀，45株短桿狀和3株球狀，17株革蘭氏陽性，63株革蘭氏陰性細(xì)菌。表型特征和16SrRNA基因序列系統(tǒng)。的細(xì)菌為10株，占分離菌株的%；屬于放線菌門的細(xì)菌為7株，假單胞菌屬是占優(yōu)勢(shì)屬，占分離菌株的%。模式菌株有著低于%的16SRNA基因序列相似性的59株細(xì)菌。14種潛在新分類單元，需對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步研究。β-羥基丁酸）的革蘭氏陰性菌株。生長(zhǎng)溫度是4-45℃，pH范圍。是，NaCl濃度范圍是0-3%（w/v）。基因組DNA的G+Cmol%含量是%。分有C16:0、SummedFeature8、C17:0cyclo、C19:0cyclow8c、C12:0、SummedFeature

　　

【正文】 放入 70℃， 34 小時(shí)，在迅速轉(zhuǎn)移到凍干機(jī)上凍干（看到牛奶裂縫透明說明已干）。 11) 氧焰灼燒封口（全面轉(zhuǎn)動(dòng)凍干管，使其均勻受熱否則容易出現(xiàn)玻璃泡）。 12) 將準(zhǔn)備好的凍存管在 4℃保存。 結(jié)果 細(xì)菌的分離與純化 本研究從 Kiyik 河胡楊林胡楊莖桿液中通過采用 KB， LB， NB和 MA 等四種培養(yǎng)基，共分離得到了 63 株內(nèi)生細(xì)菌。這些細(xì)菌有白色，奶油色，黃色，紅色，粉色和透明等菌落顏色。細(xì)菌的簡(jiǎn)單 染色和革蘭氏染色結(jié)果顯示，分離菌株中有 33 株為桿狀， 27 株為短桿狀， 3 株為球狀菌；有 12 株為革蘭氏陽性菌而51 株為革蘭氏陰性菌。見圖組 2 和表 3。 新疆大學(xué)碩士畢業(yè)論文 23 KBL418 KBL416D KBM28 Halomonas sulfidaeris ATCC BAA803(T) KBL49 新疆大學(xué)碩士畢業(yè)論文 24 KBN417 KBK311 圖組 2 部分分離菌株的形態(tài)特征 表 3 Kiyik 河胡楊可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌 的表性特征特征 Strain Medium Color 細(xì)胞形 態(tài) Gramreaction Spore formation KBN11 NB 白色 桿狀 + + KBN12 NB 淡黃色 桿狀 KBN13 NB 淡黃色 桿狀 KBN13d NB 奶油色 短桿狀 KBN14 NB 暗 黃色 短桿狀 KBN16H NB 奶油色 短桿狀 KBN17 NB 黃色 短桿狀 KBN18 NB 白色 桿狀 KBN19H NB 黃色 短桿狀 KBN44 NB 黃色 短桿狀 KBN416 NB 黃色 短桿狀 KBN311 NB 白色 桿狀 KBN417 NB 透明 桿狀 KBN418 NB 白色 短桿狀 KBN119 NB 白色 桿狀 + + KBN420 NB 白色 桿狀 KBN422 NB 白色 桿狀 KBN423 NB 奶油色 短桿狀 KBN141 NB 黃色 桿狀 + + 新疆大學(xué)碩士畢業(yè)論文 25 KBN225 NB 奶油色 短桿狀 KBN9 NB 奶油色 短桿狀 KBK26 KB 透明 球狀 + + KBK43 KB 白色 桿狀 KBK311 KB 白色 桿狀 KBK312 KB 奶油色 短桿狀 KBK313 KB 白色 桿狀 KBK514 KB 白色 桿狀 + + KBK315 KB 黃色 桿狀 KBK416 KB 黃色 短桿狀 KBK323 KB 白色 桿狀 + + KBK638 KB 奶白色 桿狀 KBK639 KB 奶油色 短桿狀 KBM23p MA 粉紅色 球狀 KBM25 MA 奶油色 短桿狀 KBM28 MA 透明 桿狀 KBM29 MA 透明 桿狀 KBM211 MA 白色 桿狀 KBM212 MA 奶油色 桿狀 KBM213 MA 透明 桿狀 + + KBM215 MA 奶油色 桿狀 KBM217 MA 奶油色 桿狀 KBM322 MA 奶油色 桿狀 KBM325 MA 奶油色 短桿狀 KBM431 MA 透明 桿狀 KBM638 MA 奶油色 短桿狀 KBL41 LB 暗黃色 桿狀 + KBL42 LB 白色 短桿狀 + KBL43 LB 白色 桿狀 + + KBL45X LB 白色 桿狀 KBL45D LB 奶油色 短桿狀 KBL47 LB 白色 短桿狀 + KBL48 LB 奶油色 短桿狀 KBL49 LB 奶油色 短桿狀 KBL410 LB 奶油色 短桿狀 KBL512B LB 奶油色 桿狀 KBL414 LB 奶油色 短桿狀 KBL415X LB 白色 球狀 + KBL415D LB 奶油色 短桿狀 KBL416 LB 黃色 短桿狀 KBL423 LB 奶油色 短桿狀 KBL425D LB 白色 桿狀 KBL425 LB 奶油色 短桿狀 KBL430 LB 奶油色 短桿狀 新疆大學(xué)碩士畢業(yè)論文 26 KBL435 LB 白色 桿狀 KBL433 LB 奶油色 短桿狀 KBL542B LB 奶油色 短桿狀 KBL538 LB 白色 桿狀 KBL550 LB 奶油色 短桿狀 KBL649 LB 奶油色 短桿狀 不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況 采用的四種培養(yǎng)基 CFU 值分別為 KB ： 107CFU/g， LB： CFU/g= 107， MA ： CFU/g= 107， NB ： CFU/g= 107。共 80 株細(xì)菌中 25 株是從 LB 培養(yǎng)基， 18 株是從 MA 培養(yǎng)基， 16 株是從 KB 培養(yǎng)基，而 22 株是從 NB培養(yǎng)基上分離得到的。菌株從不同培養(yǎng)基中分離到的情況見圖 3。 圖 3 菌株在 不同培養(yǎng)基上 的 生長(zhǎng)情況 基于 16S rRNA 基因序列基礎(chǔ)上的系統(tǒng)發(fā)育分析 從 kiyik 河 GPS 位點(diǎn)為（ N40176。 42′ 8″ E 85176。 23′ 22″），（ N40176。 43′ 22″E 85176。 19′ 18″），（ N40176。 43′ 19″ E 85176。 19′ 09″）的三個(gè)采樣點(diǎn) 胡楊莖稈液樣品中用四種培養(yǎng)基（ LB， NB， KB， MA）分離并鑒定出了屬于 16 個(gè)屬，24 個(gè)種的 80 株細(xì)菌 。 出現(xiàn)頻率最高的屬為假單胞菌屬 (Pseudomonas)，獲得的 35 株假單胞菌分別屬于 Pseudomonas xinjiangensis、 Pseudomonas sabulinigri、 Pseudomonas azotifigens 0246810121416LB NB KB MA桿狀+桿狀—短桿狀+短桿狀—球狀+球狀—新疆大學(xué)碩士畢業(yè)論文 27 和 Pseudomonas pelagia 等 4 個(gè)菌種， 占所有分離菌株的 % (35/80)。 其中 的Pseudomonas xinjiangensis 為 優(yōu)勢(shì)種 ， 共 有 22 株（表 4）。 出現(xiàn)頻率 其次 的 是 Rhizobium 屬和 Bacillus 屬，同樣都 占所分離菌株的% (9/80) (表 4)。 除了這三個(gè)優(yōu)勢(shì)屬之外 還分離到了出現(xiàn)頻率較低的其他 13 個(gè)屬。比如，Brenneria 屬有 6 個(gè)菌株， 1 個(gè)種；嗜鹽菌屬 (Halomonas)有 4 個(gè)菌株， 3 個(gè)種；微桿菌屬 (Microbacterium)有 3 個(gè)菌株， 2 個(gè)種； Aciobacter 屬有 3 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Nesterenokonia 屬有 3 個(gè)菌株， 2 個(gè)種； Nocardioide 屬有 1 個(gè)菌株，一個(gè)種；Planococcus 屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Pantoea 屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Pontibacter屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Resomonas 屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Exiguobacterium 屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Planomicrobium 屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種； Fictibacillus 屬有 1 個(gè)菌株， 1 個(gè)種。 屬于假單胞菌的 22 個(gè)菌株（ KBK41 KBK63 KBL45d、 KBL4KBL4 KBL41 KBL415d、 KBL42 KBL42 KBL4 KBL4KBL550、 KBL64 KBM21 KBM32 KBM63 KBN13d、 KBN22KBN KBN16H、 KBN42 KBK31 KBL542B、 ）與 Pseudomonas xinjiangensis 有著 %的序列相似性， 10 個(gè)菌株（ KBL43 KBM2KBM21 KBM32 KBK62 KBM21 KBN41 KBM2 KBM63KBL410）與 Pseudomonas sabulinigri 有著 %的序列相似性， 2 個(gè) 菌株 （ KBL43 KBN417） 與 Pseudomonas azotifigens 分別有 %， %的序列相似性 ， 1 個(gè)菌株（ KBN311）與 Pseudomonas pelagia 有 %的序列相似性 ；屬于根瘤菌的 9 個(gè)菌株（ KBN4 KBK31 KBK31 KBK4KBK638 、 KBL45x 、 KBL538 、 KBK538 、 KBN18 ）與 Rhizobium rosettiformans 有著 %的序列相似性；屬于微桿菌屬 (Microbacterium)的菌株 KBN13 與 Microbacterium hydrocarbonoxydans 有 %相似性；屬于嗜鹽菌屬的菌株 KBM29 與 Halomonas meridiana 有 %相似性，菌株KBM431 與 Halomonas desiderata 有 %相似性；屬于 Nesterenkonia 屬的菌新疆大學(xué)碩士畢業(yè)論文 28 株 KBL47 與 Nesterenkonia aethiopica 有 %相似性；屬于 Nocardioides 屬的菌株 KBL415x 與 Nocardioides alkalitolerans 有 %相似性。這些菌株都可能是潛在新種。 80 株細(xì)菌的具體 16Sr RNA 基因序列相關(guān)菌株以及相似率見表 4?；?16Sr RNA 基因序列的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹見圖 4— 圖 9。 表 4 Kiyik 河胡楊可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu) 及 16SrDNA 序列同源性 Strainr Phylum Genera Similarity bacteria Similarity KBN13 Actinobacteria Microbacterium Microbacterium hydrocarbonoxydans DSM 16089(T) KBN14 Microbacterium hydrocarbonoxydans DSM 16089(T) KBL41 Microbacterium sedminis YLB01(T) KBL47 Nesterenkonia Nesterenkonia aethiopica DSM 17733(T) KBL42 Nesterenkonia suensis SuaBAC020(T) KBN119 Nesterenkonia suensis SuaBAC020(T) KBL415X Nocardioides Nocardioides alkalitolerans KSL1(T) KBM23p Alphaproteobacteria Rosomonas Resomonas aestuarii JC17(T) KBN420 Rhizobium Rhizobium rosettiformans W3(T) KBK311 Rhizobium rosettiformans W3(T) KBK313 Rhizobium rosettiformans W3(T) KBK43 Rhizobium rosettiformans W3(T) KBK638 Rhizobium rosettiformans W3(T) KBL45x Rhizobium rosettiformans W3(T) KBL538 Rhizobium rosettiformans W3(T) KBK538 Rhizobium rosettiformans W3(T) KBN18 Rh