高中生物專題11dna重組技術(shù)的基本工具課件新人教版選修3-資料下載頁(yè)
2024-12-04 18:50本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】2．掌握限制酶及DNA連接酶的作用。3．理解載體需具備的條件。1．來源：主要來自于____________。識(shí)別雙鏈DNA分子的某種________________。切割特定核苷酸序列中的特定位點(diǎn)。4．結(jié)果：產(chǎn)生____________和____________。限制酶有特性，“特定”突顯專一性。1．作用：將____________送入細(xì)胞中。2．種類：_________、λ噬菌體衍生物和動(dòng)植物病毒等。通過基因工程改造成的生物為新物種。限制酶和DNA解旋酶的作用部位相同。核苷酸內(nèi)部的化學(xué)鍵。將DNA的兩條鏈分別切開時(shí)形成的。上述作用位點(diǎn)示意圖中的箭頭②所指處的氫鍵。同的黏性末端，如BamHⅠ與Sau3AⅠ切割的末端，C項(xiàng)錯(cuò)誤;側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱。完全相同的結(jié)構(gòu)。從題干中“用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ酶切后?？赡苊盖袌D譜分析可知，此DNA分子是環(huán)狀，故A、B排除。的DNA分子”，又可推知圖譜中應(yīng)有兩個(gè)KpnⅠ酶切位點(diǎn)，
【正文】 ,通過 DNA連接酶作用恢復(fù) __________鍵，成功獲得了重組質(zhì)粒，說明___________________________________________________。 磷酸二酯 兩種限制酶 (BamH Ⅰ 和 Bgl Ⅱ )切割得到的黏性末端相同 (4)為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無 ampR和 tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果 (空圈表示與圖二對(duì)照無菌落的位置 )。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是 ___________________________ _________圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是________________________________________________。 能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素 pBR322質(zhì)粒 [解析 ] (1)質(zhì)粒作為基因表達(dá)載體的條件之一是要有抗性基因 ， 以便于篩選 (鑒別 )目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞 。 (2)同一限制酶切割 DNA分子產(chǎn)生的黏性末端相同 ， 根據(jù)題意可知 :該目的基因兩側(cè)被限制酶 EcoR Ⅰ 切割后所形成的黏性末端為： (3)DNA連接酶催化兩個(gè) DNA片段形成磷酸二酯鍵；而通過DNA連接酶作用能將兩個(gè) DNA分子片段連接，表明經(jīng)兩種限制酶 (BamH Ⅰ 和 BglⅡ )切割得到的 DNA片段，其黏性末端相同。 (4)由題意知：由于與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的大腸桿菌能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，故可推知與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素。由圖二、圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌都能抗氨芐青霉素，而經(jīng)限制酶 BamH Ⅰ 作用后，標(biāo)記基因 tetR 被破壞，而不能抗四環(huán)素，故多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 pBR322質(zhì)粒。 圖一中有多個(gè)限制酶作用位點(diǎn) ， 對(duì)生物本身有何作用 ？在基因工程中有何好處 ？ 提示 ：防止外源 DNA入侵細(xì)菌 ， 是一種自我防御；在基因工程中可供目的基因插入其中 。 基因工程中 ,需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒 ,便于重組和篩選。已知限制酶 Ⅰ 的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 — G↓ GATCC— ，限制酶 Ⅱ 的識(shí)別序列和切點(diǎn)是 — ↓ GATC— 。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是 ( ) A．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶 Ⅱ 切割 B．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶 Ⅰ 切割 C．質(zhì)粒用限制酶 Ⅱ 切割，目的基因用限制酶 Ⅰ 切割 D．質(zhì)粒用限制酶 Ⅰ 切割，目的基因用限制酶 Ⅱ 切割 D 解析：首先把目的基因切下來要用到限制酶 Ⅱ ；如果再用限制酶 Ⅱ 切割質(zhì)粒，則 2個(gè)標(biāo)記基因都被切開，標(biāo)記基因?qū)⑹プ饔?。若用限制?Ⅰ 切割質(zhì)粒可保留一個(gè)標(biāo)記基因，而產(chǎn)生的黏性末端和限制酶 Ⅱ 切割下來的目的基因可以互補(bǔ)配對(duì)。
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