20xx人教版高中生物選修3一dna重組技術(shù)的基本工具跟蹤測試-資料下載頁
2024-11-28 19:58本頁面
【導(dǎo)讀】性基因，tet為四環(huán)素抗性基因，箭頭表示一種限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點。限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有________和________?；蚬こ讨谐|(zhì)粒外，________和________也可作為運載體。請畫出質(zhì)粒被切割形成黏性末端的過程圖。若對圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越________。位點及表所列的識別序列，對以下酶切結(jié)果作出判斷。②采用EcoRⅠ和HindⅢ酶切，得到________種DNA片段。是指將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的運載體，常用的“運輸車”是質(zhì)粒。酸內(nèi)切酶識別和切割的是DNA分子，而不是原核細(xì)胞。連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，將兩個DNA片段連接成重組DNA分子。聚合酶是將單個核苷酸加到已存在的核酸片段上形成磷酸二酯鍵，合成新的DNA分子。芐青霉素抗基因完好，四環(huán)素抗性基因被破壞。是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識別序列的中心軸線處切開時，產(chǎn)生的則是平末端。根據(jù)酶的來源不同，可以將DNA連接酶分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到
【正文】 ↓ATCC—— CCTAGG↑ — ― →— G— CCTAG＋GATCC— G— 10．解析： (1)該質(zhì)粒為環(huán)狀 DNA，經(jīng) SmaⅠ 切割前，不含有游離的磷酸基團(tuán)，經(jīng) SmaⅠ切割后形成平末端，含有 2 個游離的磷酸基團(tuán)。 (2)SmaⅠ 識別的是 CCCGGG序列，在 C與 G之間切割， SmaⅠ 酶切位點越多，也就是 C— G堿基對越多，由于 C與 G之間的氫鍵 (3個 )比A與 T之間的氫鍵 (2個 )數(shù)量多，故其含量越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高。 (3)據(jù)圖 1可知， SmaⅠ切割位點在抗生素抗性基因 (標(biāo)記基因 )中，據(jù)圖 2可知， SmaⅠ 切割位點在目的基因中，因此使用 SmaⅠ 切割會破 壞質(zhì)粒的抗性基因和外源 DNA 中的目的基因。 (4)用同一種限制酶處理質(zhì)粒和外源 DNA，再用 DNA連接酶連接時，往往會有三種連接形式：目的基因 — 質(zhì)粒、目的基因 — 目的基因 (環(huán)化 )、質(zhì)粒 — 質(zhì)粒 (環(huán)化 )，后兩種是我們不需要的，因而要進(jìn)行篩選。用兩種限制酶處理質(zhì)粒和外源 DNA，因形成的末端不同可避免上述情況的發(fā)生。 (5)連接質(zhì)粒與目的基因的工具酶是 DNA連接酶。 (6)由 BamH Ⅰ 和 Hind Ⅲ 兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、 外源 DNA，并經(jīng)拼接獲得的重組質(zhì)粒，這兩種酶的識別序列仍然完整存在，如再用 BamH Ⅰ和 Hind Ⅲ 兩 種限制酶進(jìn)行酶切時，可再度被切開，形成 2種 DNA片段；而 EcoR Ⅰ 的識別序列在原質(zhì)粒中存在并沒有破壞，同時切下的目的基因中還存在 1個 EcoR Ⅰ 的識別序列，因此在重組質(zhì)粒中存在 2 個 EcoR Ⅰ 的識別序列，如用 EcoR Ⅰ 和 Hind Ⅲ 酶切，可得到 3種 DNA片段。 答案： (1)0、 2 (2)高 (3)SmaⅠ 會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源 DNA中的目的基因 (4)質(zhì)粒和含目的基因的外源 DNA片段自身環(huán)化 (5)DNA連接 (6)①2 ②3
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1