xxxx-9-16bt第2講基因工程第1講-概論-資料下載頁
2025-02-26 15:23本頁面
【正文】 DNA片段： 化學(xué)合成法 cDNA文庫 基因組 DNA文庫 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 64 載體 DNA的選擇 功能 ： 為目的基因提供進(jìn)入受體細(xì)胞的 轉(zhuǎn)移 能力。 為目的基因提供在受體細(xì)胞中 復(fù)制 或 整合 能力。 為目的基因提供在受體細(xì)胞中的 表達(dá) 能力。 65 限制性內(nèi)切 酶酶切 切割： 內(nèi)切酶 連接酶 連接： DNA連接酶 66 ： 把含目的基因的重組體導(dǎo)入受體細(xì)菌或受體細(xì) 胞，賦予其“生命”讓其表達(dá)，獲得產(chǎn)品。 本階段的操作也有三個(gè)主要環(huán)節(jié)。 （ 1） 轉(zhuǎn) 移：利用 DNA轉(zhuǎn)移技術(shù)，把構(gòu)建的重組體導(dǎo)入到受體菌或受體細(xì)胞中，獲得工程菌或工程細(xì)胞 。 （ 2） 篩 選：利用核酸雜交，酶切分析、 PCR和表型特征等技術(shù)，篩選出已克隆化的工程菌 /細(xì)胞。 （ 3） 表 達(dá)：大量培養(yǎng)含重組體的工程菌 /細(xì)胞，誘導(dǎo)其表達(dá)，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，提取和純化。 67 重組體的轉(zhuǎn)化 受體細(xì)胞 轉(zhuǎn)移： 含氨芐平板 重組質(zhì)粒 感受態(tài) 重組體 68 含氨芐平板 連接 目的基因 基因載體 連接酶 轉(zhuǎn)化 重組體克隆的篩選與鑒定 篩選： 宿主細(xì)胞 69 外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá) 重組子 目的基因的 mRNA 表達(dá)蛋白質(zhì) 大腸桿菌 （ ） 工程細(xì)胞 表達(dá)： 目的基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測 70 重組 DNA操作一般步驟 ： （ 1） 分 離 ：提取和獲得目的基因 和載體 DNA； （ 2） 切 割 ：分別對目的基因和載體 DNA 酶切 ； （ 3） 連 接 ：目的基因與載體連接， 形成新的重組 DNA分子； （ 4） 轉(zhuǎn) 化 ：用重組 DNA分子轉(zhuǎn)化受體 細(xì)胞； （ 5） 篩 選 ：能在受體細(xì)胞中復(fù)制和遺 傳；對轉(zhuǎn)化子篩選和鑒定 ； （ 6） 表 達(dá)： 對獲得外源基因的細(xì)胞或生 物體通過培養(yǎng)，獲得所需的 遺傳性狀或表達(dá)出所需要的 產(chǎn)物。 71 基因載體 目的基因 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 PCR cDNA 人工合成 基因文庫 限制性內(nèi)切酶 有切口的載體 有切口的目的基因 DNA連接酶 重組體 轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)染 體外包裝 帶重組體的宿主細(xì)胞 表型篩選 電泳法 核酸雜交 免疫學(xué)方法 目的基因的表達(dá) 72 圖 21 基因工程技術(shù)流程圖 73 基因工程表達(dá)依據(jù)的基本原理 提高外源基因的劑量 ——分子遺傳學(xué)原理 篩選修飾重組基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件，如： 啟動子、增強(qiáng)子、操作子、終止子、 上游調(diào)控序列等 ——分子生物學(xué)原理 修飾構(gòu)建蛋白質(zhì)生物合成的翻譯調(diào)控元件，如： SD序列、 mRNA非編碼區(qū)、密碼子等 ——分子生物學(xué)原理 基因工程菌（ 微型生物反應(yīng)器 ）增殖及穩(wěn)定生產(chǎn) —— 生化工程學(xué)原理 74 基因工程的支撐技術(shù) 核酸凝膠電泳技術(shù) 核酸分子雜交技術(shù) 細(xì)菌轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)染技術(shù) DNA序列分析技術(shù) 寡核苷酸合成技術(shù) 基因定點(diǎn)突變技術(shù) 聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）技術(shù) 75 ? 運(yùn)輸工具： ? 細(xì)菌質(zhì)粒 ? 病毒 ? DNA操作技術(shù) ? 純化 DNA ? 剪切 DNA分子 ? 分析 DNA片段大小 ? 連接 DNA分子 ? 受體細(xì)胞的制備 ? 將 DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并擴(kuò)增 ? 重組子的篩選和鑒定 ? 目的基因的表達(dá) 76 Thank You for Your Attention! 謝 謝 77 演講完畢，謝謝觀看！
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