【正文】 原料藥的供應(yīng)在數(shù)量和質(zhì)量上都不能滿足臨床應(yīng)用的需要。 ? 用植物組織培養(yǎng)反應(yīng)器 (10L規(guī)模 )進行了丹參發(fā)根培養(yǎng)的研究 , 發(fā)現(xiàn)丹參發(fā)根在 50天內(nèi)鮮重增殖倍數(shù)可高達 240倍左右 ,丹參酮、丹酚酸 A的含量也相當(dāng)高，非常適合于丹參發(fā)根的生長及丹參酮的積累 ,而且利用此系統(tǒng)生產(chǎn)出的丹參及其有效成分由于不受農(nóng)藥等污染物的影響 ,具有廣闊的市場前景。 ? 丹參發(fā)根生物反應(yīng)器培養(yǎng)的中試已達 100L規(guī)模。 (4)紫草細胞培養(yǎng) ? 化學(xué)成分 :含乙酰紫草素、 β 羥基異戊酰紫草素、紫草素、β ， β ’二甲基丙烯酰紫草素等。 ? 性味性寒，味甘、咸。 ? 功能主治 涼血，活血，解毒透疹。用于血熱毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、瘡瘍、濕疹、水火燙傷。 ? 紫草寧產(chǎn)生于亞洲的多年生 植物紫草的根部 。但紫草資源嚴重不足，在日本，紫草已瀕臨滅絕，在我國，紫草列入了國際二級保護植物 ? 紫草寧可用作創(chuàng)傷、燒傷以及痔瘡的治療藥物，同時又作為高級色素使用。 ? 紫草的人工栽培成活率低，而且直接提取紫草寧的無法滿足市場需求。 ? 化學(xué)合成紫草寧的工藝非常復(fù)雜， 且最終產(chǎn)率只有 ％，生產(chǎn)成本昂貴。 ? 紫草寧在國際市場上售價高達 7000美元 /kg ? 1974年 Tabata等就研究了用于培養(yǎng)紫草細胞的培養(yǎng)基。 ? 1981年 Tabata和 Fujita等又用大的培養(yǎng)容器進行細胞懸浮培養(yǎng)并獲得了紫草寧衍生物。 ? 日本在 1983年進行紫草細胞大規(guī)模培養(yǎng)來生產(chǎn)紫草寧。 ? 我國南京大學(xué)等從 1986年開始對該項目進行研究，在進行大量的研究之后得出，在適當(dāng)?shù)臈l件下，培養(yǎng)的紫草細胞懸浮物中紫草寧含量占干重的14%，比紫草根中的含量高 10倍。 ? B5,N6,MG5,LS培養(yǎng)基 ? PH ? 生物誘導(dǎo)子 ? 生長素與激動素 ? 25度 ? 暗培養(yǎng) ? 兩步培養(yǎng)法 ? 使用兩個生物反應(yīng)器，第一個用于細胞生物量的累積 (適合細胞生長的培養(yǎng)基，營養(yǎng)豐富 )，第二個用于次級代謝產(chǎn)物的生產(chǎn) (較低含量的硝酸鹽和磷酸鹽，并含有較低的糖分或少量的碳源 ) ? 日本科學(xué)家用此方法開發(fā)了第一個 植物細 胞工程產(chǎn)品 —— 紫草寧 ? 通過提高第二個反應(yīng)器中的 Ca2+濃度，大幅度增加了培養(yǎng)液中的紫草素含量 二、生產(chǎn)抗體、重組疫苗、多肽類藥物 ? 上游生產(chǎn)成本低 ? 獲取的遺傳性質(zhì)穩(wěn)定 ? 自然條件下易于生長，管理 ? 植物作為生物反應(yīng)器，可省去下游提取，廉價生產(chǎn) ? 蛋白在植物中多數(shù)正確折疊，保證生物活性的穩(wěn)定 利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)抗體 ? 表達抗體的關(guān)鍵是抗體片段 正確組裝和糖基化 等后修飾。在 植物和動物的內(nèi)膜系統(tǒng)中蛋白質(zhì)折疊機制相當(dāng)類似 ，植物能夠表達全長的抗體重鏈、輕鏈并能高效組裝構(gòu)成完整的抗體。 ? 植物中的糖基化同時包括 N及 O糖基化，和動物稍有不同，植物的糖基化更具有異質(zhì)性 ，不同植物產(chǎn)生的糖基化末端不相同，即使是同一株植物不同時期產(chǎn)生的糖基末端仍有不同。糖基化不會對抗體與抗原的結(jié)合能力及特異性產(chǎn)生影響 ，但可能會影響抗體構(gòu)型或體內(nèi)的清除。 ? 目前研究發(fā)現(xiàn)苜?？僧a(chǎn)生單一糖型的抗體，它有望成為更為合適的表達系統(tǒng)。 ? 許多 IgG單抗已能在植物中表達，且在治療中有應(yīng)用價值。第一個在植物中表達的抗體是 IgG1，通過雜交繁殖的煙草表達其重鏈及輕鏈構(gòu)成完整的抗體，圖 513 。 ? 目前，表達的類型有分泌抗體和抗體片段。分泌抗體，如 sIgAG植物抗體，在美國已經(jīng)運用于臨床試驗。 ? 多數(shù)在 E． coli中能表達的抗體片段在轉(zhuǎn)基因植物中也被成功表達。這包括煙草中表達的單個結(jié)構(gòu)域抗體、單鏈抗體分子。 ? 其中 scFV是目前為止轉(zhuǎn)基因植物中表達最為廣泛的抗體片段。 利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)疫苗 ? 自 92年， HBsAg基因轉(zhuǎn)入煙草中表達。已取得了巨大發(fā)展，已成功地在水果、蔬菜、糧食作物中表達了人類或動物的病原體抗原蛋白，并進行 I／ Ⅱ期臨床試驗，取得了一定效果。 ? 轉(zhuǎn)基因植物將打破傳統(tǒng)的疫苗或功能蛋白的生產(chǎn)方式．以大田栽培的方式取而代之。免疫途徑也將采用直接食用或加工后口服植物 (果實 )，即出現(xiàn)可食性疫苗 (edible vaccine)和口服疫苗 (oral vaccine) ? 優(yōu)點： ? 1易形成產(chǎn)業(yè)化規(guī)模； 2價格便宜； 3安全； 4使用方便 ? 。表達產(chǎn)物可糖基化、酰胺化、磷酸化及可完成對亞基的正確裝配等翻譯后加工過程，使表達產(chǎn)物具有與高等動物細胞一致的免疫原性 ? 不足之處： ? 轉(zhuǎn)基因植物中重組蛋白 含量低 ? 植物外源蛋白的提取和純化還沒有達到產(chǎn)業(yè)化水平，還停留在實驗室水平。 ? 目前的轉(zhuǎn)基因植物疫苗離臨床還很遠，限制因素，包括： ? 表達量偏低 (從現(xiàn)有的研究中，外源基因所表達的重組蛋白大約只占植物中總可溶性蛋白的 %% ? 免疫效果較差 ，口服免疫可能引起口服免疫耐受等。 ? 人體內(nèi)含有甚微但具有重要臨床價值的蛋白或多肽也可在植物系統(tǒng)中表達。如人生長激素、人血清蛋白、人干擾素 p、人蛋白 C、人表皮生長因子、紅細胞生長素、脂肪酶、乳鐵蛋白、水蛭素、膠原蛋白等。 ? 表 57 利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)其他藥物 ? 盡管在利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)人源蛋白或多肽已取得了很大的進展，但在生產(chǎn)實踐中仍然面臨的主要問題是外源基因的表達水平低的問題，一般來說，在臨床應(yīng)用中需要純化的重組蛋白表達量應(yīng)占轉(zhuǎn)化細胞 TSP (總可溶性蛋白 )的 1 %以上時才具有商業(yè)價值 。因此，真正用于生產(chǎn)還需要做大量工作。 轉(zhuǎn)基因植物目前仍存在的問題 ? 產(chǎn)量偏低、糖基化不可靠性 、生物安全性和公眾接受性以及工業(yè)化技術(shù)問題； ? 技術(shù)上的問題。轉(zhuǎn)基因整合后的有效性依賴于其表達水平，而表達水平受到許多因素制約。 ? 目前轉(zhuǎn)基因植物普遍存在目的基因產(chǎn)物產(chǎn)出率低、基因沉默或不穩(wěn)定表達的現(xiàn)象，這已成為轉(zhuǎn)基因植物表達技術(shù)的主要障礙。 本文來自網(wǎng)絡(luò)，請不要使用盜版文檔，尊重作者的辛苦勞動，謝謝 我愛朱丹老婆 中華人民共和國 20230808080808080808080808080808080808080808080808080808080808080 Lvdd我愛你ZDLP 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT