【正文】 w box: 5’TATAAT3’35 region: 5’TTGACA3’真核生物中（ Ineukaryoticpromoter） :Enhancers（增強子） : may be located hundreds or thousands of basepairs upstream from the Tc start site. 25 position： CAAT 25 position with the consensus sequence 5’TATAAAT3’ (the TATA or Hogness box) and a sequence in the 75 region with the consensus 5’GG(T/C)CAATCT3’, known as the CAAT box.EcoRISacIPstIHindIII1） SacI2） TdT+dTTPEcoRISacITTTTTHindIIITTTTTAAAAAmRNAAMVRT+dNTPTTTTTTTTTTAAAAA TdT+dCTPTTTTTAAAAATTTTT CCCCEcoRISacIPstIHindIIICCCC1） HindIII2）取大片段TTTTT CCCCSacIHindIIIPstI1)PstI2)TdT+dGTPEcoRIGGGGHindIIIGGGGPstISacI1） HindIII2）取小片段HindIII GGGGBAC:bacterialartificialchromosomesYAC:yeastartificialchromosomesCloninglargeDNAfragmentsinBACandYACTEL TELtrp/ARS/CENYACuraCloninginaYACvectorHighmolecularweightgenomicDNAPartialdigestUpto500kb1.兩臂 DNA片段的制備 :pYAC4BamHI/EcoRI脫磷酸化2.供體 DNA片段的制備 :瓊脂糖凝膠 DNA樣品的制備 EcoRI部分酶切 脈沖場凝膠電泳 片段回收和純化3.DNA的連接4.重組 DAN分子的轉(zhuǎn)化 :原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法5.轉(zhuǎn)化子的保存 :單菌落保存于 96孔平板中利用 YAC載體構(gòu)建基因組文庫酵母人工染色體構(gòu)建（ 4） SMART(SwitchMechanismAtthe5’endofRNATemplates) 1) 當(dāng)反轉(zhuǎn)錄酶合成到 mRNA模板 5’端后，它會在第一鏈的 3’端加上幾個 C；2) 合成的寡核苷酸 G與 C配對；3) 反轉(zhuǎn)錄酶以新合成的 cDNA為模板，繼續(xù)合成第二條 cDNA鏈；4) LD PCR—Long Distance PCR1.基因特異性常來自結(jié)構(gòu)基因，因此僅代表某種生物的一小部分遺傳信息，且只代表那些正在表達(dá)的基因的遺傳信息： 1—5%mRNA ， 80—85%rRNA ， 10—15%tRNA2.器官特異性不同器官或組織的功能不一樣，因而有的結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)就具有器官特異性，故由不同器官提取的 mRNA所組建的 cDNA文庫也就不同cDNA文庫的特點4.不均勻性在同一個 cDNA文庫中，不同類型的 cDNA分子的數(shù)目是大不相同的，盡管它們都是由單拷貝基因轉(zhuǎn)錄而來的。這與基因組文庫中的單拷貝基因均具有相同的克隆數(shù)相較，這是兩種文庫的另一差別。5.各 cDNA均可獲得表達(dá)（一般選用的載體都是表達(dá)型的）3.代謝或發(fā)育特異性處于不同代謝階段（或發(fā)育階段）的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)亦不相同 ？為什么基因工程中需選 II型酶。 II restriction endonucleases的命名原則。（ EcoR I）？、 ExoIII、 DNase I，酶的作用特點。 CIP分別指什么酶，作用特點是什么？。 Ligase的特點。 polymerase 與 DNA Ligase的異同點？思考題：9. A fragment of mouse DNA with EcoRI sticky ends carries the gene M. This DNA ,which is 8kb long, is inserted into the bacterial plasmid pBR322 at the EcoRI rebinant plasmid is cleaved with two different restriction enzyme. The size fragments that were obtained on an agrose gel are isted below. Draw the restriction map for this sequence. EcoRI BamHI EcoRI + BamHI 思考題：The EndThank You!靜夜四無 鄰 ，荒居舊 業(yè)貧 。 三月 21三月 21Wednesday, March 24, 2023雨中黃葉 樹 ，燈下白 頭 人。 10:55:4810:55:4810:553/24/2023 10:55:48 AM1以我獨沈久，愧君相 見頻 。 三月 2110:55:4810:55Mar2124Mar211故人江海 別 ，幾度隔山川。 10:55:4810:55:4810:55Wednesday, March 24, 20231乍 見 翻疑夢，相悲各 問 年。 三月 21三月 2110:55:4810:55:48March 24, 20231他 鄉(xiāng) 生白 發(fā) ，舊國 見 青山。 24 三月 202310:55:48 上午 10:55:48三月 211比不了得就不比，得不到的就不要。 三月 2110:55 上午 三月 2110:55March 24, 20231行 動 出成果，工作出 財 富。 2023/3/24 10:55:4810:55:4824 March 20231做前，能 夠環(huán)視 四周；做 時 ，你只能或者最好沿著以腳 為 起點的射 線 向前。 10:55:48 上午 10:55 上午 10:55:48三月 21沒有失 敗 ，只有 暫時 停止成功！。 三月 21三月 21Wednesday, March 24, 2023很多事情努力了未必有 結(jié) 果，但是不努力卻什么改 變 也沒有。 10:55:4810:55:4810:553/24/2023 10:55:48 AM1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的 積 累。 三月 2110:55:4810:55Mar2124Mar211世 間 成事，不求其 絕對圓滿 ，留一份不足，可得無限完美。 10:55:4810:55:4810:55Wednesday, March 24, 20231不知香 積 寺，數(shù)里入云峰。 三月 21三月 2110:55:4810:55:48March 24, 20231意志 堅 強 的人能把世界放在手中像泥 塊 一 樣 任意揉捏。 24 三月 202310:55:48 上午 10:55:48三月 211楚塞三湘接， 荊門 九派通。 三月 2110:55 上午 三月 2110:55March 24, 20231少年十五二十 時 ，步行 奪 得胡 馬騎 。 2023/3/24 10:55:4810:55:4824 March 20231空山新雨后，天氣晚來秋。 10:55:48 上午 10:55 上午 10:55:48三月 21 楊 柳散和 風(fēng) ，青山澹吾 慮 。 三月 21三月 21Wednesday, March 24, 2023 閱讀 一切好 書 如同和 過 去最杰出的人 談話 。 10:55:4810:55:4810:553/24/2023 10:55:48 AM1越是沒有本 領(lǐng) 的就越加自命不凡。 三月 2110:55:4810:55Mar2124Mar211越是無能的人，越喜 歡 挑剔 別 人的 錯 兒。 10:55:4810:55:4810:55Wednesday, March 24, 20231知人者智，自知者明。 勝 人者有力，自 勝 者 強 。 三月 21三月 2110:55:4810:55:48March 24, 20231意志 堅 強 的人能把世界放在手中像泥 塊 一 樣 任意揉捏。 24 三月 202310:55:48 上午 10:55:48三月 211最具挑 戰(zhàn) 性的挑 戰(zhàn) 莫 過 于提升自我。 三月 2110:55 上午 三月 2110:55March 24, 20231 業(yè) 余生活要有意 義 ，不要越 軌 。 2023/3/24 10:55:4810:55:4824 March 20231一個人即使已登上 頂 峰，也仍要自 強 不息。 10:55:48 上午 10:55 上午 10:55:48三月 21MOMODAPOWERPOINTLorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看專 家告 訴