【正文】 box) and a sequence in the 75 region with the consensus 5’ GG(T/C)CAATCT3’ , known as the CAAT box. EcoR I Sac I Pst I Hind III 1） SacI 2） TdT+dTTP EcoR I Sac I TTTTT Hind III TTTTT AAAAA mRNA AMVRT+dNTP TTTTT TTTTT AAAAA TdT+dCTP TTTTT AAAAA TTTTT CCCC EcoR I SacI Pst I Hind III CCCC 1） HindIII 2）取大片段 TTTTT CCCC Sac I Hind III Pst I 1)PstI 2)TdT+dGTP EcoR I GGGG Hind III GGGG Pst I Sac I 1） HindIII 2）取小片段 Hind III GGGG BAC: bacterial artificial chromosomes YAC: yeast artificial chromosomes Cloning large DNA fragments in BAC and YAC TEL TEL trp/ARS/CEN YAC ura Cloning in a YAC vector High molecular weight genomic DNA Partial digest Up to 500kb 1. 兩臂 DNA片段的制備 : pYAC4 BamHI/EcoRI 脫磷酸化 2. 供體 DNA片段的制備 : 瓊脂糖凝膠 DNA樣品的制備 EcoRI部分酶切 脈沖場凝膠電泳 片段回收和純化 3. DNA的連接 4. 重組 DAN分子的轉(zhuǎn)化 : 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法 5. 轉(zhuǎn)化子的保存 : 單菌落保存于 96孔平板中 利用 YAC載體構(gòu)建基因組文庫 S u p 4C E N 4 A R S 1T R P 1OripY AC 4E Sm S X B X B 紅色U ra+, Try+ 轉(zhuǎn)化子菌落脈沖場凝膠電泳酵母人工染色體構(gòu)建 （ 4） SMART (Switch Mechanism At the 5’ end of RNA Templates) 1) 當(dāng)反轉(zhuǎn)錄酶合成到 mRNA模板 5’端后，它會(huì)在第一鏈的 3’端加上幾個(gè) C； 2) 合成的寡核苷酸 G與 C配對； 3) 反轉(zhuǎn)錄酶以新合成的 cDNA為模板，繼續(xù)合成第二條 cDNA鏈； 4) LD PCR— Long Distance PCR 1. 基因特異性 常來自結(jié)構(gòu)基因，因此僅代表某種生物的一小部分遺傳信息，且只代表那些正在表達(dá)的基因的遺傳信息：1— 5% mRNA， 80— 85% rRNA， 10— 15% tRNA 2. 器官特異性 不同器官或組織的功能不一樣，因而有的結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)就具有器官特異性，故由不同器官提取的 mRNA所組建的 cDNA文庫也就不同 cDNA文庫的特點(diǎn) 4. 不均勻性 在同一個(gè) cDNA文庫中，不同類型的 cDNA分子的數(shù)目是大不相同的，盡管它們都是由單拷貝基因轉(zhuǎn)錄而來的。這與基因組文庫中的單拷貝基因均具有相同的克隆數(shù)相較，這是兩種文庫的另一差別。 5. 各 cDNA均可獲得表達(dá)（一般選用的載體都是表達(dá)型的） 3. 代謝或發(fā)育特異性 處于不同代謝階段（或發(fā)育階段）的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)亦不相同 ？為什么基因工程中需選 II型酶。 II restriction endonucleases的命名原則。（ EcoR I） ？ 、 ExoIII、 DNase I，酶的作用特點(diǎn)。 。 CIP分別指什么酶，作用特點(diǎn)是什么？。 Ligase的特點(diǎn)。 polymerase 與 DNA Ligase的異同點(diǎn)？ 思考題： 9. A fragment of mouse DNA with EcoRI sticky ends carries the gene M. This DNA ,which is 8kb long, is inserted into the bacterial plasmid pBR322 at the EcoRI rebinant plasmid is cleaved with two different restriction enzyme. The size fragments that were obtained on an agrose gel are isted below. Draw the restriction map for this sequence. EcoRI BamHI EcoRI + BamHI 思考題： 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , March 28, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 16:48:2216:48:2216:483/28/2023 4:48:22 PM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 :48:2216:48Mar2328Mar23 1故人江海別，幾度隔山川。 16:48:2216:48:2216:48Tuesday, March 28, 2023 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 :48:2216:48:22March 28, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 3月 28日星期二 下午 4時(shí) 48分 22秒 16:48: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 2023年 3月 下午 4時(shí) 48分 :48March 28, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 2023年 3月 28日星期二 4時(shí) 48分 22秒 16:48:2228 March 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 下午 4時(shí) 48分 22秒 下午 4時(shí) 48分 16:48: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 , March 28, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 16:48:2216:48:2216:483/28/2023 4:48:22 PM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 :48:2216:48Mar2328Mar23 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 16:48:2216:48:2216:48Tuesday, March 28, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :48:2216:48:22March 28, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 3月 28日星期二 下午 4時(shí) 48分 22秒 16:48: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 3月 下午 4時(shí) 48分 :48March 28, 2023 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 2023年 3月 28日星期二 4時(shí) 48分 22秒 16:48:2228 March 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 下午 4時(shí) 48分 22秒 下午 4時(shí) 48分 16:48: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 , March 28, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 16:48:2216:48:2216:483/28/2023 4:48:22 PM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :48:2216:48Mar2328Mar23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 16:48:2216:48:2216:48Tuesday, March 28, 2023 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :48:2216:48:22March 28, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 3月 28日星期二 下午 4時(shí) 48分 22秒 16:48: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 3月 下午 4時(shí) 48分 :48March 28, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 3月 28日星期二 4時(shí) 48分 22秒 16:48:2228 March 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 下午 4時(shí) 48分 22秒 下午 4時(shí) 48分 16:48: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看 專家告訴