6基因的重組與轉(zhuǎn)移-資料下載頁
2025-01-19 01:14本頁面
【正文】 TDNA整合進植物基因組的機制比較復雜，對其進行研究有助于建立轉(zhuǎn)基因新方法。插入 TDNA區(qū)的基因本身與TDNA的轉(zhuǎn)移無關，僅兩側(cè)的 25bp同向重復序列是必須的 ,而且右邊界更重要。其中 14bp是保守的。 整合進植物基因組的 TDNA會有一定程度的缺失、重復、填充和超界發(fā)生，甚至有整個質(zhì)粒整合進基因組的報道。 TDNA轉(zhuǎn)移主要與 vir區(qū)各基因的協(xié)調(diào)作用有關。 ?大片段 DNA的轉(zhuǎn)移 通常轉(zhuǎn)移的基因都是一個或幾個功能基因，片段比較?。?30kb)?？墒?，植物的一些性狀，如抗病、抗蟲、抗逆境、高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)等均為數(shù)量性狀，或者相關的基因往往成簇排列。這些性狀的改造需要一個能將大片段 DNA轉(zhuǎn)入植物細胞并穩(wěn)定表達的體系。 最近構建了一種新型載體，它具有細菌人工染色體（ BACs)和 農(nóng)桿菌雙元載體 的特點，能轉(zhuǎn)移大片段 DNA。即BiBAC載體，目前在主要農(nóng)作物的改良中應用還比較困難，但在水稻中可以有效應用。 功能基因組的研究要求創(chuàng)造很多突變體，需要尋求簡單的轉(zhuǎn)基因方法。主要在擬南芥中應用，大量的植株抽真空20分鐘，使細菌進入植物細胞間隙，或者將花朵抽真空讓細菌進入，這種方法避免了細胞培養(yǎng)過程，但轉(zhuǎn)化效率不高。 ? 植株原位轉(zhuǎn)化 （ in planta transformation) SAAT: sonicationassisted Agrobacteriummediated transformation Transgenic Research 6, 329336. 超聲波生物作用機制： ? 超聲波的概念：頻率高于人類聽覺上限頻率 (約 20230赫 )的聲波，稱為超聲波，或稱超聲。 ? 利用低聲強脈沖超聲波的物理作用，擊穿細胞膜造成通道，使外源 DNA 進入細胞， 直接轉(zhuǎn)化細胞 ，包括有細胞壁的植物細胞。 ? 利用超聲波給植物轉(zhuǎn)化受體創(chuàng)造大量的，分布均勻的微小創(chuàng)口， 提高農(nóng)桿菌侵染效率 。 Fig. 3. Cross section of control (A) and SAATtreated (B and C) immature soybean cotyledons. Bacteria are indicated by the arrows. The epidermal cells of the non SAATtreated tissues (A) are structurally intact and bacteria can be seen on the surface. In SAATtreated samples, bacteria were clearly evident in epidermal cells (B) and also deeper within the tissue (C) indicating wounding of both surface and subsurface tissue. Bar. 50μm. Trick et SAAT: sonicationassisted Agrobacteriummediated transformation Transgenic Research 6, 329336. Efficient Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of soybeans using an embryonic tip regeneration system,Planta (2023) 219: 1042–1049 （ 1）原理： 三、導入哺乳動物細胞 1. 磷酸鈣沉淀法 HEPES緩沖鹽水與含有氯化鈣和 DNA的溶液緩慢混合，會形成含磷酸鈣和DNA的沉淀。 依據(jù)不同的細胞類型，平皿上最多能有 10%的細胞能吸收 DNA沉淀。 不需要載體。 （ 2）特點： 脂質(zhì)體有商業(yè)試劑盒（如 Life Technologies）。 2. 脂質(zhì)體（ lipofectin）載體法 脂類包埋 DNA，通過細胞膜進入細胞。 直接把外源 DNA注射到宿主細胞核里，使其整合到染色體上。 3. 顯微注射法 (microinjection) 二乙氨乙基（ diethylaminoehtyl， DEAE）葡萄糖能促進哺乳動物細胞攝入外源 DNA。 4. DEAE葡萄糖傳染法 二乙氨乙基（ DE AE ）+ + + + + + + + +++++++++++++++DNA 二乙氨乙基（ DEA E ）+ + + + + + + + +++++++++++++++葡聚糖 葡聚糖 +DNA 吸附到細胞表面后被細胞吞入，部分 DNA可以進入到細胞核里。 DEAEdextran 細胞 外源 DNA 預處理 攝入 DEAEdextran 外源 DNA 細胞 混合 DEAEdextran對細胞有毒 ! 5. 病毒（ virus）介導 （詳見另外章節(jié)） 外源基因?qū)爰毎姆椒? 18 演講完畢，謝謝觀看！
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