dna重組培訓(xùn)講義-資料下載頁
2025-01-08 02:14本頁面
【正文】 酶， 轉(zhuǎn)座酶 和解離酶 復(fù)制轉(zhuǎn)座作用引起了轉(zhuǎn)座子的一個(gè)復(fù)制，它插入到一個(gè)接受位點(diǎn)。捐贈(zèng)位點(diǎn)保持不變，以致捐贈(zèng)者和接受者都有轉(zhuǎn)座子的一個(gè)復(fù)制 非復(fù)制轉(zhuǎn)座作用允許一個(gè)轉(zhuǎn)座子像物體一樣從捐贈(zèng)們點(diǎn)移動(dòng)到接受位點(diǎn)，這樣就在捐贈(zèng)位點(diǎn)留下了一個(gè)斷裂。 保守的轉(zhuǎn)座作用描述了另一種非復(fù)制結(jié)果，因子在捐贈(zèng)位點(diǎn)被切除，然后通過一連串的反應(yīng)插入到一個(gè)靶位，這樣每一個(gè)核苷粘合都被保留。 復(fù)制轉(zhuǎn)座作用通過一個(gè)共合體進(jìn)行 非復(fù)制轉(zhuǎn)座作用借助斷裂和重聚進(jìn)行 TnA轉(zhuǎn)座作用： 復(fù)制型轉(zhuǎn)座需要轉(zhuǎn)座酶和分解酶 ? tnpA基因產(chǎn)物是一個(gè)轉(zhuǎn)座酶 ? TnpR基因的產(chǎn)物具有二重功能，蛋白擔(dān)任著基因抑制子表達(dá)和供應(yīng)分解酶的功能。 ? TnpR抑制了所有 tnpA和自己的基因的轉(zhuǎn)錄。 共合體結(jié)構(gòu)的解離部位稱為 res，即是解離酶的結(jié)合部位。位點(diǎn) I是遺傳上作為res部位的區(qū)域，它的缺失將使解離反應(yīng)完全不能進(jìn)行。然而解離反應(yīng)也與部位 II和 III有關(guān)。因?yàn)槠渲腥魏我粋€(gè)部位缺失，解離反應(yīng)都變得很弱。 三、 轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座的特征 ? （ 1）轉(zhuǎn)座不依賴于靶序列的同源性 ? （ 2）轉(zhuǎn)座后靶序列重復(fù) ? （ 3）轉(zhuǎn)座子的插入具有專一性 ? （ 4）轉(zhuǎn)座具有排他性 ? （ 5）轉(zhuǎn)座具有極性效應(yīng) ? （ 6）活化臨近的沉默基因 ? （ 7）區(qū)域性優(yōu)先 轉(zhuǎn)座頻率的調(diào)控 ? 對于細(xì)胞來說，控制轉(zhuǎn)座子調(diào)換的頻率是很重要的，轉(zhuǎn)座子必須能維持某一最小的移動(dòng)頻率，因?yàn)樘蟮念l率會(huì)破壞宿主細(xì)胞，研究表明每一個(gè)轉(zhuǎn)座子都有控制它自身調(diào)換頻率的機(jī)制。 通過反義 RNA的翻譯水平控制 IS10R外側(cè)邊緣兩個(gè)啟動(dòng)子 PIN弱啟動(dòng)子 控制 IS10R的轉(zhuǎn)錄 POUT—強(qiáng)啟動(dòng)子 右向轉(zhuǎn)錄宿主 DNA INRNA和 OUTRNA 有 36bp的重疊 穩(wěn)定性： OUTRNA??INRNA 大量 OUTRNA作為 INRNA的反義 RNA 四、轉(zhuǎn)座子的某些遺傳學(xué)效應(yīng) ? 1）引起插入突變 ? 2）插入位置上出現(xiàn)新的基因 ? 3）造成插入位置上出現(xiàn)靶 DNA的少數(shù)核苷酸對的重復(fù) ? 4）轉(zhuǎn)座后原來位置上保持原有的轉(zhuǎn)座子 ? 5）引起染色體的畸變 ? 6）切除 五、 真核生物的轉(zhuǎn)座因子 ? （一）玉米的控制因子 ? AcDs系統(tǒng)是玉米轉(zhuǎn)座因子系統(tǒng)之一。 Ac屬于自主控制因子 ，或稱激活因子 。 ? Ds屬于非自主因子 ，又稱解離因子 。 ? Ac能自主轉(zhuǎn)座，并形成不穩(wěn)定的基因突變，但不使染色體斷裂；它能使 Ds因子活化、轉(zhuǎn)座，并通過 Ds控制結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。 Ds由 Ac因子中間序列的缺失而形成，從而失去轉(zhuǎn)座酶功能。當(dāng) Ac因子存在時(shí)，能活化 Ds，使其在基因組內(nèi)轉(zhuǎn)座或插入結(jié)構(gòu)基因之內(nèi)，導(dǎo)致基因失活或改變結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)水平，也可使染色體特定部位斷裂，引起缺失或重組。 （二）果蠅的轉(zhuǎn)座元件 ? 果蠅中存在著幾個(gè)轉(zhuǎn)座因子的家族。 P因子是黑腹果蠅的一種自主性轉(zhuǎn)座因子， P因子能誘發(fā)果蠅雜種的不育。雜種不育只發(fā)生在 P品系雄性與 M品系雌性果蠅之間。 P品系果蠅染色體攜帶P因子， M品系不含 P因子。當(dāng) P雄性與 M雌性果蠅雜交時(shí)，子代體細(xì)胞正常，生殖細(xì)胞則發(fā)育不全，因而無后代。 1 2 3 4 5 6 7 8 果蠅 P因子導(dǎo)致的 mRNA剪接異常 生殖細(xì)胞 體細(xì)胞 1 2 4 5 6 7 8 AAAA 1 2 4 5 6 3 AAAA 轉(zhuǎn)座酶 第四節(jié) 逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子 ? 轉(zhuǎn)座過程中需要以 RNA為中間體，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄過程再分散到基因組中，稱為逆轉(zhuǎn)錄子（ retroposon）。 （ retrotransposon） ? 在很多高等生物的基因組中，也存在著與逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組非常相似的逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子，它們位于較長的正向重復(fù)或長末端重復(fù) (long terminal repeat, LTR)區(qū)域內(nèi)。 逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組編碼逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，逆轉(zhuǎn)錄酶在侵染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中把 RNA轉(zhuǎn)換成線型雙鏈DNA。 線型 DNA進(jìn)入細(xì)胞核 ,由整合酶催化整合作用 ,整合后的原病毒 DNA通過宿主系統(tǒng)產(chǎn)生病毒 RNA。 病毒 RNA，雙鏈 DNA， 整合進(jìn)宿主 DNA 演講完畢，謝謝觀看！
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