【正文】 ? For a minor ponent at 5% of the mobile phase, a 30% relative adjustment allows a range of % whereas a 2% absolute adjustment allows a range of 37%, the absolute value being in this case the larger. ? No other ponent is altered by more than 10% absolute. 3/1/2023 54 山東省藥品檢驗(yàn)所 EP() ? When column dimensions are changed,the flow rate may be ajusted as necessary using equation: 21122212 FFdldl?F1：規(guī)定的流速 F2：調(diào)整后的流速 l1：規(guī)定的柱長 l2：實(shí)際所用的柱長 d1：規(guī)定柱子的內(nèi)徑 d2：實(shí)際所用柱子的內(nèi)徑 3/1/2023 55 山東省藥品檢驗(yàn)所 EP() pH of the aqueous ponent of the mobile phase concentration of salts in buffer position of the mobile phase Wavelength of UV detector column temperature no adjustment permitted no adjustment permitted ? the system suitability requirements are fulfilleld ? the principal peak elute within 177。15% of the indicated retention time ? elution power is not weaker than before no adjustment permitted 177。5℃ column length interal diameter particle size flow rate injection volume 177。70% 177。25% no adjustment permitted same as isocratic elution may be decreased no increase permitted ?Gradient elution： more critical than with isocratic elution 3/1/2023 56 山東省藥品檢驗(yàn)所 HPLC的應(yīng)用及方法開發(fā) 3/1/2023 57 山東省藥品檢驗(yàn)所 HPLC應(yīng)用 類型 定 義 I 原料藥或藥物制劑活性成分中主要成分的分析程序 如含量測(cè)定 II 原料藥中雜質(zhì)檢查或藥物制劑中降解產(chǎn)物的分析程序，這些分析程序包 括定量試驗(yàn)或限度試驗(yàn) III 用于性能參數(shù)測(cè)試的分析程序 如溶出度、釋放度 IV 鑒別試驗(yàn) ?HPLC 可以用來干什么？ 3/1/2023 58 山東省藥品檢驗(yàn)所 方法開發(fā)的指導(dǎo)原則 ?ICH ?USP ?《中國藥典》 3/1/2023 59 山東省藥品檢驗(yàn)所 ICH ? ICH(人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì) )三方協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則 Q2A：分析方法論證的文本 ICH三方協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則 Q2B：方法學(xué) ICH三方協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則 3/1/2023 60 山東省藥品檢驗(yàn)所 ICH 分析方法的類型 項(xiàng)目 鑒別 雜質(zhì)檢查 含量分析，溶出 度，含量 /效價(jià) 定量 限度檢測(cè) 準(zhǔn)確度 － + － + 精 密 度 重復(fù)性 － + － + 中間精密度 － + △ － + △ 專屬性 + + + + 檢測(cè)限度 － － + － 定量限度 － + － － 線性 － + － + 范圍 － + － + ①通常而非絕對(duì) ② △ 如已平評(píng)價(jià)重復(fù)性，可不再評(píng)價(jià) 3/1/2023 61 山東省藥品檢驗(yàn)所 ICH ? 值得一提的：表中沒有列出 耐用性 ，但在分析方法研究過程的適當(dāng)階段，應(yīng)予以考慮！ ? 如果測(cè)量結(jié)果對(duì)分析條件的變化時(shí)敏感的，那么該分析條件就應(yīng)當(dāng)適當(dāng)控制或在方法中注明。通過耐用性評(píng)估，建立一系列的系統(tǒng)適用性參數(shù)，以確保在任何時(shí)候使用該分析方法都是有效的。 ? 在 HPLC中典型變化的例子： 流動(dòng)相 pH值變化 流動(dòng)相組分變化 不同柱子 溫度 流速 3/1/2023 62 山東省藥品檢驗(yàn)所 USP ? 1225 Validation of pendial procedures Typical Analytical Characteristics Used in Method Validation Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantitation Limit Linearity Range Robustness 3/1/2023 63 山東省藥品檢驗(yàn)所 USP 檢測(cè)技術(shù) I II III IV 定量試驗(yàn) 限度試驗(yàn) HPLC P， S， L P， S， LOQ S， LOD P S P＝精密度； S＝專屬性； L＝線性： LOD＝檢測(cè)限； LOQ＝定量限 HPLC方法中的要求： 3/1/2023 64 山東省藥品檢驗(yàn)所 CHP(2023) ? 《中國藥典》 2023年版附錄 ⅩⅨ A 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則 ? 基本與 ICH相同，增加了耐用性，且比ICH詳細(xì)。 3/1/2023 65 山東省藥品檢驗(yàn)所 色譜柱的選擇 鍵合相 應(yīng)用 硅膠 小分子有機(jī)物，天然產(chǎn)物，脂溶性維生素，維生素 E C18 藥物，天然產(chǎn)物，農(nóng)用化學(xué)品，維生素，堿性化合物，一般的反相應(yīng)用 大極性化合物，藥物，維生素，抗生素 親水性蛋白質(zhì)，寡聚核苷酸 堿性化合物，在高 pH條件下增加保留和載樣量 C12 藥物，天然產(chǎn)物，農(nóng)用化學(xué)品，維生素，氨基酸，堿性化合物，一般的反相應(yīng)用 C8 藥物，雌性激素，堿性化合物，一般反相應(yīng)用 C5 極性化合物及疏水性蛋白質(zhì) C4 疏水性蛋白質(zhì) 苯基 極性和芳香化合物，抗生素，油脂，酚類，甜味劑 氰基 藥物，脂類，類固醇，鄰苯二甲酸鹽，含有羧基、羰基、伯、仲、叔胺基的化合物 氨基 糖類，糖醇，陰離子化合物，類固醇，維生素，核苷酸，寡聚核苷酸 SCX 胺類和聚胺類化合物，核苷酸，多肽 3/1/2023 66 山東省藥品檢驗(yàn)所 色譜柱的選擇 ? 特殊的： ? 含光學(xué)異構(gòu)體（對(duì)映體） ——特殊的手性柱 ? 含其他異構(gòu)體（立體、位置） ——一般正相柱最佳，尤其用原硅膠柱 ? 無機(jī)鹽混合物 ——離子色譜法 ...... 3/1/2023 67 山東省藥品檢驗(yàn)所 耐用性 ? 耐用性試驗(yàn)經(jīng)常會(huì)提到用不同類型的色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。 ? 所謂的不同類型 *： ? A型色譜柱：早期色譜柱，無定形或球形硅膠，硅膠純度較低，重金屬含量高，鍵合密度較低，碳載量較低，未采用封尾技術(shù)或不完全封尾技術(shù)，硅羥基活性高，殘留硅羥基導(dǎo)致的“第二效應(yīng)”較強(qiáng)，能與堿性化合物、酸性化合物發(fā)生氫鍵和離子交換作用，造成峰拖尾，但對(duì)于某些極性化合物，硅羥基是組分分離的主要因素。 *引自中檢所 SOP 3/1/2023 68 山東省藥品檢驗(yàn)所 ? B型色譜柱：球形高純硅膠，重金屬含量較低，鍵合密度較高，碳載量較高，采用非極性基團(tuán)封尾技術(shù)，使硅羥基活性降低，能改善堿性化合物、酸性化合物的分離。 ? E型色譜柱： 2種亞型， Ec型采用極性基團(tuán)封尾（如二醇基）， Eb型則是在十八烷基中嵌入極性基團(tuán)（如甲酰胺基）使填料親水性增加，能用 100%水溶液作為流動(dòng)相，具有獨(dú)特選擇性。 3/1/2023 69 山東省藥品檢驗(yàn)所 ? 不同的色譜柱公司都有不同的柱子供選擇。 ? 可以根據(jù)需要購買。 3/1/2023 70 山東省藥品檢驗(yàn)所 ? 高效液相色譜法的知識(shí)還有很多很多 ...... ? 特別是高效液相色譜法的建立更是學(xué)問多多 ...... ? 在以后的工作中，相互學(xué)習(xí)，相互探討 ...... 3/1/2023 71 山東省藥品檢驗(yàn)所 3/1/2023 72 山東省藥品檢驗(yàn)所 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH