【正文】 ? 可以根據(jù)需要購買。 ? E型色譜柱： 2種亞型， Ec型采用極性基團封尾（如二醇基）， Eb型則是在十八烷基中嵌入極性基團（如甲酰胺基）使填料親水性增加，能用 100%水溶液作為流動相，具有獨特選擇性。 ? 所謂的不同類型 *： ? A型色譜柱：早期色譜柱，無定形或球形硅膠，硅膠純度較低，重金屬含量高，鍵合密度較低，碳載量較低，未采用封尾技術(shù)或不完全封尾技術(shù)，硅羥基活性高，殘留硅羥基導(dǎo)致的“第二效應(yīng)”較強，能與堿性化合物、酸性化合物發(fā)生氫鍵和離子交換作用，造成峰拖尾，但對于某些極性化合物，硅羥基是組分分離的主要因素。 ? 在 HPLC中典型變化的例子： 流動相 pH值變化 流動相組分變化 不同柱子 溫度 流速 3/1/2023 62 山東省藥品檢驗所 USP ? 1225 Validation of pendial procedures Typical Analytical Characteristics Used in Method Validation Accuracy Precision Specificity Detection Limit Quantitation Limit Linearity Range Robustness 3/1/2023 63 山東省藥品檢驗所 USP 檢測技術(shù) I II III IV 定量試驗 限度試驗 HPLC P， S， L P， S， LOQ S， LOD P S P＝精密度； S＝專屬性； L＝線性： LOD＝檢測限； LOQ＝定量限 HPLC方法中的要求： 3/1/2023 64 山東省藥品檢驗所 CHP(2023) ? 《中國藥典》 2023年版附錄 ⅩⅨ A 藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則 ? 基本與 ICH相同，增加了耐用性，且比ICH詳細。25% no adjustment permitted same as isocratic elution may be decreased no increase permitted ?Gradient elution： more critical than with isocratic elution 3/1/2023 56 山東省藥品檢驗所 HPLC的應(yīng)用及方法開發(fā) 3/1/2023 57 山東省藥品檢驗所 HPLC應(yīng)用 類型 定 義 I 原料藥或藥物制劑活性成分中主要成分的分析程序 如含量測定 II 原料藥中雜質(zhì)檢查或藥物制劑中降解產(chǎn)物的分析程序，這些分析程序包 括定量試驗或限度試驗 III 用于性能參數(shù)測試的分析程序 如溶出度、釋放度 IV 鑒別試驗 ?HPLC 可以用來干什么？ 3/1/2023 58 山東省藥品檢驗所 方法開發(fā)的指導(dǎo)原則 ?ICH ?USP ?《中國藥典》 3/1/2023 59 山東省藥品檢驗所 ICH ? ICH(人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會 )三方協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則 Q2A：分析方法論證的文本 ICH三方協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則 Q2B：方法學(xué) ICH三方協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則 3/1/2023 60 山東省藥品檢驗所 ICH 分析方法的類型 項目 鑒別 雜質(zhì)檢查 含量分析，溶出 度，含量 /效價 定量 限度檢測 準確度 － + － + 精 密 度 重復(fù)性 － + － + 中間精密度 － + △ － + △ 專屬性 + + + + 檢測限度 － － + － 定量限度 － + － － 線性 － + － + 范圍 － + － + ①通常而非絕對 ② △ 如已平評價重復(fù)性，可不再評價 3/1/2023 61 山東省藥品檢驗所 ICH ? 值得一提的：表中沒有列出 耐用性 ，但在分析方法研究過程的適當(dāng)階段，應(yīng)予以考慮！ ? 如果測量結(jié)果對分析條件的變化時敏感的，那么該分析條件就應(yīng)當(dāng)適當(dāng)控制或在方法中注明。5℃ column length interal diameter particle size flow rate injection volume 177。 ? For a minor ponent at 5% of the mobile phase, a 30% relative adjustment allows a range of % whereas a 2% absolute adjustment allows a range of 37%, the absolute value being in this case the larger. ? No other ponent is altered by more than 10% absolute. 3/1/2023 54 山東省藥品檢驗所 EP() ? When column dimensions are changed,the flow rate may be ajusted as necessary using equation: 21122212 FFdldl?F1：規(guī)定的流速 F2：調(diào)整后的流速 l1：規(guī)定的柱長 l2：實際所用的柱長 d1：規(guī)定柱子的內(nèi)徑 d2：實際所用柱子的內(nèi)徑 3/1/2023 55 山東省藥品檢驗所 EP() pH of the aqueous ponent of the mobile phase concentration of salts in buffer position of the mobile phase Wavelength of UV detector column temperature no adjustment permitted no adjustment permitted ? the system suitability requirements are fulfilleld ? the principal peak elute within 177。 2 % absolute, whichever is the larger。50% a larger adjustment is acceptable （ see example） may be decreased no increase permitted 3/1/2023 53 山東省藥品檢驗所 EP() ? Composition of the mobile phase: the amount of the minor solvent ponent may be adjusted by 177。70% 177。2% absolute whichever is larger. No ponent can be altered by more than 10% absolute （ see example） no adjustment permitted 177。 (nonionisable) within 177。 10% absolute in any ponent. Therefore the second ponent may be adjusted only within the range of 25% to 45% absolute. For the third ponent, 30% of 5 is % absolute. In all cases, a sufficient quantity of the first ponent is used to give a total of 100%.Therefore, mixture ranges of 50:45:5 to 70:25:5 or :35: to :35: would meet the requirement. 3/1/2023 52 山東省藥品檢驗所 EP() ? The extent to which the various parameters of a chromatographic test may be adjusted to satisfy the system suitability criteria without fundamentally modifying the methods are listed below. ? Isocratic elution : pH of the aqueous ponent of the mobile phase concentration of salts in buffer position of the mobile phase Wavelength column temperature 177。 ? If adjustments of operating conditions to meet system suitabi