學習情境一細菌發(fā)酵制藥-資料下載頁
2024-12-31 23:17本頁面
【正文】 后，關(guān)閉發(fā)酵罐的排氣閥門，調(diào)節(jié)罐底的三向閥門至放料位置，利用發(fā)酵罐內(nèi)壓力排出發(fā)酵液，用容器接受發(fā)酵液。 LOGO （六）發(fā)酵罐的清洗與維護 ? 放料結(jié)束后，先關(guān)閉放料閥以及發(fā)酵罐進空氣閥門，打開排氣閥門派出館內(nèi)空氣，使罐壓為 0。然后，拆卸安裝在罐上的 pH、 DO等電極以及流加孔上的不銹鋼插針，并在電極插空和流加孔擰上不銹鋼塞。接著，從接種孔加入70L左右的清水，啟動攪拌，轉(zhuǎn)速為 100r/min左右，用蒸汽加熱清水至 121℃ 左右，攪拌 30min左右，以此清洗發(fā)酵罐。清洗完畢，利用空氣壓力排出洗水，并用空氣吹干發(fā)酵罐。 ? 停用蒸汽時，切斷蒸汽發(fā)生器的電源，通過發(fā)酵罐的各個蒸汽管道的排氣閥排出殘余蒸汽，直至蒸汽發(fā)生器上的壓力表現(xiàn)是為 0。停用空氣時，切斷空氣壓縮機的電源，通過空氣管道的排氣閥排出殘余空氣，直至貯氣罐上壓力表顯示為 0。最后，關(guān)閉所有的閥門以及計算機。 LOGO （七）電極的使用與維護 ? pH電極的使用與維護 在 pH電機裝上發(fā)酵罐之前，須對 pH電極進行兩點校正。pH電極與計算機連接后接通電源，將 pH電極分別浸泡在兩種不同 pH的標準緩沖溶液中進行校正，檢查測定值的兩點斜率，一般要求斜率 ≧ 90%，方可使用。 ? DO的電極的使用與維護 使用前， DO電極與計算機連接并接通電源，將 DO電極浸泡在飽和的亞硫酸鈉溶液中（或培養(yǎng)基恒溫結(jié)束降溫前），此時的測量指標定為 0。發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌并冷卻至初始發(fā)酵溫度充分通風攪拌（一般以發(fā)酵過程的最大通風和攪拌轉(zhuǎn)速條件下氧飽和）時， DO電極的測量指標定為 100%。 LOGO （八）折疊膜過濾芯的維護 ? 折疊膜過濾芯，其鎖扣、外筒、端蓋以及密封膠圈雖然都是熱穩(wěn)定材料，但耐高溫有一定限度。滅菌時，必須嚴格控制滅菌溫度和滅菌時間，若滅菌溫度過高、滅菌時間過長，容易造成損壞。同時，滅菌后必須用空氣吹干，才能使用，否則過濾效率降低或失效。不使用時，必須保持干燥，以免霉腐。 LOGO （九）蒸汽發(fā)生器的維護 ? 用于蒸汽發(fā)生器的水必須經(jīng)過軟化、除雜等處理，以免蒸汽發(fā)生器加熱管結(jié)垢，影響產(chǎn)生蒸汽的能力。使用時，必須保證供水，使水位達到規(guī)定高度，否則會出現(xiàn)“干管”現(xiàn)象造成損壞。蒸汽發(fā)生器的電氣控制部分必須能夠正常工作，達到設(shè)置壓力時能夠自動切斷電源。蒸汽發(fā)生器上的安全閥與壓力表須定期校對，能夠正常工作。每次使用后，先切斷電源，排除壓力后，停止供水，并將蒸汽發(fā)生器內(nèi)的水排空。 LOGO 任務(wù) 5發(fā)酵控制、分離純化及活性測定 LOGO 一、發(fā)酵罐培養(yǎng) ? 玉米漿培養(yǎng)基，接種量 8%， 37℃ 通氣攪拌培養(yǎng)6～ 8h，離心分離發(fā)酵液，得菌體，加 2倍量丙酮攪拌，壓濾，濾餅過篩，自然風干成菌體干粉。 LOGO 二、提取、沉淀、熱處理 ? 每千克菌體干粉加人 液 lOL， 37℃ 保溫攪拌 。降溫到 30℃ 以后，用5mol/L醋酸調(diào)節(jié) ～ ，濾液中加人 2倍體積的丙酮，放置 3～ 4h，過濾，收集沉淀，自然風干，即得粗制酶。 ? 取粗制酶，加人 %甘氨酸溶液，調(diào)節(jié) 拌 ，離心，收集上清液。 ? 加熱到 60℃ 3Omin進行熱處理。離心棄去沉淀，上清液加 2倍體積的丙酮，析出沉淀，離心，收集酶沉淀，用 、 pH8磷酸緩沖液溶解，再離心棄去不溶物，得上清酶溶液。 LOGO 三、精制、凍干 ? 取上述酶溶液調(diào)節(jié) ，離心棄去沉淀，清液再調(diào) 50%聚乙二醇，使?jié)舛冗_到 16%。在2～ 5℃ 放置 4～ 5d，離心得沉淀。用蒸餾水溶解，加 4倍量的丙酮，沉淀，同法反復 1次。沉淀用、 ，在無菌條件下用 6號垂熔漏斗過濾，分裝，冷凍干燥制得注射用 L天冬酰胺酶成品，每支 1萬單位或 2萬單位。 LOGO 四、活性測定方法 ? 天冬酰胺酶催化天冬酰胺水解，釋放游離氨，奈斯勒試劑與氨反應(yīng)后形成紅色絡(luò)合物，可借比色進行定量測定。 ? 取 、 酸緩沖液， ，于 37℃ 水溶中保溫 l5min，加 15%三氯醋酸 ，以終止反應(yīng)。沉淀細胞或酶蛋白，離心，取上清液 1mL。加 2mL奈斯勒試劑和 7mL蒸餾水 )5min后，于5OOnm波長處比色測定產(chǎn)生的氨。 ? 活力單位定義：每分鐘催化天冬酰胺水解 1181。mol氨的酶量定義為一個活力單位。 LOGO 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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