【正文】 Fβ 處理的生長抑制細胞，及接觸抑制的細胞系中發(fā)現(xiàn)的另一種分子量為 27 kD的耐熱細胞周期抑制蛋白。 它在體外與 CyclinE CDK2， CyclinD1 CDK4 緊密結合，其活性的發(fā)揮依賴于三者間的化學劑 量關系。 CyclinE CDK2的濃度是細胞通過細胞 周期關卡的關鍵因素，而 p27Kip1則特異地抑制 CyclinE CDK2的激酶活性。 人 p27Kip1是由 198個氨基酸殘基組成的熱 穩(wěn)定蛋白，與 p21Cip1 在 N端有高度同源性。其末端 21~87位點的 60個氨基酸殘基具有兩個 Ser磷酸化位點，具 CDK激酶抑制活性。 153～ 169位的 17個氨基酸序列為核定位序列，該序列在 Kip的三個成員平均存在，與其細胞周期調控功能密切相關。 p27Kip1的 C末端有一個 Thr磷酸化位點，與其 H1組蛋白磷酸化抑制作用有關。 大量實驗證明，在 TGFβ 處理的細胞系、有接觸抑制的細胞系及多種外源性生長抑制因子作用的細胞系中 p27Kip1表達量明顯增多。在TGFβ 處理前后細胞內 p27Kip1的 mRNA總量無明顯變化，但在處理后 G1末期細胞中游離的p27Kip1濃度增加。 在 TGF β 處理的細胞中加入過量的CyclinD1 CDK4可以使滯留于 G1期的細胞重新分裂。 這些資料說明，抑制細胞周期的最關鍵因素是細胞內游離 p27Kip1的量，而不是其總量。 另外， p27Kip1具有抑制染色質 H1組蛋白 磷酸化的作用。 細胞內 DNA聚合酶作用的發(fā)揮依賴于 H1組蛋白磷酸化介導的染色質結構變化，抑制 H1組蛋白的磷酸化也就間接地抑制了 DNA的合成。 p27Kip1具有多種細胞周期抑制作用，雖其作用弱于 p21Cip1 ，但對正常組織的損傷明顯低于后者，因此有可能作為基因治療中可供選擇的靶基因。 12． FHIT基因 FHIT基因是 1996年 Ohta等用外顯子捕獲法克隆到的一個人類基因。 由于該基因定位于第 3號染色體短臂（ ），該處存在脆性部位 FRA3B，而且．根據其推算的蛋白質序列 與具有三價組氨酸結構域的 HIT蛋白質高度同源，因此定名為脆性組氨酸三聯(lián)體 （ fragile histidine triad, FHIT）。 FHIT基因 cDNA全長 ，具有 10個外顯子，其開放閱讀讀框（ open reading frame）起于外顯子 5，止于外顯子 9。 關于 FHIT異常與腫瘤發(fā)生之間的關系已有許多研究報道，迄今尚未發(fā)現(xiàn)有關 FHI下基因突變的報道。 有報道在 38例有第 3號染色體復制（ chromosomal duplication）異常的非小細胞肺癌病人中， 50%有 3p特定序列的缺失，83%有 FHIT基因的雜合性丟失（ loss of heterozygosity, LOH),說明 FHIT等位基因的丟失可能在腫瘤發(fā)生中起著重要作用。 13. PTEN PTEN／ MMAC1/TEP1基因是 1997年由3個研究組分別發(fā)現(xiàn)和命名的一種抑癌基因。 PTEN基因又名 MMAC1和 TEP1。 ? PTEN —— phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 ? MMAC1—— mutated in multide advanced cancers ? TEP1 TGF β regulated and epithelial cell enriched phosphatase PTEN定位在 ，并已被克隆。共有 9個外顯子， mRNA為 kb。 PTEN蛋白的主要結構功能區(qū)位于 N端，由個 1209個核苷酸編碼 403個氨基酸殘基組成一條多肽鏈。 在第 122～ 123位的氨基酸序列（ IHCKAGKGRTG） 符合酪氨酸磷酸酶的核心基序（ HCXXGXGRX）， 是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因。 目前對 PTEN的作用機理已有較多報道，認為 PTEN的抑癌作用可通過以下途徑來完成： ① FA K途徑 ②三磷酸脂酸肌醇激酶途徑 ③絲裂原激活的蛋白激動途徑 ① FA K途徑 錨著點激酶（ FAK）是整合素 (integrin)介導的信號途徑中的一個關鍵分子。整合素通過與細胞外基質相互作用而被活化，繼而激活FAK，促使細胞增殖、侵襲和轉移。 PTEN 則可直接使 FAK去磷酸化，從而抑制細胞生長。 ② 三磷酸脂酸肌醇（ PI3）激酶途徑 三磷酸磷脂酸肌醇（ PIP）位于細胞膜上，是一種細胞生長調控途徑中的關鍵分子，主要作用是刺激細胞生長和阻斷凋亡。是胰島素生長因子（ IGF）和上皮生長因于（ EGF）等一些細胞生長因子在細胞內的第二信使。 生長因于與膜上受體結合，激活 PI3激酶，從而使信使前體 PIP2磷酸化生成 PIP3。后者隨后激活信號傳導系統(tǒng)中的一系列激酶包括絲蘇氨酸激酶（ Akt）。這些酶可促使細胞進入分裂周期 ,并阻止細胞周亡。 PTEN能抑制 PI3激酶的磷酸化作用，阻止PIP2向 PIP3轉化從而阻斷了 Akt及其下游基因的活性，從而起到了抑癌作用。 ③ 絲裂原激活的蛋白激動（ mitogen activated protein kinase,MAPK）途徑 有報道整合素可激活 MAPK途徑及其細胞外調節(jié)激酶（ ERK）。整合素可同生長因子協(xié)調作用，通過一系列復雜的信號傳導系統(tǒng)，刺激細胞增殖。 PTEN可顯擇性地抑制 ERK激活的 MAPK途徑，使其不受整合素和生長因子的影響，從而對細胞增殖起抑制作用。 關于 PTEN與腫瘤之間的關系已有較多報道。 Cowden（ CD）綜合癥是一種常染色體隱性遺傳性腫瘤綜合癥，其特征為多個臟器發(fā)生錯構瘤，包括甲狀腺、乳腺、皮膚及女性生值系統(tǒng)，而且很容易發(fā)展成甲狀腺癌和乳腺癌。 對 5個家系進行的研究中，發(fā)現(xiàn)有 4個家系存在著 PTEN基因的生殖細胞突變。這些突變分別為無義突變和錯義突變，均發(fā)在 PTEN編碼蛋白的主要結構功能區(qū)（酪氨酸磷酸酶核心基序）的 DNA序列上。在其中兩個家系病人的錯構瘤中存在著 PTEN等位基因的 LOH。 這些資料充分說明， PTEN是一個 典型的抑癌基因。 其他惡性腫瘤如惡性膠質瘤、前列腺癌、子宮內膜癌及卵巢癌中，也發(fā)現(xiàn)了較高頻率的PTEN等位基因 LOH和突變，其中子宮內膜癌的突變率可高達 50％。 14． DPC4基因 DPC4（ deleted in pancreatic cancer locus 4）是 Haln等于 1996年新近克隆出的定位于人第18號染色體長臂（ ）的基因，其 cDNA長 2680 hp，編碼 552個氨基酸殘基，有 11個外顯子和 10個內含子。 Halm等報道， %（ 25／ 84）的胰腺癌有 DPC4基因的純合性缺失， ％（ 6／ 27）有基因突變，多發(fā)生于外顯子 8， 9， l0， 11。 DPC4基因的功能目前尚不清楚，但其蛋白 產物 Smad4的氨基酸序列與黑腹果蠅（ drosophila）的 Mad基因以及線蟲（ caenorhabditis elegans）的 Mad同源基因 Sma2, Sma3, Sma4具有高度同源性，同源性最高的是外顯子 l， 2， 11(高達 85％ )，而外顯子 8， 9， 10的同源性較低（ 75％）。 這些基因都是 TGF β 超家族的成員。推測DPC4的功能可能是在 TGF β 受體介導的信號傳導通路中作為一種重要的中心轉錄因子。 DPC4基因缺失或突變可能導致細胞過度增殖。 二、 參與 DNA修復的抑癌基因 與經典的抑癌基因不同，有一些基因并不直接抑制細胞增殖或誘導細胞凋亡，但在細胞DNA修復中起重要作用。 一旦這些基因由于缺失或突變而失活，則可使機體處于遺傳不穩(wěn)定（ geic instability）狀態(tài)，也有人稱之為突變者表型（ mutator phenotype）。此時由于各種原因造成的 DNA損傷得不到及時修復，便突變逐漸積累，最終導致腫瘤發(fā)生。 這種發(fā)病機理與上述抑癌基因基本相同，所以目前許多學者向于把它們看成抑癌基因。 這類抑癌基因包括一些錯配修復基因hMSH hMLH hPMS hPMS GTBP等，以及 BRCA BRCA ATM等。 1．錯配修復基因 基因突變是腫瘤發(fā)生的主要原因，而引起基因突變的直接誘因則是不同類型的 DNA損傷。 其中多種原因造成的雙鏈 DNA分子的 堿基錯配 是導致突變的主要 DNA損傷類型之一。 大量研究表明，從細菌、酵母到人體細胞都存在著一種能修復堿基錯配的安全保障體系，它們由一系列特異地修復堿基錯配的酶分子組成，稱之為 DNA錯配修復系統(tǒng) ( DNA mismatch repair system,MMR），而編碼這些酶分子的基因則稱之為 錯配修復（ MMR）基因 。 人體細胞中由于 MMR系統(tǒng)的存在可保持基因組的完整性和穩(wěn)定性，避免基因突變的產生保證 DNA復制的高保真度。 早在 70年代，人們就在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)了一種稱為 MutHLS途徑的 MMR系統(tǒng)。這一修復途徑主要依賴于 mutH、 mutL、 mutS和 mutU等基因所編碼的酶分子來完成。此外該途徑還需要 DNA聚合酶 Ⅲ 、 DNA連接酶、單鏈 DNA結合蛋白和外切核酸酶等的參與。 隨后從酵母中也分離到三種 MMR基因，其中 MSH2基因與大腸桿菌中的 mutS基因同源，而 MLH1和 MPS1基因則與大腸桿菌的 mutL基因同源。 有報道酵母 MMR修復體系的三種 MMR基因中任何一種發(fā)生突變，都會使酵母基因組中二核昔酸重復序列拷貝數(shù)大大增加或降低。由此可見，酵母 MMR修復體系對酵母基因組的穩(wěn)定性起重要調節(jié)作用。 人類 MMR基因的發(fā)現(xiàn)則經歷了一個較為曲折的過程， 1993年世界上有幾個實驗室同時報道，在約 12～ 18％的散發(fā)性結腸癌病人腫瘤細胞中檢測到一種“遍在性體細突變” (ubiquitous somatic mutation)。 而且在遺傳性非多發(fā)息肉型結腸癌 (hereditary mompolyposis colorectal cancer, HNPCC)中，這種體細胞突變可發(fā)生于 HNPCC家系的幾乎所有腫瘤病人的腫瘤 細胞中。 遍在性體細胞突變 是指人體細胞基因組中普遍存在的，被稱為微衛(wèi)星的 DNA簡單重復序列拷貝數(shù)的變化，具體表現(xiàn)為腫瘤細胞和正常細胞中某些特定的微衛(wèi)星序列長度上有差異。 這種遍在性體細胞突變因此又稱為 微衛(wèi)星 DNA不穩(wěn)定性（ microsatellite DNA instability） 。 隨后各國學者對這一現(xiàn)