基因工程原理第七章-資料下載頁
2025-09-11 20:48本頁面
【正文】 轉(zhuǎn)移方法 ? 直接顯微注射：注入剛受精卵細(xì)胞的雄或雌性原核中 ? 重組反轉(zhuǎn)錄病毒：不適宜產(chǎn)生完全的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，可用于形成胚轉(zhuǎn)基因部分 ? Es細(xì)胞轉(zhuǎn)染：可利用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記進(jìn)行篩選 胚胎干細(xì)胞 (Es Cells) ? 取自生殖細(xì)胞發(fā)育前的早期胚 ? 具有發(fā)育成動(dòng)物的所有組織的能力 ? 受同源重組影響顯著，可以用于基因?qū)ぐ?，即可用外?DNA的同源片段精確地替換內(nèi)源基因組的片段。 Es細(xì)胞的基因?qū)ぐ? ? 外源 DNA的同源片段精確替換內(nèi)源基因組片段的過程 ? 由于同源重組的幾率遠(yuǎn)低于隨機(jī)整合，進(jìn)行尋靶的細(xì)胞需要有較高的同源重組能力 ? 體外操作的多能性、可操作性以及同源重組的能力使 Es細(xì)胞成為唯一適合于產(chǎn)生定向突變小鼠的細(xì)胞，即在每個(gè)細(xì)胞中攜帶有相同突變并能將其傳遞給生殖細(xì)胞系的小鼠。 ? 標(biāo)記基因已被運(yùn)用到尋靶過程和其后的篩選 尋靶載體 ? 特化的質(zhì)粒載體，導(dǎo)入到 Es細(xì)胞后可以促進(jìn)同源重組 ? 促進(jìn)同源重組的原因主要是含有一段同源區(qū) ? 轉(zhuǎn)染前載體的線性化，有助于重組效率的提高 ? 多數(shù)基因?qū)ぐ惺菫榱舜驍鄡?nèi)源基因位點(diǎn)，使之無效，稱為基因敲除 兩種類型的尋靶載體：替代與插入 ? 插入載體是打斷了原基因，也會(huì)出現(xiàn)選擇標(biāo)記附近的序列重復(fù)，可能會(huì)導(dǎo)致再次的同源重組而回復(fù)野生型 ? 替換載體更普及 篩選策略 ? 標(biāo)記基因篩選：對于插入載體，標(biāo)記基因可位于載體骨架內(nèi)任何地方；對于替換載體，標(biāo)記基因必須在同源區(qū)內(nèi)。目前最常用的標(biāo)記基因是 neo標(biāo)記。 ? Southern blot ? PCR ? Western blot
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