分離工程朱家文第六章吸附與制備色譜-資料下載頁
2024-09-20 20:38本頁面
【正文】 。例如，擴張 床技術(shù)的應(yīng)用是基因工程人血清白蛋白（ rH SA ）得以成功地實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵之一。 吸附與制備色譜 分離工程 擴張床吸附過程原理 吸附與制備色譜 分離工程 應(yīng)用擴張床吸附簡化生物分離過程 吸附與制備色譜 分離工程 蛋白質(zhì)制備色譜 以大分子蛋白質(zhì)類產(chǎn)品為代表的現(xiàn)代生物技術(shù)產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化分離提純技術(shù)的開發(fā)研究是分離技術(shù)的前沿研究方向，其產(chǎn)品來源包括基因工程菌發(fā)酵、細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因動物等，它有著與傳統(tǒng)化工分離技術(shù)極為不同的分離對象、系統(tǒng)和特點： 分離對象是具有特定的生物活性的生物大分子產(chǎn)品，分離過程設(shè)計中不恰當(dāng)?shù)奈锢砗突瘜W(xué)環(huán)境等（如溫度、 pH 值、緩沖液選擇、有機溶劑、攪拌和剪切力等）皆有可能引起其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而使之失活； 我們所需要的目標(biāo)產(chǎn)物往往存在于含有許多性質(zhì)十分相似的雜質(zhì)的稀溶液中，如何從這樣一種復(fù)雜的稀溶液中經(jīng) 濟有效地提取產(chǎn)物是生物分離技術(shù)面臨的重大課題； 從衛(wèi)生和安全角度出發(fā)，對于治療用基因工程產(chǎn)品，有著極高的純度和同一性要求，對其中的有害雜質(zhì)去除率要求極高 。 吸附與制備色譜 分離工程 因此，具有溫和的操作 條件以及強大的分離能力的各種色譜過程成為目前 蛋白質(zhì)類產(chǎn)品的主要分離和提純方法之一。在這些色譜過程中，分離介質(zhì)是相應(yīng)的吸附劑（色譜固定相） ， 它們 通常是各種具有良好親水性和生物 相容性的凝膠和有機聚合物多孔介質(zhì) ， 并 偶聯(lián) 有不同 的 能 可逆 結(jié)合 蛋白質(zhì) 的 功能 基團 。 吸附與制備色譜 分離工程 各種蛋白質(zhì)液相色譜 分離原理 色譜 類型 分子大小和形狀 凝膠過濾 凈電荷 離子交換 色譜 等電點 等電聚焦 色譜 疏水性 疏水作用 色譜 反相 色譜 生物活性功能 親和 色譜 抗體 抗原作用 免疫吸附 糖含量 外源凝集素親和 色譜 自由 SH 基團含量 共價 色譜 金屬離子結(jié)合 金屬離子螯合物親和 色譜 其它 羥基磷灰石 色譜 染料親和 色譜 吸附與制備色譜 分離工程 應(yīng)用 實例： 蛋白質(zhì)的離子交換色譜 離子交換色譜是一種吸附色譜技術(shù)，它 的基本原理是基于正負離子間的相互作用。離子交換層析介質(zhì)（固定相）上的配基帶有固定化的離子基團，它們可以在庫侖力的作用下吸附帶有其反離子的溶質(zhì)?？梢院唵蔚卣J為離子交換配基是固定化的酸性或堿性基團。蛋白質(zhì)是一種兩性大分子，在 pH 值偏離其等電點（ pI ）的溶液條件下，帶有正電荷或負電荷，因而可以被帶有相反電荷的離子交換載體所吸附。荷電量較高的蛋白質(zhì)和離子交換基團的結(jié)合較強，反之則較弱，因而它們的保留時間不同而能用層析方法使之分離。 由于具有多種強或弱、陰離子或陽離子交換凝膠可供選擇 ，流動相的電荷以及離子強度也可在廣泛的范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，離子交換色譜具有廣泛的適用性。成為常用的蛋白質(zhì)色譜分離方法。 吸附與制備色譜 分離工程 實例： 人血清白蛋白的離子交換色譜分離 人血清白蛋白的大規(guī)模制備以前都是通過乙醇低溫沉淀法來生產(chǎn)的。而目前更受重視的方法則是陰、陽離子交換組合流程：經(jīng)離心處理的 血漿交換緩沖液至25 m M 醋酸鈉、 pH 5. 2 ，再次離心和過濾；過 D E A E S e ph a ro s e 陰離子交換柱，載量約為每升介質(zhì) 35g 蛋白質(zhì)，用上述同樣的緩沖液洗脫 Ig G ；用階躍洗脫法調(diào)整 pH 至 4 .5 洗脫白蛋白；然后在同樣的緩沖液條件下過 CM S e p h a r o s e 陽離子交換柱，用 p H 5 . 5 、 0 . 1 1 M 醋酸鈉緩沖液洗脫，純度大于 9 9 % 。 吸附與制備色譜 分離工程 本章結(jié)束
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1