植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合-資料下載頁
2025-08-16 03:07本頁面
【正文】 與原生質(zhì)體懸液中間有一明顯界面。離心 5分鐘（ 500轉(zhuǎn) /分），此時(shí)死細(xì)胞及碎片降至蔗糖溶液內(nèi)，聚集在離心管底部，而活細(xì)胞由于有大量泡沫，故漂浮在上下界面處。用細(xì)管輕輕插入底部將沉將在離心管底部的碎片小心吹打，混勻在蔗糖溶液中，連同蔗糖溶液一起小心吸出， 再吸去上清液即得到健康的原生質(zhì)體。 例如 : 甘蘭與大白菜原生質(zhì)體的電融合 1) 由甘蘭葉片得到的原生質(zhì)體帶葉綠體顆粒，呈深綠色。由白菜下胚軸得到的原生質(zhì)體胞質(zhì)較濃，呈淡綠色。 (2) 將二種原生質(zhì)體懸液混合后置接通電源的電極小室內(nèi)，加 /MHZ、150VPP/cm正弦交變電場后，原生質(zhì)體排列成串。 (3) 加 50us， 后，開始融合，于 10分鐘后完成圓化過程。 (4) 異核體培養(yǎng) 24小時(shí)后發(fā)生第一次細(xì)胞分裂，培養(yǎng) 48小時(shí)后發(fā)生第二、三次細(xì)胞分裂。 (5) 異核體培養(yǎng) 4天后長成小細(xì)胞團(tuán)。移至培養(yǎng)基（ MS+KT 3mg/L， ） 上培養(yǎng)。一周后移至分化培養(yǎng)基（ MS+6BA 3mg/L+NAA ）上培養(yǎng)，誘導(dǎo)出胚狀芽尖。 本章要點(diǎn) 掌握原生質(zhì)體的分離純化和培養(yǎng)方法。 掌握原生質(zhì)體融合或體細(xì)胞雜交方法和程序。 作業(yè)題 ? 簡述酶法分離原生質(zhì)體的原理和步驟？ ? 如何分離純化植物原生質(zhì)體并鑒定其活力？ ? 原生質(zhì)體培養(yǎng)有何特點(diǎn)？ ? 原生質(zhì)體融合有哪幾種主要方法？ ? 如何進(jìn)行細(xì)胞雜種的選擇和鑒定？
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