細(xì)胞融合ppt課件-資料下載頁
2025-05-02 08:41本頁面
【正文】 入試管中，一般一只小鼠可獲 1～ 10ml腹水。也可用注射器抽取腹水，可反復(fù)收集數(shù)次。 ? 腹水中單克隆抗體含量可達(dá) 520mg/ml， 這是目前最常用的方法。 (3）生物反應(yīng)器培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)單抗 ? 雜交瘤細(xì)胞： WuT3雜交瘤細(xì)胞 ? 生物反應(yīng)器 ：采用 、 14升、 75升攪拌式生物反應(yīng)器，具有自動(dòng)消毒、控制溫度、轉(zhuǎn)速、 DO和 pH等功能。 ? 培養(yǎng)液 ： RPMI1640中添加慶大霉素至 100單位、胎牛血清（ NcS）或健康人血清（ HuS）、添加劑 HEN（蛋白胨和糖類）。 培養(yǎng)方式 ? 控制溫度在 37℃ 、 、轉(zhuǎn)速 4060r/min、DO在 30%50%，分批和半連續(xù)培養(yǎng)。 ? 離心機(jī)除去細(xì)胞，收集上清液用于單抗?jié)舛?、免疫活性、熱原等分析測定。 結(jié)果 ? ， WuT3雜交瘤細(xì)胞經(jīng) 48小時(shí)適應(yīng)期后進(jìn)入對數(shù)生長期，維持 24小時(shí)后進(jìn)入平衡期，這一階段持續(xù)約 48小時(shí)，分泌單抗。 ? 繼續(xù)放大至 75升生物反應(yīng)器，半連續(xù)生產(chǎn)，細(xì)胞濃度達(dá)到 106/ml，單抗產(chǎn)量為 5070μg/ml 。這樣每間隔 2天收獲 1批，獲得上清液 40升，平均 日產(chǎn)單抗達(dá) 1克 。 利用原生質(zhì)體融合培養(yǎng)技術(shù)培育新植株 ? (1) 植物原生質(zhì)體培養(yǎng)意義 ? A 融合產(chǎn)生體細(xì)胞雜種 ? B 分離或引入各種細(xì)胞器 ? C 導(dǎo)入外源基因 ? D 誘發(fā)突變體 ? E 研究細(xì)胞信息傳遞、能量轉(zhuǎn)換、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)? ? F 研究細(xì)胞壁合成機(jī)制 ? G 研究膜功能與細(xì)胞膜相互的作用 ? H 研究核質(zhì)關(guān)系 ? I 研究疾病與抗性機(jī)理 ? (2)原生質(zhì)體獲得與純化 ? 植物原生質(zhì)體純化方法： ? A 沉降法 ? B 漂浮法 ? C 沉降與漂浮結(jié)合法 ? (3) 原生質(zhì)體培養(yǎng) ? 培養(yǎng)方法： ? A 液體培養(yǎng) ? B 固體平板法 ? C 雙層培養(yǎng)法 ? 培養(yǎng)過程 ： ? A 細(xì)胞壁再生 ? B 細(xì)胞分裂 ? C 愈傷組織 (或胚狀體 )形成 ? D 植株再生 (4) 利用原生質(zhì)體融合培育新植株 A、 細(xì)胞融合成功例子 生物種類 細(xì)胞來源 成功年代 煙草兩個(gè)種間 苷藍(lán) —— 青菜 大豆 —— 馬唐草 矮牽牛 —— 龍面花 大麥 —— 花生 大麥 —— 大豆 小麥 —— 矮牽牛 油菜 —— 大豆 玉米 —— 大豆 大豆 —— 野豌豆 大麥 —— 蠶豆 大豆 —— 草香木犀 酵母菌 —— 雞 大豆 —— 煙草 大豆 —— 秋水仙 人 —— 胡蘿卜 番茄 —— 馬鈴薯 人 —— 小鼠 葉 —— 葉 葉 —— 根 愈傷組織 —— 葉 葉 —— 花瓣 種子 —— 種子 葉 —— 懸浮細(xì)胞 葉 —— 花瓣 葉 —— 懸浮細(xì)胞 葉 —— 懸浮細(xì)胞 懸浮細(xì)胞 —— 懸浮細(xì)胞 葉 —— 根 懸浮細(xì)胞 —— 葉 原生質(zhì)體 —— 血紅細(xì)胞 懸浮細(xì)胞 —— 葉 懸浮細(xì)胞 —— 葉 腹水癌細(xì)胞 —— 原生質(zhì)體 葉 —— 根尖 纖維肉瘤細(xì)胞 —— 畸胎瘤細(xì)胞 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 B、利用原生質(zhì)體融合培育新植株 C、微生物原生質(zhì)體融合構(gòu)建新菌株 (5)雜種鑒定 (ⅰ) 形態(tài)比較 (ⅱ) 染色體組型分析 (ⅲ) 同工酶和分子標(biāo)記鑒定 七、細(xì)胞融合技術(shù)的進(jìn)展與展望 ? (一 ) 進(jìn)展 ? 不對稱融合： 用 X射線或 Y射線處理親本之一的原生質(zhì)體， 殺死細(xì)胞核 ，然后再同另外一方親本的原生質(zhì)體融合，這種部分與全部染色體結(jié)合的細(xì)胞融合稱為 不對稱融合 。 ? 胞質(zhì)雜種： 是去掉核后的細(xì)胞與另外一個(gè)完整細(xì)胞融合形成的雜種。 ? (二 )展望 小結(jié) ? 細(xì)胞融合的定義、原理與方法 ? 融合細(xì)胞的篩選方法：雜交瘤細(xì)胞的篩選方法 ? 單克隆抗體的制備方法 哈、哈！終于下課了??！
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