植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和細胞融合(編輯修改稿)
2024-09-12 03:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 方面 ， 多數(shù)原生質(zhì)體適合在暗淡的散射光下或黑暗中生長 。 ● 原生質(zhì)體培養(yǎng)要求有較高的密度 ， 具體密度因植物材料 、 物種及基因型不同而異 。 ● 原生質(zhì)體培養(yǎng)了一段時間后，要添加新鮮培養(yǎng)基，并且通過用較低滲透壓的細胞培養(yǎng)基代替，以便適應新細胞團或愈傷組織的生長。 原生質(zhì)體的發(fā)育 原生質(zhì)體在適合的條件下 ， 首先形成新的細胞壁 ， 繼而進行分裂 ， 形成愈傷組織 。 原生質(zhì)體植株再生 途徑： （ 1） 將原生質(zhì)體再生的愈傷組織直接轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上 ， 一步成苗 。 （ 2） 先將愈傷組織培養(yǎng)在含細胞分裂素和低濃度 ， 形成質(zhì)地較硬的胚性愈傷組織或胚狀體 ， 再將其轉(zhuǎn)到含細胞分裂素的分化培養(yǎng)基上再生植株 。 第二節(jié) 原生質(zhì)體融合 （ 體細胞雜交 ） 一 、 細胞融合的方法 ?自發(fā)融合 （ Spontaneous Fusion） ： 在溶解細胞壁過程中 ， 有些原生質(zhì)體能彼此融合形成同核體 。 ?誘導融合 （ induced fusion） ： 用物理或化學的方法來誘導原生質(zhì)體的融合 。 步驟：兩個或多個原生質(zhì)體的質(zhì)膜彼此靠近 ， 局部區(qū)域質(zhì)膜緊密粘連 ， 彼此融合 ， 融合完成 ， 形成球形的異核體或同核體 。 融合方法： 1）物理方法（電融合） 2）化學方法 ● NaNO3處理（異核體形成頻率不高） ● 高 pH高鈣處理方法： pH在 、50mmol/L CaCl2 ?H2O 37℃ 處理原生質(zhì)體（雜種產(chǎn)量高，但對細胞有毒） ● 聚乙二醇處理方法：異核體形成頻率高，可重復性強 ，毒性低。 二 、 細胞融合的程序 ● 兩種親本的原生質(zhì)體分離： 由雙子葉植物中分離出的原生質(zhì)體是良好的材料。 ● 原生質(zhì)體融合 1）非對稱雜交： 一方親本的細胞核和細胞質(zhì)分另一方親本的少量核物質(zhì)和全部細胞質(zhì)融合 2） 細胞質(zhì)雜交： 一方親本的細胞核和細胞質(zhì)及另一方的親本的全部細胞質(zhì)融合 。 方法： $一個正常的原生質(zhì)體 + 一個去核的原生質(zhì)體 $一個正常的原生質(zhì)體 + 一個
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