動物細(xì)胞融合-資料下載頁
2024-10-03 17:23本頁面
【正文】 液洗 3次 (37℃ )，計數(shù)活力細(xì)胞 (不少于 90％ )。 第三十頁，共三十七頁。 〔 3〕 細(xì)胞融合 (1) 按 1： 510混合 B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞后，離心棄去上清，并以消毒濾紙吸凈多余上清。 (2) 將 1ml 40％的 PEG液一滴滴參加細(xì)胞混合物中，在60秒內(nèi)加完，同時并不斷輕微轉(zhuǎn)動離心管或用手指輕彈離心管； (3)在不斷轉(zhuǎn)動離心管中加 1ml無血清培養(yǎng)液， 60秒鐘內(nèi)加完； (4)于 5分鐘內(nèi)慢慢參加 20ml無血清培養(yǎng)液；此時細(xì)胞對機械損傷非常敏感， 第三十一頁，共三十七頁。 HAT選擇： 淋巴細(xì)胞及其融合細(xì)胞： 不能生長， 5~7天死亡； 骨髓瘤細(xì)胞及其融合細(xì)胞： DNA從頭合成途徑被阻斷；HGPRT缺乏， DNA合成的補救途徑受阻，不能生長， 5~7天死亡； 淋巴細(xì)胞和骨髓瘤融合細(xì)胞： 能生長 (5)離心 (800轉(zhuǎn) /分， 8分鐘 )，去上清，用完全培養(yǎng)液10ml懸浮，輕輕混勻； (6)取 96孔板，每孔加 50?l，再加取等體積細(xì)胞懸液。 (7)在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃ 培養(yǎng)； 24h后更換成 HAT選擇性培養(yǎng)液 第三十二頁，共三十七頁。 〔 4〕 雜交瘤細(xì)胞的選擇和克隆化培養(yǎng) 第一次抗體篩選： 融合培養(yǎng) 24h后更換成 HAT選擇性培養(yǎng)液，雜交瘤細(xì)胞生長增殖、形成細(xì)胞群，再利用免疫學(xué)方法檢測其抗體合成。 第二次抗體特異性篩選： 從雜交瘤細(xì)胞群中篩選出能產(chǎn)生針對某一預(yù)定抗原快定簇的特異性雜交瘤細(xì)胞。 第三十三頁，共三十七頁。 由于雜交瘤細(xì)胞的染色體不穩(wěn)定，需要進行 35次克隆化培養(yǎng)，才可得到基因型穩(wěn)定、特異性抗體合成穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞。 〔 5〕 克隆化培養(yǎng) 第三十四頁，共三十七頁。 二、 T淋巴細(xì)胞雜交瘤生產(chǎn)干擾素、細(xì)胞因子 T淋巴細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中占有極重要的位置，在體內(nèi)能產(chǎn)生多種淋巴因子，如白介素 巨噬細(xì)胞激活因子、 B細(xì)胞生長因子、抗原特異性或非特異性抑制因子等。 將胸腺瘤細(xì)胞與 T細(xì)胞融合的細(xì)胞，稱為“ T淋巴細(xì)胞雜交瘤〞。利用 T淋巴細(xì)胞雜交瘤可以獲得大量這些因子，從而可用于治療缺乏這些淋巴因子的免疫缺陷患者或改善某些超敏反響狀態(tài)。 第三十五頁，共三十七頁。 三、制作抗腫瘤細(xì)胞疫苗 哺乳動物、人的樹突狀細(xì)胞〔 dendrite cell, DC〕專一向淋巴細(xì)胞提供特異性抗原，啟動機體 T細(xì)胞免疫。DC與無致瘤性的腫瘤細(xì)胞融合，那么 DC可以提供幾乎全部腫瘤細(xì)胞的抗原，啟動機體 T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的捕殺，防止癌細(xì)胞的擴增。 第三十六頁，共三十七頁。 內(nèi)容總結(jié) 1957年，日本科學(xué)家崗田善雄在培養(yǎng)動物細(xì)胞時參加失去活性的仙臺病毒，發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞融合、產(chǎn)生具有兩個核的細(xì)胞。概念：通過誘導(dǎo)兩個或多個細(xì)胞合并成一個雙核或多核細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞融合〔 cell fusion〕。食品中的毒素〔如黃曲霉毒素〕、有機農(nóng)藥的檢測。動物細(xì)胞融合技術(shù)為單克隆抗體的制備提供了個全新、高效的方法。三、制作抗腫瘤細(xì)胞疫苗 第三十七頁，共三十七頁。
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