核酸的結(jié)構(gòu)與功能(7)-資料下載頁
2024-08-25 02:01本頁面
【正文】 760 260 環(huán)狀 大腸桿菌 4 600 1560 環(huán)狀 真核生物 (單倍體 ) 酵母 13 500 4 600 線狀 ， 分布于 7個染色體上 果蠅 137 000 466 000 線狀 ， 分布于 4個染色體上 人 3 160 000 1074 000 線狀 ， 分布于 23個染色體上 南美洲肺魚 102 000 000 34 700 000 線狀 ， 分布于 19個染色體上 ____________________________________________________________________________ 表 33 不同生物 DNA分子大小 83 二、 核酸的水解 1 . 化學(xué)法 1)在很低 pH條件下 DNA和 RNA都會發(fā)生 磷酸二酯鍵水解。 2) 在高 pH時， RNA的磷酸酯鍵易被水解， 而 DNA的磷酸酯鍵不易被水解。 84 2. 酶法 核酸酶 (nucleases) 包括： 核糖核酸酶 (RNase) 脫氧核糖核酸酶 (DNase) 核酸外切 酶 (exonuclease) 核酸內(nèi)切 酶 (endonuclease) 85 3’ p p p p OH 3’ 5’ 限制性內(nèi)切酶 (restriction endonuclease) 5’ G AATT C 3’ 3’ C TTAA G 5’ EcoR I 核酸外切 酶 核酸內(nèi)切 酶 86 三、核酸的變性、復(fù)性與雜交 １ .變性 （ denaturation） 1) 定義： 在一定理化因素作用下，核酸雙螺旋等空 間結(jié)構(gòu)中堿基之間的氫鍵斷裂，變成單鏈 的現(xiàn)象稱為變性（ denaturation）。 2) 引起核酸變性的常見理化因素有加熱、 酸、堿、尿素和甲酰胺等。 87 3)增色效應(yīng)（ hyperchromic effect） 核酸變性時 雙螺旋等高級空間構(gòu)象被破壞， 堿 基暴露 其 260nm紫外線吸收會大大增加 的現(xiàn)象 濃度為 50?g/ml 雙螺旋 DNA A260為 單鏈 DNA A260為 游離核苷酸 A260為 圖 324 DNA的紫外吸收光譜 DNA DNA 3. 核苷酸總吸光度值 88 4)熔解溫度 （ melting temperature,Tm） ① 概念 加熱變性時 DNA溶液 A260升高達到最大值 一半時的溫度稱為該 DNA的熔解溫度。 ② Tm一般在 85～ 95℃ 之間 DNA熔解曲線 89 ③ 影響因素 ， 與 Tm成正比 1％ , Tm增加 。 與 DNA 溶液中 的離子強度成正比。 在 中 DNA保存較為穩(wěn)定。 離子強度對 Tm影響 90 ④ DNA的 Tm值可以根據(jù) G+C含量計算： Tm=+ （ %GC） 2. 復(fù)性 (renaturation) 1)復(fù)性的 概念 : 變性 DNA在適當(dāng)條件下，可使兩條分開的 單鏈重新形成雙螺旋 DNA的過程稱為復(fù)性。 2)退火 （ annealing） 當(dāng)熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后復(fù)性稱為退 火。 91 2) 影響因素 : ⑴ DNA濃度高，復(fù)性快 ⑵ DNA分子大， 復(fù)性慢 ⑶ 合適的復(fù)性溫度： Tm25℃ ⑷ 適當(dāng)?shù)碾x子強度：一般在 92 圖 326 DNA熱變性過程的兩種冷卻過程示意圖 93 3. 雜交 （ hybridization） 1)概念 具有互補序列的不同來源的單鏈核酸 分子 ,按堿基配對原則結(jié)合在一起稱 為雜交。雜交可發(fā)生在 DNADNA、 RNARNA和 DNARNA之間。 94 95 2) 核酸雜交是分子生物學(xué)研究中常用 的技術(shù)之一，用來分析基因組織的 結(jié)構(gòu)，定位，表達等。 方法： Southern 印跡法 Northern 印跡法
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