病原微生物檢測方法-資料下載頁
2025-08-15 23:48本頁面
【正文】 刻” (nick)；正鏈較短，有較大的“缺口” (gap)，其 3’ 末端不固定，故長度是可變的。 22 嵌合引物熒光 PCR法 ? Jun— Bin S等在利用 Taqman探針進行的熒光定量 PCR檢測中設(shè)計了一條特殊的嵌合引物。該引物由兩個片段連接而成， 3’ 端是與 HBV DNA正鏈 DR2區(qū)前的序列互補的 A片段， 5’ 端的 B片段是與 HBV基因組沒有同源性的HBV基因組的部分序列。 cccDNA因為正鏈完整，引物與正鏈的特定區(qū)域雜交后，在 DNA聚合酶的作用下，引物能夠順利延伸形成一條新生鏈，而 HBV DNA的其他形式，如 rcDNA，引物的延伸停止于 DR2區(qū)。新生鏈形成以后，設(shè)計另一對引物，一個與嵌合性引物的片段 B雜交，另一個與正鏈 DR2后的序列互補，進行 PCR擴增。實時 PCR儀通過探針釋放的熒光強度進行 cccDNA定量。 23 基于 16S RRNA的檢測技術(shù) ? 16SrRNA 存在于所有原核生物細胞中 ,它們相對穩(wěn)定且有較高的拷貝數(shù) (每個細胞幾千個拷貝 ) ,其序列中含可變區(qū)及高度保守區(qū) ,因此可設(shè)計群、屬、種特異性的探針?，F(xiàn)階段各種常見細菌的 16S rRNA 基因幾乎全部測序完成 ,16S rRNA 編碼基因的這些特點使之成為較理想的細菌基因分類的靶序列。 24 免疫 PCR ? 該技術(shù)把抗原抗體反應(yīng)的高特異性和聚合酶鏈反應(yīng)的高敏感性有機結(jié)合起來 ,它的基本原理是用一段已知 DNA 分子標記抗體作為探針 ,用此探針與待測抗原反應(yīng) , PCR 擴增粘附在抗原抗體復(fù)合物上的這段 DNA 分子 ,電泳定性 ,根據(jù)特異性 PCR 產(chǎn)物的有無 ,來判斷待測抗原是否存在。 25 PCRELISA ?PCREL ISA 法是 PCR 與 EL ISA 技術(shù)結(jié)合的檢測方法。其綜合了 PCR 、分子雜交和 EL ISA 3種技術(shù)的優(yōu)點。主要用于檢測樣品中的特定基因。它引入地高辛 (或生物素 ) 標記的 dN TP 或引物進行 PCR 擴增 ,利用酶標抗地高辛抗體(或酶標記親和素 ) 進行 EL ISA 檢測 ,代替了用于常規(guī) PCR 產(chǎn)物檢測的電泳方法 ,方便快捷 ,易于處理大量樣品 ,且其靈敏度比使用瓊脂糖凝膠電泳檢測方法高 100倍 ,當(dāng)有適當(dāng)?shù)臉藴势窌r ,還可進行定量測定。 26 2
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