致病性大腸埃希氏菌及其檢驗(yàn)-資料下載頁
2025-08-15 23:24本頁面
【正文】 將經(jīng)過生化證實(shí)試驗(yàn)的大腸埃希氏菌培養(yǎng)物接種肉湯管，于 36+1℃ 培養(yǎng) 24小時， 3000轉(zhuǎn)／分離心30分鐘。取上清液用 G6濾器過濾后分作兩份，一份加熱 60℃30 分鐘，供 ST測定用，另一份不加熱，供 LT測定用。 致病性大腸埃希氏菌的檢驗(yàn) （五）、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌毒素試驗(yàn) 動物試驗(yàn) 1）家免結(jié)軋回腸段試驗(yàn)：取體重為 2kg的家兔，禁食使腸內(nèi)容物排空。麻醉后剖腹，取出回腸段，按1015cm為一段，分段結(jié)扎，取一段注射肉湯 2mL作為陰性對照，另一段注射已知產(chǎn)毒菌肉湯培養(yǎng)物的上清液 2ml作為陽性對照。其他各段分別注射待試菌株肉湯培養(yǎng)物的濾液 2mL。將腹壁縫合。 測定 LT時，于注射后 18小時剖腹檢查 測定 ST時，于注射后 68小時剖腹檢查 取出腸管分別抽取腸段的積液，測定其容量，并測定腸段的長度。積液量 (mL)與腸段長度 (cm)之比大于 l者為陽性。 （五）、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌毒素試驗(yàn) 動物試驗(yàn) 2）乳鼠灌胃試驗(yàn)：將被檢菌株接種于 Honda氏產(chǎn)毒肉湯內(nèi) ,36度培養(yǎng) 24小時 ,離心 ,取上清夜 ,注入 14日齡乳胃內(nèi) ,禁食 34小時 ,麻醉 ,取出腸管 ,稱量腸管 (包括積液 )質(zhì)量及剩余體質(zhì)量 ,二者之比大于 , . 致病性大腸埃希氏菌的檢驗(yàn) 致病性大腸埃希氏菌的檢驗(yàn) （五）、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌毒素試驗(yàn) 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) : 將被檢菌按 5點(diǎn)環(huán)形接種于Elek氏培養(yǎng)基上，以同樣操作共做兩份， 36177。 1℃培養(yǎng) 48小時，在每株菌的菌苔上各放一片多粘菌素紙片， 36+1℃ 經(jīng) 5— 6時，使抗生素滲入瓊脂中，在五點(diǎn)環(huán)形菌苔各 5mm處的中央，挖一個直徑 4mm的園并用一滴瓊脂墊底。在一份平板的孔內(nèi)滴加LT抗毒素 30ul，另一份平板的孔內(nèi)滴加 ST毒素30ul。放于 36+1℃ 經(jīng) 15～ 20小時觀察結(jié)果，在菌斑和抗毒素之間出現(xiàn)白色沉淀帶為陽性，無沉淀帶者為陰性。 （五）、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌毒素試驗(yàn)、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 將被檢菌按 點(diǎn)環(huán)形接種于氏培養(yǎng)基上，以同樣操作共做兩份， 177。小時，在每株菌的菌苔上各放一片多粘菌素紙片， 經(jīng) — 時，使抗生素滲入瓊脂中，在五點(diǎn)環(huán)形菌苔各 處的中央，挖一個直徑的園并用一滴瓊脂墊底。在一份平板的孔內(nèi)滴加抗毒素 ，另一份平板的孔內(nèi)滴加 毒素經(jīng) ～ 小時觀察結(jié)果，在菌斑和抗毒素之間出現(xiàn)白色沉淀帶為陽性，無沉淀帶者為陰性。致病性大腸埃希氏菌的檢驗(yàn) （六）豚鼠角膜試驗(yàn) ? 供測定侵襲性大腸埃希氏菌用，將經(jīng)過生化證實(shí)試驗(yàn)的待試菌株 1820小時瓊脂培養(yǎng)物，用肉湯洗下，使成每 lml含菌 9億個菌懸液，作為接種材料。 ? 體重 400500g的健康豚鼠 (角膜與結(jié)膜外觀正常，并經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)檢查 )的角膜上接種待試菌懸液 1滴。 ? 48小時后觀察結(jié)果，結(jié)膜充血浮腫、角膜混濁、眼內(nèi)充盈淚液或漿液性分物者為陽性，自結(jié)膜囊取樣分離細(xì)菌，鑒定應(yīng)與原接種菌一致。 致病性大腸埃希氏菌的檢驗(yàn) （七）、結(jié)果報告 ? 根據(jù)以上生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、腸毒素試驗(yàn)和豚鼠角膜試驗(yàn)的結(jié)果出報告，如果是產(chǎn)毒大腸埃希氏菌時應(yīng)有腸毒素試驗(yàn)的結(jié)果；如果是侵襲性大腸埃希氏蔭應(yīng)有豚鼠角膜試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果；如果是腸致病性大腸埃希氏菌時應(yīng)有血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果。
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1