實驗二--大腸菌群的檢驗-資料下載頁
2025-08-09 16:04本頁面
【正文】 結(jié)合，故沙門氏菌和志賀氏菌等為無色或琥珀色半透明菌落。 （ 3）此培養(yǎng)基用于鑒別大腸桿菌及產(chǎn)氣桿菌，并可快速鑒定白色念珠菌及鑒定凝固酶陽性葡萄球菌。美國公共衛(wèi)生協(xié)會和美國細菌協(xié)會推薦，用于增殖或鑒別大腸桿菌的檢查。但某些沙門氏菌、志賀氏菌可被抑制。培養(yǎng)基保存應(yīng)注意避光防止氧化。 樣品 1 1 2 3 4 5 2 A1組 酸奶 1 A2組 水樣 1 A3組 水樣 2 A4組 水樣 3 B1組 鮮奶 B2組 水樣 4 B3組 水樣 5 B4組 酸奶 2 三、實驗方法與 步驟 采樣及稀釋 ① 以無菌操作將檢樣 25g（ 或 25ml） 放于含有 225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi) （ 瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠 ） 或滅菌乳缽內(nèi) ， 經(jīng)充分振搖或研磨做成 1： 10的均勻稀釋液 。 固體檢樣最好用無菌均質(zhì)器 ， 以 800r/min～ 1000r/min的速度處理 1min， 做成 1： 10的稀釋液 。 ② 用 1ml滅菌吸管吸取 1： 10稀釋液 1ml， 注入含有 9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi) ， 振搖混勻 ， 做成 1： 100的稀釋液 ， 換用 1支 1ml滅菌吸管 ， 按上述操作依次作 10倍遞增稀釋液 2. 乳糖初發(fā)酵試驗 即通常所說的假定試驗 。 其目的在于檢查樣品中有無發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體的細菌 。 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi) ， 接種量在 1ml以上者 ， 用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管； 1ml及 1ml以下者 ， 用單料乳糖發(fā)酵管 。 每一個稀釋度接種 3管 ， 置 （ 36177。 1） 0C溫箱內(nèi) ， 培養(yǎng) （ 24177。 2） h， 如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣 ， 則可報告為大腸菌群陰性 ， 如有產(chǎn)生者 ， 則按下列程續(xù)進行 ③ 根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗樣品污染情況估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種 3管。也可直接用樣品接種。 10， 100, 1000 倍稀釋（ 1， 2， 3） （ 10倍稀釋 ） 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂板或麥康凱瓊脂平板上 ， 置 （ 36177。 1） 0C溫箱內(nèi) ， 培養(yǎng) 18h~24h， 然后取出 ，觀察菌落形態(tài)并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵試驗 。 即通常所說的證實試驗，其目的在于證明從乳糖初酵管試驗呈陽性反應(yīng)的試管內(nèi)分離到的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。 在上述的選擇性培養(yǎng)基上 ， 挑取可疑大腸菌群 1~2個進行革蘭氏染色 ， 同時接種乳糖發(fā)酵管 ， 置 （ 36177。 1） 0C的溫箱內(nèi)培養(yǎng) （ 24177。 2） h， 觀察產(chǎn)氣情況 。 凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣 ， 革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌 ， 即報告為大腸桿菌陽性；凡乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色為陽性 ， 則報告為大腸桿菌為陰性 。 根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查 MPN檢索表，報告每 100ml（ g）食品中大腸菌群的最可能數(shù)。 根據(jù)證實總大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查附表 “ 最可能數(shù)（ MPN）表 ” ，即求得每 100ml水樣中存在的總大腸菌群數(shù)。我國目前系以 1L為報告單位，故 MPN值再乘以 10，即為 1L水樣中的總大腸菌群數(shù)。 對污染嚴(yán)重的地表水和廢水，初發(fā)酵試驗的接種水樣應(yīng)作 1： 1： 100、 1： 1000或更高倍數(shù)的稀釋。 如果接種水的水樣量不是 10ml、 1ml和 ，而是較低或較高的三個濃度的水樣量，也可查表求得 MPN指數(shù)，再經(jīng)下面公式換算成每 100ml的 MPN值。 MPN值＝ MPN指數(shù) 10（ ml） /接種量最大的一管（ ml） ≤ 3 個大腸菌群 /1L飲水 ≤ 100個 細菌總數(shù) /1ml飲水 我國飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：
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