【正文】 ）沿管壁緩緩加入鄰甲酚飽和溶液 ，如有含硝基苯的有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥存在時，呈現(xiàn) 藍(lán)色環(huán) ，振搖后全部變藍(lán)，若含量低或還原不完全時，反應(yīng)結(jié)果僅顯 綠色 。 （四）個別有機(jī)磷農(nóng)藥的化學(xué)檢驗 ? 含硫有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥的檢驗 —— 亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)。 ? [原理 ] 含硫有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥（ 105 391樂果等）經(jīng)水解均能生成硫醚（硫醇）化合物，進(jìn)一步與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)，在酸性條件下生成紅色化合物。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%氫氧化鈉溶液。 ? （ 2） 6mol/L（或濃 HCl）鹽酸。 ? （ 3） 10%亞硝基鐵氰化鈉溶液（用時現(xiàn)配）。 ? [操作 ] 取苯或氯仿提取濃縮液 2ml,自然揮干，加蒸餾水 2ml溶解，移入小試管中，加 10%亞硝基鐵氰化鈉溶液 12滴， 10%氫氧化鈉溶液 5滴，置 2535℃ 水浴中加熱1— 2min，取出放冷，沿管壁逐滴加入 6mol/L鹽酸 5— 6滴，如有能水解成硫醚（硫醇）的有機(jī)磷酸酯 類農(nóng)藥存在時，在二液接觸面出現(xiàn) 紅色環(huán) ，輕輕振搖溶液即全部變紅。 ? [說明 ] ? （ 1） 要嚴(yán)格控制加熱的時間和溫度。若溫度過高，時間過長，酸化后會呈藍(lán)色或藍(lán)綠色。若溫度不夠或時間不足，則不起反應(yīng)。 ? （ 2） 加亞硝基鐵氰化鈉的量不可過多，否則影響正常色澤。 ? （ 3） 含量低時只在接觸面出現(xiàn)淺紅色環(huán)，振搖后色澤不明顯，故加酸后不要急于振搖。 ? 含多鹵代烴磷酸酯類農(nóng)藥 （敵百蟲、敵敵畏、二溴磷）的檢驗 — 間苯二酚反應(yīng)。 ? [原理 ] 敵敵畏和敵百蟲經(jīng)堿水解產(chǎn)生的醛類化合物與間苯二酚作用，生成粉紅色化合物。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%氫氧化鈉溶液。 ? （ 2） 1%間苯二酚乙醇溶液。 ? [操作 ] ? 取定性濾紙一片，滴加檢樣提取濃縮液 1滴，散開后加10%氫氧化鈉溶液 1滴，稍干，再加 1%間苯二酚乙醇溶液1滴，充分散開后，在電爐上直火加熱（或用電吹風(fēng)機(jī)的熱風(fēng)吹），如果有敵敵畏或敵百蟲，在斑點周圍出現(xiàn)一 粉紅色圈 。其中敵敵畏比敵百蟲顯色快。 ? [說明 ] 醛類化合物對本反應(yīng)有干擾，也可呈紅色圈，若將氫氧化鈉改用碳酸鈉，并改在試管中進(jìn)行試驗，可加以區(qū)別。具體操作如下： ? 取檢樣提取液 2ml于試管中，加碳酸鈉粉末 ，在水浴上加熱，使其呈飽和溶液，再加間苯二酚乙醇溶液 1滴，再置水浴上加熱，若呈紅色表明含有敵敵畏或敵百蟲（醛類化合物呈黃色）。 ? 以上僅介紹了 3種有機(jī)磷農(nóng)藥的定性檢驗方法，如需進(jìn)一步確定為何種農(nóng)藥，可查閱有關(guān)毒物檢驗資料。有關(guān)含量測定，除用常規(guī)的化學(xué)方法測定外，目前較先進(jìn)的測定方法是薄層掃描法和氣相色譜法。 ? 準(zhǔn)備工作 ? 實驗前用一匹馬采血，分離血清，然后給馬投吸敵百蟲 15— 20g，觀察中毒癥狀后，采血，分離血清。 ? 實驗前配制 10%亞硝基鐵氧化鈉溶液 20ml，分裝在 4個試管。 ? 第六節(jié) 殺鼠藥的檢驗 ? 毒鼠藥是一類滅鼠的輕度或劇毒的農(nóng)藥，常用的有機(jī)氟化合物、磷化鋅、安妥、敵鼠、敵鼠強(qiáng)等 ? 鼠藥在保護(hù)農(nóng)田、牧草、森林方面發(fā)揮了巨大的作用，研究表明嚙齒類可傳播寄生蟲病和多種流行病，對動物和人類有害無益。雖然毒鼠藥在保護(hù)人畜安全上發(fā)揮著重要作用，但由于其高強(qiáng)毒性，在使用不當(dāng)?shù)那闆r下常常引起人畜中毒。 ? 鼠藥的臨床癥狀鑒別： ? 氟乙酰胺 中毒常出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的全身陣攣性抽搐 。 ? 毒鼠強(qiáng) 中毒以驟發(fā)的驚厥、癲癇發(fā)作為主要特征。 ? 抗凝血類 敵鼠 中毒 ： 既往體?。蝗话l(fā)生不明原因的多處出血，尤其是牙齦、皮膚出血和尿血并存時應(yīng)懷疑。實驗室檢查可進(jìn)一步提供證據(jù)。 ?一、磷化鋅的檢驗 ? （一）檢材的采取及處理 ? 磷化鋅中毒時，可采取嘔吐物，胃內(nèi)容物和可疑的飼料作為檢樣。一般情況下，檢樣可不經(jīng)處理，直接進(jìn)行檢驗。 ? 因為磷化鋅在潮濕的空氣中容易分解，特別在偏酸的胃內(nèi)容物中或腐敗的飼料中更易分解，所以必須及時進(jìn)行檢驗。 ?一、磷化鋅的檢驗 ? （二）磷化氫的檢驗 — 溴化汞、硝酸銀、碘化鎘汞試紙法 ? [原理 ] 磷化鋅遇酸分解，產(chǎn)生磷化氫，磷化氫與溴化汞、硝酸銀、碘化鎘汞作用，呈現(xiàn)不同的顏色反應(yīng)。 ? [試劑 ] ? （ 1） 5%溴化汞乙醇溶液。 ? （ 2） 1%硝酸銀溶液（應(yīng)避光保存）。 ? （ 3）碘化鎘汞溶液。取碘化汞 2g，碘化鎘 1g共溶于蒸餾水 100ml中 ? （ 4）醋酸鉛棉花。將脫脂棉浸入 10%醋酸鉛溶液中，取出擠去溶液，晾干，貯于干燥處保存。 ? [操作 ] 取檢材適量于 200ml三角燒瓶中，加水使呈粥狀，加 10%鹽酸使呈明顯酸性，瓶口安裝一個預(yù)先裝好醋酸鉛棉花的玻璃干燥管，管的上部再安一個“ Y”形玻璃管，在“ Y”形管的二個分管中，一個放入沾有溴化汞溶液或碘化鎘汞溶液的試紙條，另一個放入沾有硝酸銀溶液的試紙條，然后將三角燒瓶置于酒精燈上緩緩加熱，如有磷化氫存在，溴化汞試紙條變成 鮮黃色 ，碘化鎘汞試紙條變成 橙黃色 ，硝酸銀試條變成 黑色。 ? [說明 ] ? （ 1）硫化氫與硝酸銀反應(yīng)，也可使硝酸銀試紙條變黑，用醋酸鉛棉花可使硫化氫與醋酸鉛反應(yīng)，生成黑色的硫化鉛，以排除硫化氫的干擾。 ? （ 2）砷化氫也可以使溴化汞試紙變成黃色，若懷疑有砷化氫干擾，可將變成黃色的紙條放在氨氣瓶口熏片刻，黃色不變?yōu)榱谆瘹?，黃色變黑為砷化氫。 ? （ 3）此反應(yīng)如果沒有干燥管或“ Y”形管，可在三角瓶口處塞一些醋酸鉛棉花，然后用方形濾紙片加上試劑后，直接蓋在瓶口上進(jìn)行檢驗。 ?二、敵鼠的檢驗 ? （一）檢樣的采取及處理 ? 急性中毒或發(fā)生死亡者，可取嘔吐物、胃內(nèi)容物、血液和尿液作為檢樣。慢中毒或死亡者，可采取血液、肝臟、腎臟作為檢樣。也可采取可疑飼料作為檢樣。 ? 取固體檢樣或半固體 （預(yù)先在水浴上將水分揮干）檢樣適量，置于具塞三角瓶中，加無水乙醇適量，在水浴上溫浸 15min，過濾，濾液在水浴上揮干，殘渣加無水乙醇 溶解，濾去不溶物，濾液濃縮至少量供定性檢驗用。若進(jìn)行儀器分析或含量測定，醇液濃縮后，再過中性氧化鋁柱純化，用氯仿洗脫，洗脫液濃縮后供檢。 ? 液體檢樣， 可取適量于分液漏斗中，先加稀鹽酸酸化，再用氯仿振搖提取，分出氯仿液，在水浴上濃縮至近干，供定性檢驗。必要時可用中性氧化鋁柱純化。 ? （二）三氯化鐵反應(yīng) ? [原理 ] 敵鼠或敵鼠鈉鹽都能與三氯化鐵反應(yīng)，生成紅色沉淀。 ? [試劑 ] 9%三氯化鐵溶液。 ? [操作 ] 取提取濃縮液少許，加無水乙醇 ，緩慢加 9%三氯化鐵溶液 1—— 2滴，若含有敵鼠或敵鼠鈉鹽，有 紅色 懸浮物生成。加氯仿 ，蒸餾水 ，充分振搖，氯仿層呈明顯紅色。 ? （三）鹽酸羥胺反應(yīng) ? [原理 ] 敵鼠或敵鼠鈉都能與鹽酸羥胺反應(yīng)，縮合成肟酸，呈現(xiàn)白色渾濁。 ? [試劑 ] 5%鹽酸羥胺溶液。 ? [操作 ] 取提取濃縮液 5滴，加無水乙醇 1ml稀釋，然后逐滴加入 5%鹽酸羥胺溶液，放置 2030分鐘，如含有敵鼠及其鈉鹽，可出現(xiàn) 白色渾濁 ，含量高時，可出現(xiàn)白色沉淀。 ?三 、氟乙酰胺的檢驗 ? （一）樣品的采取及處理 氟乙酰胺中毒時，較好的檢樣是嘔吐物、胃腸內(nèi)容物、肝臟和血液；也可取可疑飼料和飲水作為檢樣。 ? 固體檢樣 ： 可取 30— 50g置具塞三角瓶中，加甲醇（乙酸乙酯、氯仿）適量。室溫浸泡 4— 6h（ 60℃ 以下水浴上浸泡 1— 2h），過濾，濾液在不超過 60℃ 的水浴上揮發(fā)近干，殘渣用乙醇加熱溶解，徹底放冷后過濾，濾液在上述水浴上揮干，殘渣加少量甲醇溶解，備檢。 ? 半固體檢樣： 先在不超過 60℃ 的水浴上將水分蒸干，然后按固體樣品處理。 ? 液體檢樣： 取 30— 50ml待檢液體于分液漏斗中，加氯仿 30ml振搖提取 3次，合并提取液（若含有水分，應(yīng)加無水硫酸鈉適量），置水浴上揮發(fā)近干，備檢。 ? （ 二 ）奈氏試劑反應(yīng) ? [原理 ] ? 氟乙酰胺在強(qiáng)堿性條件下，可水解生成氨，氨與奈氏試劑作用，生成桔紅色沉淀。 ? [試劑 ] ? 奈氏試劑的制法是取碘化汞 ，碘化鉀 8g，共溶于少量蒸餾水中，溶解后補(bǔ)蒸餾水至 50ml，再加 25%氫氧化鈉溶液 50ml，靜置過夜，取上清液置棕色瓶中保存。 ? [操作 ] ? 取備檢樣少許，置于試管中，加蒸餾水 1— 2ml溶解，加奈氏試劑1ml，如有氟乙酰胺存在，則由淡黃色 → 黃色 → 亮黃色 → 深黃色 ，2min后逐漸渾濁，最后生成 桔紅色沉淀 。若有銨鹽存在，加奈氏試劑后會立即生成桔紅色沉淀。 第 七 節(jié) 黃曲霉毒素的檢驗 ? 黃曲霉毒素 （ aflatoxin），也稱作 黃曲毒 素，是一種有強(qiáng)烈生物毒性的化合物，常由黃曲霉及另外幾種霉菌在霉變的谷物中產(chǎn)生，如大米、豆類、花生等，是目前為止最強(qiáng)的 致癌物質(zhì) 。加熱至 280℃ 以上才開始分解，所以一般的加熱不易破壞其結(jié)構(gòu)。黃曲毒素主要有 B B G1與 G2等 4種，又以 B1的毒性最強(qiáng)。食米儲存不當(dāng)，極容易發(fā)霉變黃，產(chǎn)生黃曲毒素。 ? 黃曲毒素與肝癌有密切關(guān)系，還會引起組織失血、厭食等癥狀。 1960年在英國發(fā)生了因喂食黃曲毒素 花生粕 而導(dǎo)致大批火雞暴斃事件。警惕黃曲毒素的危害，要注意剔除霉變的食物顆粒，還可采用以水淘洗的辦法進(jìn)一步凈化易沾染的食物中的霉菌。當(dāng)然，用高溫?zé)⒄ㄖ?280℃ 以上也可以達(dá)到分解毒素和去除污染的效果。 ?一、 臨床特征 ? 急性中毒 ： ? 它是一種劇毒物質(zhì)，毒性比 KCN大 10倍，比砒霜大 68倍，僅次肉毒霉素，是目前已知霉菌中毒性最強(qiáng)的。它的毒害作用，無論對任何動物，主要變化是肝臟，呈急性肝炎、出血性壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和膽管增生。脾臟和胰臟也有輕度的病變。 ? 慢性中毒 ： ? 長期攝入小劑量的黃曲霉毒素則造成慢性中毒。其主要變化特征為肝臟出現(xiàn)慢性損傷，如肝實質(zhì)細(xì)胞變性、肝硬化等。出現(xiàn)動物生長發(fā)育遲緩，體重減輕，母畜不孕或產(chǎn)仔少等系列癥狀。 ? 致癌性： ? AFT是目前所知致癌性最強(qiáng)的化學(xué)物質(zhì) ?二、免疫學(xué)檢驗法 ? 試劑盒簡介 ? 黃曲霉毒素檢驗 試劑盒主要是用來檢測黃曲霉的一種經(jīng)濟(jì)、快捷的檢測初篩工具，現(xiàn)在當(dāng)前市面上主要有黃曲霉毒素 B1試劑盒、黃曲霉毒素 M1試劑盒、黃曲霉毒素總量試劑盒 。 ? 黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強(qiáng)的致癌性，主要存在于谷物、堅果、棉籽、植物油以及一些和人類血液、動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。最主要的 4種毒素分別為： B B G G2。黃曲霉毒素 M1是黃曲霉毒素 B1的羥基化代謝產(chǎn)物，也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，牛乳及其制品易受到黃曲霉毒素 M1污染。 ? 黃曲霉毒素 B1及總量試劑盒 ? [檢測原理 ]該試劑盒采用免疫競爭法分析原理結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行檢測。 ? [檢測范圍 ]糧食 ：花生、小麥、玉米、高粱等； 飼料 ：以小麥麩皮、 玉米面 等糧食原料生產(chǎn)的飼料； ? [技術(shù)指標(biāo) ]檢測下限： ； ? [檢測步驟 ] ? 糧食樣品處理： 稱取 1g樣品（大米、玉米、小麥、花生及其制品經(jīng)過磨細(xì)其粒度小于 2mm）于 10ml離心管中，加入 4ml乙酸乙酯，震蕩 5分鐘，靜置 3分鐘， 在 4000r、 1min離心機(jī)上離心 ，收集 樣液于 1個 平皿，吹干 ， 加入 緩沖 液 2ml反復(fù)沖洗，待檢 。 ? 樣品檢測： 從檢測卡袋中取出檢測卡，在卡上做好樣品編號標(biāo)記；用吸管吸取 平皿 上全部待檢樣液，滴入加樣孔中，加樣后開始計時， 510分鐘內(nèi)觀察結(jié)果； ? 結(jié)果判斷： ? 陰性 :測試線 (T)與對照線 (C)都出現(xiàn)，表明樣品中黃曲霉毒素的濃度小于 ? 陽性 :只有對照線 (C),無測試線 (T)，表明樣品中黃曲霉毒素的濃度大于或等于 。 ? 無效 :對照線 (C)和測試線 (T)都不出現(xiàn)，或者對照線（ C）不出現(xiàn)。 農(nóng)大以你為榮 !