【正文】 存用 1/3（防止打官司） 。對(duì)某些化 學(xué) 結(jié)構(gòu)相似的有毒物質(zhì)，要設(shè)法使之分離。 ?層析技術(shù)的分類 ? (1) 按流動(dòng)相的狀態(tài)分類：用液體作為流動(dòng)相的稱為 液相層析 ，或稱液相色譜；以氣體作為流動(dòng)相的稱為氣相層析 ，或稱氣相色譜。對(duì)檢驗(yàn)單上未詳述的內(nèi)容，特別是發(fā)病前后的情況，如臨床癥狀、尸體剖檢變化、現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查的初步印象、治療效果及要求檢驗(yàn)的項(xiàng)目等要與送檢人員座談并把詳細(xì)情況記錄下來(lái)。如顏色過(guò)深，可加活性炭脫色。主要發(fā)生 豬 ，牛、羊、馬也有發(fā)生。 ? [試劑 ] 格利斯試劑：取甲 — 萘胺 1g，對(duì)氨基苯磺酸 10g，酒石酸 89g，置于乳缽中，研細(xì)，混勻，保存于密封的棕色瓶中，備用。 儀器： YNCLVI型智能化農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀 (農(nóng)藥殘毒、重金屬、亞硝酸鹽、甲醛四合一綜合測(cè)速儀 ) 第三節(jié) 揮發(fā)性毒物的檢驗(yàn) ?一、揮發(fā)性毒物的分離提取 方法 ? 水蒸餾法 ? 揮發(fā)性毒物多具有較高的蒸汽壓，當(dāng)遇酸性溶液同時(shí)加熱時(shí)，可在較原沸點(diǎn)為低溫度下隨水蒸氣蒸餾出來(lái)，根據(jù)這一特性達(dá)到分離目的。嚴(yán)重腐敗的檢材，很難檢出氫氰酸或氰化物。 ? ⑶ 也可用蒸餾液進(jìn)行此反應(yīng)，其方法是取堿性接收液2ml于試管中，加 10%硫酸亞鐵溶液 23滴，微熱，加10%鹽酸酸化，如有氰化物存在，即產(chǎn)生藍(lán)色或藍(lán)綠色，含量高時(shí)，可產(chǎn)生藍(lán)色沉淀。 ? （ 2） 此方法可與快速普魯士藍(lán)法同時(shí)進(jìn)行，即將堿性苦味酸試紙條懸于瓶?jī)?nèi)，瓶口蓋上濾紙做快速普魯士藍(lán)反應(yīng)。各種家畜都能發(fā)生中毒，但以牛、羊?qū)顬槊舾小? ? 中毒途徑大致如下： ? （ 1）吸入汞蒸氣 汞可以升華，許多使用金屬汞的廠礦附近，因汞蒸氣使人畜產(chǎn)生慢性中毒； ? （ 2）誤食用含汞藥物噴灑過(guò)的飼料（毒谷），或因消毒的廄舍和草地而中毒； ? （ 3）水體受到汞的污染 水中微生物可把無(wú)機(jī)汞轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)汞（甲基汞），使毒性猛增，危害人畜； ? （ 4）水生植物和動(dòng)物有富集汞的能力 在一定汞濃度的水中生活的魚(yú)不一定中毒致死；但人和動(dòng)物食用魚(yú)、魚(yú)粉或其他魚(yú)制品后，可產(chǎn)生中毒，日本水俁病及狂貓?zhí)＞褪沁@一原因引起的； ? （ 5）過(guò)去生產(chǎn)的有機(jī)汞殺蟲(chóng)劑 至今在環(huán)境中殘留，動(dòng)物食后亦可引起慢性中毒。 ? 有機(jī)汞吸收率比無(wú)機(jī)汞高得多，因而毒性作用也特別大，半衰期長(zhǎng)，常引起慢性中毒。 5. 治療 ? 本病主要作預(yù)防，很難治愈，且治療費(fèi)用較大。慢性中毒則以腎最好，其次為肝、毛（羽）和腦。 ? （ 4）氯化亞錫鹽酸溶液。銅片表面變成銀白色，可能含有汞化合物，再做汞的確證試驗(yàn)。 ? （ 6）雷因希試驗(yàn)也是砷、銻、鉍、銀等金屬的預(yù)試驗(yàn)，陰性反應(yīng)時(shí)（銅片不變色），可肯定不存在此 5種金屬，當(dāng)出現(xiàn)顏色反應(yīng)時(shí)，其區(qū)別在于銅片變色不同， 砷為黑色，銻為灰紫色，鉍為暗灰色，銀為灰白色。鉛礦污染、農(nóng)藥污染、舔食含鉛油漆染料、汽車(chē)尾氣（汽油中加有含鉛防爆劑，公路兩旁青草含鉛量 500mg/kg,動(dòng)物采食可中毒） ?二 、 鉛的檢驗(yàn) ? （一） 、檢樣的采集與處理 ? 急性中毒的病畜以血液、尿液、嘔吐物、糞、剩余飼料為檢材。 禽 病禽表現(xiàn)為燥渴而大量飲水和驚慌不安的尖叫。做一次吸附薄層層析只需要幾分鐘至幾十分鐘；而紙層析需用數(shù)小時(shí)至數(shù)十小時(shí)；柱層析需時(shí)更長(zhǎng)，常常是數(shù)十小時(shí)乃至數(shù)日。 ? [原理 ] 薄層層析是把 固定相 （吸附劑）均勻的在支持物（玻璃板）上鋪一薄層，層析就在薄層板上進(jìn)行。為了得到較好的分離效果，應(yīng)根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)來(lái)選擇粘合劑。 ? （ 2）硬板制膜器 在一塊寬 30cm、長(zhǎng) 35— 40cm的玻璃板（底板）的中間放一塊薄層支持板，在支持板的兩側(cè)各貼一條膠布（橡皮膏），再取二條與支持板同樣厚，比支持板稍長(zhǎng)的玻璃條，貼上同樣大小的膠布，然后將兩膠布用膠水粘合在一起，即制成一簡(jiǎn)單的制膜器。 ? （ 4）硅膠（氧化鋁）淀粉板 一般淀粉的含量為 5%，把淀粉和吸附劑混勻，加 2倍量的水調(diào)和并在 85℃ 水浴中或直火加熱數(shù)分鐘，當(dāng)?shù)矸圩兊糜姓承院笤佥o層。 （ 2）手動(dòng)制板 將調(diào)好的一定量糊狀吸附劑倒在支持板上，并用玻棒大致攤開(kāi)，然后手持支持板輕輕振動(dòng)，使糊狀吸附劑均勻鋪開(kāi)。 點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)注意以下方面： （ 1）最好用與展開(kāi)劑同樣的溶劑溶解檢樣，否則點(diǎn)樣后必須待檢樣溶劑揮干后再展開(kāi)。 （ 1）應(yīng)是純的試劑（ GR或 AR），若含有雜質(zhì)會(huì)影響展開(kāi)能力。 ? （ 1）上行展開(kāi)法 ? ①近水平上行 展開(kāi)法。 ? 在毒物檢驗(yàn)工作中常用的顯色方法有噴霧顯色、蒸氣顯色和紫外光下顯色。有些化合物本身不發(fā)熒光，可用硅膠 GF254板分離，在紫外光燈照射下整個(gè)板面顯黃綠色熒光，斑點(diǎn)部分呈暗色。但由于檢驗(yàn)前很難確定是哪種農(nóng)藥引起的中毒，所以通常用 苯、氯仿、二氯甲烷 ，可將絕大多數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥提取出來(lái)。 ? （ 3）液體檢樣的提取 若檢樣是水或尿液可取適量置于分液漏斗中，加氯仿或苯振搖提取，分出氯仿或苯于蒸發(fā)皿中，再重復(fù)提取 1— 2次，合并提取液，在水浴上蒸發(fā)近干，待檢。 ? 膽堿酯酶活性與膽堿酯酶試紙顏色變化 試紙顏色 酶的活性 中毒程度 紅色 紫紅色 深紫色 藍(lán)色 80— 100 60 40 20 正常 輕度 中度 重度 ? [說(shuō)明 ] ? （ 1） 采血及檢驗(yàn)所用器具均應(yīng)洗滌干凈。故判定結(jié)果時(shí)要結(jié)合臨床癥狀。 ? 氯化鈀顯色 ? 將薄層板噴 %氯化鈀溶液，若含有含硫有機(jī)磷化合物，立即顯出黃色或棕色斑點(diǎn)，背景無(wú)色。取鄰甲酚 1ml，加水至 100ml，使用時(shí)充分振搖 ? [操作 ] 取檢樣提取液 2ml，加 10%氫氧化鈉溶液 ，鋅粉 ，充分振搖，在水浴上加熱至黃色褪去（或冒氣泡）沿管壁緩緩加入鄰甲酚飽和溶液 ，如有含硝基苯的有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥存在時(shí)，呈現(xiàn) 藍(lán)色環(huán) ，振搖后全部變藍(lán)，若含量低或還原不完全時(shí)，反應(yīng)結(jié)果僅顯 綠色 。若溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，酸化后會(huì)呈藍(lán)色或藍(lán)綠色。 ? [操作 ] ? 取定性濾紙一片，滴加檢樣提取濃縮液 1滴，散開(kāi)后加10%氫氧化鈉溶液 1滴，稍干，再加 1%間苯二酚乙醇溶液1滴，充分散開(kāi)后，在電爐上直火加熱（或用電吹風(fēng)機(jī)的熱風(fēng)吹），如果有敵敵畏或敵百蟲(chóng)，在斑點(diǎn)周?chē)霈F(xiàn)一 粉紅色圈 。 ? 第六節(jié) 殺鼠藥的檢驗(yàn) ? 毒鼠藥是一類滅鼠的輕度或劇毒的農(nóng)藥，常用的有機(jī)氟化合物、磷化鋅、安妥、敵鼠、敵鼠強(qiáng)等 ? 鼠藥在保護(hù)農(nóng)田、牧草、森林方面發(fā)揮了巨大的作用，研究表明嚙齒類可傳播寄生蟲(chóng)病和多種流行病，對(duì)動(dòng)物和人類有害無(wú)益。 ? 因?yàn)榱谆\在潮濕的空氣中容易分解，特別在偏酸的胃內(nèi)容物中或腐敗的飼料中更易分解，所以必須及時(shí)進(jìn)行檢驗(yàn)。 ? [說(shuō)明 ] ? （ 1）硫化氫與硝酸銀反應(yīng)，也可使硝酸銀試紙條變黑，用醋酸鉛棉花可使硫化氫與醋酸鉛反應(yīng)，生成黑色的硫化鉛，以排除硫化氫的干擾。 ? 液體檢樣， 可取適量于分液漏斗中，先加稀鹽酸酸化，再用氯仿振搖提取，分出氯仿液，在水浴上濃縮至近干，供定性檢驗(yàn)。 ? [操作 ] 取提取濃縮液 5滴，加無(wú)水乙醇 1ml稀釋，然后逐滴加入 5%鹽酸羥胺溶液，放置 2030分鐘，如含有敵鼠及其鈉鹽，可出現(xiàn) 白色渾濁 ，含量高時(shí)，可出現(xiàn)白色沉淀。 ? [操作 ] ? 取備檢樣少許，置于試管中，加蒸餾水 1— 2ml溶解，加奈氏試劑1ml，如有氟乙酰胺存在，則由淡黃色 → 黃色 → 亮黃色 → 深黃色 ，2min后逐漸渾濁，最后生成 桔紅色沉淀 。警惕黃曲毒素的危害，要注意剔除霉變的食物顆粒，還可采用以水淘洗的辦法進(jìn)一步凈化易沾染的食物中的霉菌。 ? 致癌性： ? AFT是目前所知致癌性最強(qiáng)的化學(xué)物質(zhì) ?二、免疫學(xué)檢驗(yàn)法 ? 試劑盒簡(jiǎn)介 ? 黃曲霉毒素檢驗(yàn) 試劑盒主要是用來(lái)檢測(cè)黃曲霉的一種經(jīng)濟(jì)、快捷的檢測(cè)初篩工具，現(xiàn)在當(dāng)前市面上主要有黃曲霉毒素 B1試劑盒、黃曲霉毒素 M1試劑盒、黃曲霉毒素總量試劑盒 。 農(nóng)大以你為榮 ! 。最主要的 4種毒素分別為： B B G G2。 ?一、 臨床特征 ? 急性中毒 ： ? 它是一種劇毒物質(zhì)，毒性比 KCN大 10倍，比砒霜大 68倍，僅次肉毒霉素，是目前已知霉菌中毒性最強(qiáng)的。 第 七 節(jié) 黃曲霉毒素的檢驗(yàn) ? 黃曲霉毒素 （ aflatoxin），也稱作 黃曲毒 素，是一種有強(qiáng)烈生物毒性的化合物，常由黃曲霉及另外幾種霉菌在霉變的谷物中產(chǎn)生，如大米、豆類、花生等，是目前為止最強(qiáng)的 致癌物質(zhì) 。 ? 固體檢樣 ： 可取 30— 50g置具塞三角瓶中，加甲醇（乙酸乙酯、氯仿）適量。 ? （二）三氯化鐵反應(yīng) ? [原理 ] 敵鼠或敵鼠鈉鹽都能與三氯化鐵反應(yīng)，生成紅色沉淀。 ? （ 3）此反應(yīng)如果沒(méi)有干燥管或“ Y”形管，可在三角瓶口處塞一些醋酸鉛棉花，然后用方形濾紙片加上試劑后，直接蓋在瓶口上進(jìn)行檢驗(yàn)。 ? [試劑 ] ? （ 1） 5%溴化汞乙醇溶液。 ? 鼠藥的臨床癥狀鑒別： ? 氟乙酰胺 中毒常出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的全身陣攣性抽搐 。 ? [說(shuō)明 ] 醛類化合物對(duì)本反應(yīng)有干擾，也可呈紅色圈，若將氫氧化鈉改用碳酸鈉，并改在試管中進(jìn)行試驗(yàn)，可加以區(qū)別。 ? （ 2） 加亞硝基鐵氰化鈉的量不可過(guò)多，否則影響正常色澤。 ? [原理 ] 含硫有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥（ 105 391樂(lè)果等）經(jīng)水解均能生成硫醚（硫醇）化合物，進(jìn)一步與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)，在酸性條件下生成紅色化合物。 ? 鄰聯(lián)甲苯胺 （甲土力?。?顯色 ? 將薄層板噴以 %鄰聯(lián)甲苯胺溶液，再置紫外下（或陽(yáng)光下）照射，若含有多鹵代烴（含氯的）有機(jī)磷顯黃色或藍(lán)色（敵敵畏、敵百蟲(chóng)）斑點(diǎn)。結(jié)果判定方法如下： ? 黃 色 膽堿酯酶活性正常（一） ? 黃綠色 膽堿酯酶活性輕度降低 （ +） ? 淡藍(lán)色 膽堿酯酶活性中度降低（ ++） ? 藍(lán) 色 膽堿酯酶活性重度降低 （ +++） ? 深藍(lán)色 膽堿酯酶活性極度降低 （ ） ? ? （三）薄層層析檢測(cè)法 ? [吸附劑 ] 硅膠 G或硅膠 CMC硬板、氧化鋁軟板（用時(shí)自制）。 ? （ 2） 檢驗(yàn)時(shí)，血滴不可過(guò)大，直徑以 — 。若含雜質(zhì)較多，則需進(jìn)一步凈化，凈化一般用活性炭脫色就可以了。 ? 有機(jī)磷農(nóng)藥在堿性溶液中易水解，有些有機(jī)磷農(nóng)藥具有揮發(fā)性，因此一般應(yīng)在中性或弱酸性條件下提取。若經(jīng)呼吸道引起的中毒，可取呼吸道分泌物、血液、肺臟及肝臟。 ? 噴霧顯色后多數(shù)可使斑點(diǎn)顯現(xiàn)出來(lái)。 ? （ 2）下行展開(kāi)法 ? 薄層展開(kāi)時(shí)的注意事項(xiàng) ? （ 1） 展開(kāi)容器必須是密閉的，最好是磨砂玻璃蓋。 （ 3）能溶解檢樣中的各種成分。若點(diǎn)樣量太小，微量組分無(wú)法檢出；點(diǎn)樣量過(guò)大，超過(guò)了吸附劑的線性分離范圍，會(huì)使斑點(diǎn)重疊、分離不清。 ? 不同吸附劑薄層的制備條件 吸附劑 溶劑 吸附劑：溶劑 活化條件 硅膠 G 氧化鋁 G 聚酰胺 硅膠（ 5%淀粉 ） 硅膠（ CMC） 蒸餾水 蒸餾水 甲醇 蒸餾水 1%CMC水溶液 1： 2— 3 1： 1— 3 1： 4— 10 1： 2 1： 2 105110℃ 30min 200℃ 4h 80℃ 15min 105℃ 30min 105℃ 30min (二 ) 點(diǎn)樣 點(diǎn)樣是一項(xiàng)細(xì)致的工作，要求樣點(diǎn)集中，直徑不能大于 3mm。這樣鋪好的薄層板即為干板（軟板）。由于加粘合劑的種類不同，硬板又分為多種，常用的有以下幾種： ? （ 1）硅膠（氧化鋁） H板 是不加粘合劑的硬板，直接將吸附劑調(diào)成糊狀后鋪板，這種板制成后板面較軟，易破壞 。用于預(yù)試驗(yàn)可裁成 2 7cm或 2 10cm。檢樣中吸附能力強(qiáng)的組分，不易發(fā)生溶解，在薄層板上移動(dòng)速度慢、距離短；反之，吸附能力弱的組分，容易溶解，在薄層板上移動(dòng)速度快、距離長(zhǎng)，從而使檢樣中各組分將按其吸附能力強(qiáng)弱不同得以分離?？梢允剐再|(zhì)相似的化合物，得到分離。運(yùn)動(dòng)失調(diào)，時(shí)而轉(zhuǎn)圈，時(shí)而倒地，步態(tài)不穩(wěn)， （ 二 ） 、眼結(jié)膜囊內(nèi)液氯化鈉的檢驗(yàn) ? 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