【正文】 農(nóng)大以你為榮 ! 。 ? 樣品檢測： 從檢測卡袋中取出檢測卡，在卡上做好樣品編號標記；用吸管吸取 平皿 上全部待檢樣液，滴入加樣孔中，加樣后開始計時， 510分鐘內(nèi)觀察結(jié)果； ? 結(jié)果判斷： ? 陰性 :測試線 (T)與對照線 (C)都出現(xiàn)，表明樣品中黃曲霉毒素的濃度小于 ? 陽性 :只有對照線 (C),無測試線 (T)，表明樣品中黃曲霉毒素的濃度大于或等于 。 ? 黃曲霉毒素 B1及總量試劑盒 ? [檢測原理 ]該試劑盒采用免疫競爭法分析原理結(jié)合膠體金標記技術進行檢測。最主要的 4種毒素分別為： B B G G2。 ? 致癌性： ? AFT是目前所知致癌性最強的化學物質(zhì) ?二、免疫學檢驗法 ? 試劑盒簡介 ? 黃曲霉毒素檢驗 試劑盒主要是用來檢測黃曲霉的一種經(jīng)濟、快捷的檢測初篩工具，現(xiàn)在當前市面上主要有黃曲霉毒素 B1試劑盒、黃曲霉毒素 M1試劑盒、黃曲霉毒素總量試劑盒 。其主要變化特征為肝臟出現(xiàn)慢性損傷，如肝實質(zhì)細胞變性、肝硬化等。脾臟和胰臟也有輕度的病變。 ?一、 臨床特征 ? 急性中毒 ： ? 它是一種劇毒物質(zhì)，毒性比 KCN大 10倍，比砒霜大 68倍，僅次肉毒霉素，是目前已知霉菌中毒性最強的。警惕黃曲毒素的危害，要注意剔除霉變的食物顆粒，還可采用以水淘洗的辦法進一步凈化易沾染的食物中的霉菌。 ? 黃曲毒素與肝癌有密切關系，還會引起組織失血、厭食等癥狀。黃曲毒素主要有 B B G1與 G2等 4種，又以 B1的毒性最強。 第 七 節(jié) 黃曲霉毒素的檢驗 ? 黃曲霉毒素 （ aflatoxin），也稱作 黃曲毒 素，是一種有強烈生物毒性的化合物，常由黃曲霉及另外幾種霉菌在霉變的谷物中產(chǎn)生，如大米、豆類、花生等，是目前為止最強的 致癌物質(zhì) 。 ? [操作 ] ? 取備檢樣少許，置于試管中，加蒸餾水 1— 2ml溶解，加奈氏試劑1ml，如有氟乙酰胺存在，則由淡黃色 → 黃色 → 亮黃色 → 深黃色 ，2min后逐漸渾濁，最后生成 桔紅色沉淀 。 ? （ 二 ）奈氏試劑反應 ? [原理 ] ? 氟乙酰胺在強堿性條件下，可水解生成氨，氨與奈氏試劑作用，生成桔紅色沉淀。 ? 半固體檢樣： 先在不超過 60℃ 的水浴上將水分蒸干，然后按固體樣品處理。 ? 固體檢樣 ： 可取 30— 50g置具塞三角瓶中，加甲醇（乙酸乙酯、氯仿）適量。 ? [操作 ] 取提取濃縮液 5滴，加無水乙醇 1ml稀釋，然后逐滴加入 5%鹽酸羥胺溶液，放置 2030分鐘，如含有敵鼠及其鈉鹽，可出現(xiàn) 白色渾濁 ，含量高時，可出現(xiàn)白色沉淀。 ? （三）鹽酸羥胺反應 ? [原理 ] 敵鼠或敵鼠鈉都能與鹽酸羥胺反應，縮合成肟酸，呈現(xiàn)白色渾濁。 ? [操作 ] 取提取濃縮液少許，加無水乙醇 ，緩慢加 9%三氯化鐵溶液 1—— 2滴，若含有敵鼠或敵鼠鈉鹽，有 紅色 懸浮物生成。 ? （二）三氯化鐵反應 ? [原理 ] 敵鼠或敵鼠鈉鹽都能與三氯化鐵反應，生成紅色沉淀。 ? 液體檢樣， 可取適量于分液漏斗中，先加稀鹽酸酸化，再用氯仿振搖提取，分出氯仿液，在水浴上濃縮至近干，供定性檢驗。 ? 取固體檢樣或半固體 （預先在水浴上將水分揮干）檢樣適量，置于具塞三角瓶中，加無水乙醇適量，在水浴上溫浸 15min，過濾，濾液在水浴上揮干，殘渣加無水乙醇 溶解，濾去不溶物，濾液濃縮至少量供定性檢驗用。慢中毒或死亡者，可采取血液、肝臟、腎臟作為檢樣。 ? （ 3）此反應如果沒有干燥管或“ Y”形管，可在三角瓶口處塞一些醋酸鉛棉花，然后用方形濾紙片加上試劑后，直接蓋在瓶口上進行檢驗。 ? [說明 ] ? （ 1）硫化氫與硝酸銀反應，也可使硝酸銀試紙條變黑，用醋酸鉛棉花可使硫化氫與醋酸鉛反應，生成黑色的硫化鉛，以排除硫化氫的干擾。將脫脂棉浸入 10%醋酸鉛溶液中，取出擠去溶液，晾干，貯于干燥處保存。 ? （ 3）碘化鎘汞溶液。 ? [試劑 ] ? （ 1） 5%溴化汞乙醇溶液。 ? 因為磷化鋅在潮濕的空氣中容易分解，特別在偏酸的胃內(nèi)容物中或腐敗的飼料中更易分解，所以必須及時進行檢驗。 ?一、磷化鋅的檢驗 ? （一）檢材的采取及處理 ? 磷化鋅中毒時，可采取嘔吐物，胃內(nèi)容物和可疑的飼料作為檢樣。 ? 抗凝血類 敵鼠 中毒 ： 既往體?。蝗话l(fā)生不明原因的多處出血，尤其是牙齦、皮膚出血和尿血并存時應懷疑。 ? 鼠藥的臨床癥狀鑒別： ? 氟乙酰胺 中毒常出現(xiàn)反復發(fā)作的全身陣攣性抽搐 。 ? 第六節(jié) 殺鼠藥的檢驗 ? 毒鼠藥是一類滅鼠的輕度或劇毒的農(nóng)藥，常用的有機氟化合物、磷化鋅、安妥、敵鼠、敵鼠強等 ? 鼠藥在保護農(nóng)田、牧草、森林方面發(fā)揮了巨大的作用，研究表明嚙齒類可傳播寄生蟲病和多種流行病，對動物和人類有害無益。 ? 準備工作 ? 實驗前用一匹馬采血，分離血清，然后給馬投吸敵百蟲 15— 20g，觀察中毒癥狀后，采血，分離血清。 ? 以上僅介紹了 3種有機磷農(nóng)藥的定性檢驗方法，如需進一步確定為何種農(nóng)藥，可查閱有關毒物檢驗資料。 ? [說明 ] 醛類化合物對本反應有干擾，也可呈紅色圈，若將氫氧化鈉改用碳酸鈉，并改在試管中進行試驗，可加以區(qū)別。 ? [操作 ] ? 取定性濾紙一片，滴加檢樣提取濃縮液 1滴，散開后加10%氫氧化鈉溶液 1滴，稍干，再加 1%間苯二酚乙醇溶液1滴，充分散開后，在電爐上直火加熱（或用電吹風機的熱風吹），如果有敵敵畏或敵百蟲，在斑點周圍出現(xiàn)一 粉紅色圈 。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%氫氧化鈉溶液。 ? 含多鹵代烴磷酸酯類農(nóng)藥 （敵百蟲、敵敵畏、二溴磷）的檢驗 — 間苯二酚反應。 ? （ 2） 加亞硝基鐵氰化鈉的量不可過多，否則影響正常色澤。若溫度過高，時間過長，酸化后會呈藍色或藍綠色。 ? [操作 ] 取苯或氯仿提取濃縮液 2ml,自然揮干，加蒸餾水 2ml溶解，移入小試管中，加 10%亞硝基鐵氰化鈉溶液 12滴， 10%氫氧化鈉溶液 5滴，置 2535℃ 水浴中加熱1— 2min，取出放冷，沿管壁逐滴加入 6mol/L鹽酸 5— 6滴，如有能水解成硫醚（硫醇）的有機磷酸酯 類農(nóng)藥存在時，在二液接觸面出現(xiàn) 紅色環(huán) ，輕輕振搖溶液即全部變紅。 ? （ 2） 6mol/L（或濃 HCl）鹽酸。 ? [原理 ] 含硫有機磷酸酯類農(nóng)藥（ 105 391樂果等）經(jīng)水解均能生成硫醚（硫醇）化合物，進一步與亞硝基鐵氰化鈉反應，在酸性條件下生成紅色化合物。取鄰甲酚 1ml，加水至 100ml，使用時充分振搖 ? [操作 ] 取檢樣提取液 2ml，加 10%氫氧化鈉溶液 ，鋅粉 ，充分振搖，在水浴上加熱至黃色褪去（或冒氣泡）沿管壁緩緩加入鄰甲酚飽和溶液 ，如有含硝基苯的有機磷酸酯類農(nóng)藥存在時，呈現(xiàn) 藍色環(huán) ，振搖后全部變藍，若含量低或還原不完全時，反應結(jié)果僅顯 綠色 。 ? （ 2）鋅粉。 ? 含硝基苯的有機磷酸酯類農(nóng)藥 （對硫磷）的檢驗 — 靛酚反應 ? [原理 ] 對硫磷經(jīng)水解產(chǎn)生對硝基酚，可還原成對氨基酚，對氨基酚又與鄰甲酚作用，生成靛酚，在堿性條件下呈藍色。 ? 鄰聯(lián)甲苯胺 （甲土力丁） 顯色 ? 將薄層板噴以 %鄰聯(lián)甲苯胺溶液，再置紫外下（或陽光下）照射，若含有多鹵代烴（含氯的）有機磷顯黃色或藍色（敵敵畏、敵百蟲）斑點。 ? 氯化鈀顯色 ? 將薄層板噴 %氯化鈀溶液，若含有含硫有機磷化合物，立即顯出黃色或棕色斑點，背景無色。 ? [顯色 ] 展開后的硬板取出放于通風櫥中，待溶劑揮干后顯色。 ? %磷聯(lián)甲苯胺（甲土力?。┮掖既芤骸＝Y(jié)果判定方法如下： ? 黃 色 膽堿酯酶活性正常（一） ? 黃綠色 膽堿酯酶活性輕度降低 （ +） ? 淡藍色 膽堿酯酶活性中度降低（ ++） ? 藍 色 膽堿酯酶活性重度降低 （ +++） ? 深藍色 膽堿酯酶活性極度降低 （ ） ? ? （三）薄層層析檢測法 ? [吸附劑 ] 硅膠 G或硅膠 CMC硬板、氧化鋁軟板（用時自制）。故判定結(jié)果時要結(jié)合臨床癥狀。 ? （ 4） 如無溴化乙酰膽堿，可用氯化乙酰膽堿代替，效果一樣。觀察血斑時，要看試紙反面，以血斑中心顏色為準，最好成一斜角觀察，不要直接對光。 ? （ 2） 檢驗時，血滴不可過大，直徑以 — 。 ? 膽堿酯酶活性與膽堿酯酶試紙顏色變化 試紙顏色 酶的活性 中毒程度 紅色 紫紅色 深紫色 藍色 80— 100 60 40 20 正常 輕度 中度 重度 ? [說明 ] ? （ 1） 采血及檢驗所用器具均應洗滌干凈。 ? [操作 ] ? 取乙酰膽堿試紙兩片置于載玻片兩端，分別加被檢病畜血和健康同種動物血（或健康馬血） 1滴，標記后，立即加蓋另一載玻片，用橡皮筋扎緊，置 37℃ 濕箱中或腋下保溫 20min后取出，觀察紙片顏色變化。 ? [試劑 ] ? 乙酰膽堿試紙制備。若含雜質(zhì)較多，則需進一步凈化，凈化一般用活性炭脫色就可以了。 ? （ 3）液體檢樣的提取 若檢樣是水或尿液可取適量置于分液漏斗中，加氯仿或苯振搖提取，分出氯仿或苯于蒸發(fā)皿中，再重復提取 1— 2次，合并提取液，在水浴上蒸發(fā)近干，待檢。加氯仿或苯（ 403020ml）浸泡，并不斷振搖， 1h后過濾，收濾液于蒸發(fā)皿中，殘渣用氯仿或苯洗兩次，合并洗液于蒸發(fā)皿中，在 60℃ 以下水浴上蒸發(fā)近干，供檢。根據(jù)檢樣的種類不同，農(nóng)藥的性質(zhì)不同，常采用下述方法進行提取。 ? 有機磷農(nóng)藥在堿性溶液中易水解，有些有機磷農(nóng)藥具有揮發(fā)性，因此一般應在中性或弱酸性條件下提取。但由于檢驗前很難確定是哪種農(nóng)藥引起的中毒，所以通常用 苯、氯仿、二氯甲烷 ，可將絕大多數(shù)有機磷農(nóng)藥提取出來。提取時原則上極性強的有機磷，用強極性的有機溶劑提取。 二、有機磷農(nóng)藥的檢驗 ? 提取與分離 有機磷農(nóng)藥絕大多數(shù)是脂溶性毒物，易溶解在有機溶劑中。若經(jīng)呼吸道引起的中毒，可取呼吸道分泌物、血液、肺臟及肝臟。有些化合物本身不發(fā)熒光，可用硅膠 GF254板分離，在紫外光燈照射下整個板面顯黃綠色熒光，斑點部分呈暗色。顯色后的薄層板應立即觀察，否則置于空氣中過久，斑點上的顏色會因揮發(fā)而褪去。 ? 蒸氣顯色 把易揮發(fā)的某種試劑置于密閉的容器內(nèi)（如標本缸、干燥器等），使其蒸汽充滿整個容器，然后將已揮干展開劑的薄層板放入，使蒸汽與檢樣斑點作用面顯色。 ? 噴霧顯色后多數(shù)可使斑點顯現(xiàn)出來。 ? 在毒物檢驗工作中常用的顯色方法有噴霧顯色、蒸氣顯色和紫外光下顯色。 ? （四）顯色 ? 有些物質(zhì)展開后即能顯示不同顏色的斑點如染料；而大多數(shù)物質(zhì)展開后看不到斑點位置，必須經(jīng)顯色才能確定斑點的位置。將展開槽平放在臺面上時，液層厚度以 5— 7mm為宜；斜放與臺成 15— 20度角時，以液面不浸及樣點為度。 ? （ 2）下行展開法 ? 薄層展開時的注意事項 ? （ 1） 展開容器必須是密閉的，最好是磨砂玻璃蓋。 ? （ 1）上行展開法 ? ①近水平上行 展開法。展開槽可分為立式和臥式兩種。 （ 5）容易與檢樣中所需組分分開。 （ 3）能溶解檢樣中的各種成分。 （ 1）應是純的試劑（ GR或 AR），若含有雜質(zhì)會影響展開能力。 展開劑的選擇 常用的展開劑是某種有機溶劑或混合有機溶劑。 （ 4）點樣速度要快，以免影響薄層板的活度，使分離效果受到影響。若點樣量太小，微量組分無法檢出；點樣量過大，超過了吸附劑的線性分離范圍，會使斑點重疊、分離不清。 點樣時應注意以下方面： （ 1）最好用與展開劑同樣的溶劑溶解檢樣，否則點樣后必須待檢樣溶劑揮干后再展開。如果點樣量較大或為了濃縮的目的需要反復點樣時，每次點樣的量不可過大，樣點直徑必須控制在 3mm以內(nèi)，重復點樣時，必須待前次點樣的樣點干后再點