【正文】 ? 黃曲霉毒素是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強的致癌性，主要存在于谷物、堅果、棉籽、植物油以及一些和人類血液、動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。若有銨鹽存在，加奈氏試劑后會立即生成桔紅色沉淀。必要時可用中性氧化鋁柱純化。 ?一、磷化鋅的檢驗 ? （二）磷化氫的檢驗 — 溴化汞、硝酸銀、碘化鎘汞試紙法 ? [原理 ] 磷化鋅遇酸分解，產(chǎn)生磷化氫，磷化氫與溴化汞、硝酸銀、碘化鎘汞作用，呈現(xiàn)不同的顏色反應。其中敵敵畏比敵百蟲顯色快。 （四）個別有機磷農(nóng)藥的化學檢驗 ? 含硫有機磷酸酯類農(nóng)藥的檢驗 —— 亞硝基鐵氰化鈉反應。 ? （ 6） 當紙片顏色變化不易觀察，難以判定結(jié)果時，可將被檢全血改用被檢血清，二者操作方法相同，只是當試紙片加上被檢血清和陰性對照血清時均顯 藍色 。 ? 凈化 被檢樣經(jīng)有機溶劑提取并濃縮后，如果含雜質(zhì)較少，可直接檢驗。 ? （一）樣品的采取及處理 ? 樣品的采取 有機磷農(nóng)藥中毒時，最適宜的檢樣：若經(jīng)消化道引起的中毒，生前可取病畜的嘔吐物，洗胃時第一次導出液，血液；有些有機磷農(nóng)藥（敵百蟲、對硫磷、甲基對硫磷等）中毒時，還可取尿液；死后可取胃及胃內(nèi)容物、血液、肝臟；此外還可取病畜吃剩的飼料或飲水。 ? ②近垂直上行 展開法。 （ 2）點樣量應根據(jù)薄層厚度、檢樣和吸附劑的性質(zhì)、顯色劑的靈敏度以及含量測定的方法而定。 ? 干鋪板法 取 150200目的層析用氧化鋁（或硅膠）撒于玻璃支持板上，調(diào)節(jié)好干板制膜器兩端塑料套圈的距離，兩手捏住制膜器的兩端，均勻的緩緩向前移動，即可鋪成平滑、均勻的薄層。 ? 支持物 ? 即玻璃板，可根據(jù)需要裁成不同規(guī)格。 ? 分離效率高。中毒時間較長者取其肝、腎、腦、骨為宜。 ? 在加熱過程中要不斷補加 6%的鹽酸，使保持原有的體積和酸度 。 ? 剩余飼料、嘔吐物、胃內(nèi)容物、尿可直接進行雷因希(Reinsch)試驗，當陽性時，進一步做汞的確證試驗。以 中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害為主 ，如無食欲、平衡失調(diào)、視力障礙甚至失明、聽力障礙、痙攣、輕癱、昏睡和死亡。汞中毒不僅能造成畜禽大批死亡，而且受其污染的動物性食品被人食用后也能危害人的健康 。 ? 苦味酸試紙法 （靈敏度 15ug） ? [原理 ] 氰化物在弱酸性條件下受熱產(chǎn)生氫氰酸，遇碳酸鈉生成氰化鈉，再遇苦味酸即生成異紫酸鈉，呈玫瑰色。 ?離心法 ? 血液及尿液檢樣不適宜用水蒸氣蒸餾法分離提取揮發(fā)性毒物，可采取離心分離提取，取血液及尿液 10ml與50ml離心管中，加冰乙酸、碳酸鉀充分混合，離心取上清液供檢。 ?二、亞硝酸鹽的檢驗 ?（一）檢材及處理 ? 亞硝酸鹽為水溶性毒物，故可采取剩余飼料、嘔吐物、胃內(nèi)容物及血液等作檢材，檢材用水浸法或透析法處理，取濾液或透析液作檢液。 ? （二）檢驗結(jié)果的判定和報告 ? 毒物檢驗及結(jié)果通知單 編號 檢驗編號 接收時間 年 月 日 送檢單位 送檢人 送檢材料 采樣時間 采樣重量 包裝 發(fā)病情況 送檢要求 檢驗結(jié)果 通知時間 編號 ? 檢驗結(jié)果與臨床記錄完全符合。 ? 3） 、要嚴格控制好提取過程中的各種條件。 ? 由于許多毒物具有相同毒性作用，引起中毒癥狀也大致相同，因此，動物試驗最好在化學試驗基礎(chǔ)上進行，互為印證，才能得出正確結(jié)論 。 根據(jù)了解的情況或預試驗所得到的線索，必須進行一系列的定性反應加以確證。 ? 2 檢材的封裝要適當 ? 檢材要裝在潔凈的玻璃瓶或清潔無損的塑料袋內(nèi)，各種材料都要貼上標簽，注明檢樣名稱，不能混放。常見重要毒物的檢驗 毒物檢驗的基本知識 1 2 4 水溶性毒物的檢驗 2 揮發(fā)性毒物的檢驗 3 金屬毒物及微量元素的檢驗 4 農(nóng)藥的檢驗 5 殺鼠藥的檢驗 6 黃曲霉毒素的檢驗 7 第一節(jié) 毒物檢驗的一般知識 ?概念 ? ： ? 是一類特殊的毒物，是由活的機體分泌的具有生物活性的物質(zhì)。瓶口要塞緊，袋口要扎牢，以防外漏。定性反應多數(shù)是化學反應方法， 根據(jù)被檢毒物的特殊化學反應，判定毒物是否存在，因此，使用的化學反應必須容易辨認，如溶液顏色的改變、沉淀的生成或溶解、氣體的生成等。 動物試驗 ?（四）做好檢驗前的準備工作 ? 保證實驗試劑和儀器的質(zhì)量 ? （ 1）毒檢試驗一般要求二級品（分析純） AR。因為一種成熟的提取方法所規(guī)定的各種條件（如溫度、 PH、時間、試劑加入的方式與 程 序等。 ? 檢驗的各項結(jié)果均為陽性（如可疑飼料、胃內(nèi)容物、嘔吐物等）與中毒病畜的臨癥、尸變完全一致，可做出某種毒物中毒的結(jié)論。 ? ①胃內(nèi)容物、嘔吐物、剩余飼料中亞硝酸鹽的提?。喝∩鲜鰴z材 10到 20克加適量蒸餾水調(diào)成糊狀，過濾，濾液若有顏色，可用活性炭脫色。 ?微量擴散法 ? 適用于各種揮發(fā)性毒物的分離提取，特別是被檢樣量很小時，不宜進行水蒸氣蒸餾，用此方法分離極為方便。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%酒石酸溶液。 58 汞 ?汞 (mercury， Hg)，又稱水銀，是唯一在常溫下呈液態(tài)并易流動的金屬 ?？谇?、腸道炎癥，牙齒松動或脫落，瘙癢脫毛，預后多不良。肝、腎、血液等檢材最好破壞有機質(zhì)后再進行檢驗。 ? [說明 ] ? （ 1） 本試驗中鹽酸濃度宜在 2%8%之間，濃度過高可引起汞揮發(fā)，過低反應不易進行。檢材需做有機質(zhì)破壞，如有機質(zhì)含量不多，可直接灼燒，殘渣用 5%硝酸在水浴上溶解，供檢?？梢允剐再|(zhì)相似的化合物，得到分離。用于預試驗可裁成 2 7cm或 2 10cm。這樣鋪好的薄層板即為干板（軟板）。若點樣量太小，微量組分無法檢出；點樣量過大，超過了吸附劑的線性分離范圍，會使斑點重疊、分離不清。 ? （ 2）下行展開法 ? 薄層展開時的注意事項 ? （ 1） 展開容器必須是密閉的，最好是磨砂玻璃蓋。若經(jīng)呼吸道引起的中毒，可取呼吸道分泌物、血液、肺臟及肝臟。若含雜質(zhì)較多，則需進一步凈化，凈化一般用活性炭脫色就可以了。結(jié)果判定方法如下： ? 黃 色 膽堿酯酶活性正常（一） ? 黃綠色 膽堿酯酶活性輕度降低 （ +） ? 淡藍色 膽堿酯酶活性中度降低（ ++） ? 藍 色 膽堿酯酶活性重度降低 （ +++） ? 深藍色 膽堿酯酶活性極度降低 （ ） ? ? （三）薄層層析檢測法 ? [吸附劑 ] 硅膠 G或硅膠 CMC硬板、氧化鋁軟板（用時自制）。 ? [原理 ] 含硫有機磷酸酯類農(nóng)藥（ 105 391樂果等）經(jīng)水解均能生成硫醚（硫醇）化合物，進一步與亞硝基鐵氰化鈉反應，在酸性條件下生成紅色化合物。 ? [說明 ] 醛類化合物對本反應有干擾，也可呈紅色圈，若將氫氧化鈉改用碳酸鈉，并改在試管中進行試驗，可加以區(qū)別。 ? [試劑 ] ? （ 1） 5%溴化汞乙醇溶液。 ? （二）三氯化鐵反應 ? [原理 ] 敵鼠或敵鼠鈉鹽都能與三氯化鐵反應，生成紅色沉淀。 第 七 節(jié) 黃曲霉毒素的檢驗 ? 黃曲霉毒素 （ aflatoxin），也稱作 黃曲毒 素，是一種有強烈生物毒性的化合物，常由黃曲霉及另外幾種霉菌在霉變的谷物中產(chǎn)生，如大米、豆類、花生等，是目前為止最強的 致癌物質(zhì) 。最主要的 4種毒素分別為： B B G G2。 ? 致癌性： ? AFT是目前所知致癌性最強的化學物質(zhì) ?二、免疫學檢驗法 ? 試劑盒簡介 ? 黃曲霉毒素檢驗 試劑盒主要是用來檢測黃曲霉的一種經(jīng)濟、快捷的檢測初篩工具，現(xiàn)在當前市面上主要有黃曲霉毒素 B1試劑盒、黃曲霉毒素 M1試劑盒、黃曲霉毒素總量試劑盒 。 ? [操作 ] ? 取備檢樣少許，置于試管中，加蒸餾水 1— 2ml溶解，加奈氏試劑1ml，如有氟乙酰胺存在，則由淡黃色 → 黃色 → 亮黃色 → 深黃色 ，2min后逐漸渾濁，最后生成 桔紅色沉淀 。 ? 液體檢樣， 可取適量于分液漏斗中，先加稀鹽酸酸化，再用氯仿振搖提取，分出氯仿液，在水浴上濃縮至近干，供定性檢驗。 ? 因為磷化鋅在潮濕的空氣中容易分解，特別在偏酸的胃內(nèi)容物中或腐敗的飼料中更易分解，所以必須及時進行檢驗。 ? [操作 ] ? 取定性濾紙一片，滴加檢樣提取濃縮液 1滴，散開后加10%氫氧化鈉溶液 1滴，稍干，再加 1%間苯二酚乙醇溶液1滴，充分散開后，在電爐上直火加熱（或用電吹風機的熱風吹），如果有敵敵畏或敵百蟲，在斑點周圍出現(xiàn)一 粉紅色圈 。取鄰甲酚 1ml，加水至 100ml，使用時充分振搖 ? [操作 ] 取檢樣提取液 2ml，加 10%氫氧化鈉溶液 ，鋅粉 ，充分振搖，在水浴上加熱至黃色褪去（或冒氣泡）沿管壁緩緩加入鄰甲酚飽和溶液 ，如有含硝基苯的有機磷酸酯類農(nóng)藥存在時，呈現(xiàn) 藍色環(huán) ，振搖后全部變藍，若含量低或還原不完全時，反應結(jié)果僅顯 綠色 。故判定結(jié)果時要結(jié)合臨床癥狀。 ? （ 3）液體檢樣的提取 若檢樣是水或尿液可取適量置于分液漏斗中，加氯仿或苯振搖提取，分出氯仿或苯于蒸發(fā)皿中，再重復提取 1— 2次，合并提取液，在水浴上蒸發(fā)近干，待檢。有些化合物本身不發(fā)熒光，可用硅膠 GF254板分離，在紫外光燈照射下整個板面顯黃綠色熒光，斑點部分呈暗色。 ? （ 1）上行展開法 ? ①近水平上行 展開法。 點樣時應注意以下方面： （ 1）最好用與展開劑同樣的溶劑溶解檢樣，否則點樣后必須待檢樣溶劑揮干后再展開。 ? （ 4）硅膠（氧化鋁）淀粉板 一般淀粉的含量為 5%，把淀粉和吸附劑混勻，加 2倍量的水調(diào)和并在 85℃ 水浴中或直火加熱數(shù)分鐘，當?shù)矸圩兊糜姓承院笤佥o層。為了得到較好的分離效果，應根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)來選擇粘合劑。做一次吸附薄層層析只需要幾分鐘至幾十分鐘；而紙層析需用數(shù)小時至數(shù)十小時；柱層析需時更長，常常是數(shù)十小時乃至數(shù)日。鉛礦污染、農(nóng)藥污染、舔食含鉛油漆染料、汽車尾氣（汽油中加有含鉛防爆劑，公路兩旁青草含鉛量 500mg/kg,動物采食可中毒） ?二 、 鉛的檢驗 ? （一） 、檢樣的采集與處理 ? 急性中毒的病畜以血液、尿液、嘔吐物、糞、剩余飼料為檢材。銅片表面變成銀白色，可能含有汞化合物，再做汞的確證試驗。慢性中毒則以腎最好，其次為肝、毛（羽）和腦。 ? 有機汞吸收率比無機汞高得多，因而毒性作用也特別大，半衰期長，常引起慢性中毒。各種家畜都能發(fā)生中毒，但以牛、羊?qū)顬槊舾小? ? ⑶ 也可用蒸餾液進行此反應，其方法是取堿性接收液2ml于試管中，加 10%硫酸亞鐵溶液 23滴，微熱，加10%鹽酸酸化，如有氰化物存在，即產(chǎn)生藍色或藍綠色，含量高時，可產(chǎn)生藍色沉淀。 儀器： YNCLVI型智能化農(nóng)藥殘留快速檢測儀 (農(nóng)藥殘毒、重金屬、亞硝酸鹽、甲醛四合一綜合測速儀 ) 第三節(jié) 揮發(fā)性毒物的檢驗 ?一、揮發(fā)性毒物的分離提取 方法 ? 水蒸餾法 ? 揮發(fā)性毒物多具有較高的蒸汽壓，當遇酸性溶液同時加熱時，可在較原沸點為低溫度下隨水蒸氣蒸餾出來，根據(jù)這一特性達到分離目的。主要發(fā)生 豬 ，牛、羊、馬也有發(fā)生。對檢驗單上未詳述的內(nèi)容，特別是發(fā)病前后的情況，如臨床癥狀、尸體剖檢變化、現(xiàn)場調(diào)查的初步印象、治療效果及要求檢驗的項目等要與送檢人員座談并把詳細情況記錄下來。對某些化 學 結(jié)構(gòu)相似的有毒物質(zhì)，要設法使之分離。如觀察檢材是否有刺激性或腐蝕性毒物存在，可涂于動物的皮膚或粘膜上，以觀察結(jié)果。 預試驗 ?又稱： 確證試驗 。送檢時應同時送酒精樣品（ 501250ml）以供對照檢驗、檢材中不得加入福爾馬林，因其本身也是毒物，并且對某些毒物（如生物堿、苯酚、氰化物）的檢驗有妨礙。 ? ： ? 是運用生物化學和物理學原理和方法，對可疑的飼料和進入畜禽體內(nèi)的毒物進行分離鑒定，以查清毒物及中毒原因，作為中毒病的診斷、急救及預防的科學依據(jù) 。 ? 3