【正文】 ? [檢測(cè)范圍 ]糧食 ：花生、小麥、玉米、高粱等； 飼料 ：以小麥麩皮、 玉米面 等糧食原料生產(chǎn)的飼料； ? [技術(shù)指標(biāo) ]檢測(cè)下限： ； ? [檢測(cè)步驟 ] ? 糧食樣品處理： 稱取 1g樣品（大米、玉米、小麥、花生及其制品經(jīng)過(guò)磨細(xì)其粒度小于 2mm）于 10ml離心管中，加入 4ml乙酸乙酯，震蕩 5分鐘，靜置 3分鐘， 在 4000r、 1min離心機(jī)上離心 ，收集 樣液于 1個(gè) 平皿，吹干 ， 加入 緩沖 液 2ml反復(fù)沖洗，待檢 。 ? 慢性中毒 ： ? 長(zhǎng)期攝入小劑量的黃曲霉毒素則造成慢性中毒。食米儲(chǔ)存不當(dāng)，極容易發(fā)霉變黃，產(chǎn)生黃曲毒素。 ? 液體檢樣： 取 30— 50ml待檢液體于分液漏斗中，加氯仿 30ml振搖提取 3次，合并提取液（若含有水分，應(yīng)加無(wú)水硫酸鈉適量），置水浴上揮發(fā)近干，備檢。加氯仿 ，蒸餾水 ，充分振搖，氯仿層呈明顯紅色。也可采取可疑飼料作為檢樣。取碘化汞 2g，碘化鎘 1g共溶于蒸餾水 100ml中 ? （ 4）醋酸鉛棉花。實(shí)驗(yàn)室檢查可進(jìn)一步提供證據(jù)。有關(guān)含量測(cè)定，除用常規(guī)的化學(xué)方法測(cè)定外，目前較先進(jìn)的測(cè)定方法是薄層掃描法和氣相色譜法。 ? [原理 ] 敵敵畏和敵百蟲(chóng)經(jīng)堿水解產(chǎn)生的醛類化合物與間苯二酚作用，生成粉紅色化合物。 ? （ 3） 10%亞硝基鐵氰化鈉溶液（用時(shí)現(xiàn)配）。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%氫氧化鈉溶液。 ? [展開(kāi) ] ? 將檢樣提取液用直接點(diǎn)樣法點(diǎn)于薄層板的起始線上，硬板可采用上行展開(kāi)法展開(kāi)，軟板可采用近水平上行展開(kāi)法展開(kāi)。 ? （ 3） 當(dāng)酶活性在 60%以下時(shí)，應(yīng)復(fù)試一遍，以免誤判?？扇′鬻晗悴莘铀{(lán) ，溴代乙酰膽堿 ，加無(wú)水乙醇 20ml溶解，用 — （溶液應(yīng)呈灰褐色），將質(zhì)量好的定性濾紙浸入， 2min后取出陰干，剪成 1cm2的小片，貯于磨口棕色瓶中，于干燥處避光保存。 ? （ 1）固體檢樣的提取 取被檢樣 50g于具塞三角瓶中。但不同的有機(jī)磷農(nóng)藥的極性強(qiáng)弱不同，敵百蟲(chóng)、敵敵畏、樂(lè)果等屬于極性強(qiáng)的有機(jī)磷； 391 1240等屬于弱極性有機(jī)磷；而 160 1059等屬于中等極性有機(jī)磷。常用的試劑有固體碘、液體溴、濃氨水等。 ? （ 3） 由于展開(kāi)劑易揮發(fā)，混合展開(kāi)劑的比例易發(fā)生改變，所以展開(kāi)劑不宜反復(fù)使用和保存，特別是含有低沸點(diǎn)組分的展開(kāi)劑，只能展開(kāi)一次。 ? 展開(kāi)方式及展開(kāi)法 展開(kāi)需在密閉的容器“展開(kāi)槽”中進(jìn)行。 （三） 展開(kāi) 展開(kāi)就是把點(diǎn)好樣板的點(diǎn)樣端浸于展開(kāi)劑中（切勿使樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中），使展開(kāi)劑沿薄層板移動(dòng)，同時(shí)帶動(dòng)檢樣中的組分移動(dòng)，而達(dá)到分離目的。若進(jìn)行含量測(cè)定，要用微量注射器或血色素吸管（預(yù)先將管口磨平）準(zhǔn)確吸取檢樣，仔細(xì)地滴加在確定好的點(diǎn)樣處。干板展開(kāi)后必須立即顯色，否則展開(kāi)劑揮發(fā)后易將板面吹散。 1%CMC的配法是取 CMC1g置乳缽中，加少量蒸餾水研磨成均勻的糊狀，再補(bǔ)充水至100ml研勻。玻璃表面應(yīng)光潔平整。 ? 粘合劑 為使吸附劑與支持物貼附得牢固，不易脫落。 ? 應(yīng)用面廣。 第五節(jié) 農(nóng)藥的檢驗(yàn) 一、 掌握薄層層析的 原理和操作方法 二、 學(xué)會(huì)有機(jī)磷農(nóng)藥的 化學(xué)檢驗(yàn)方法 ?一、吸附薄層層析 ? 吸附薄層層析（以下簡(jiǎn)稱薄層層析）是 50年代以后在吸附柱層析和紙層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種色層分析方法，與柱層析和紙層析相比較，薄層層析具有以下優(yōu)點(diǎn)。 ?三 、 食鹽的檢驗(yàn) ? 動(dòng)物因食入過(guò)量的食鹽，同時(shí)飲水受到限制時(shí)所引起的一種以胃腸炎、腦水腫及神經(jīng)癥狀為主要特征的疾病。鉛為蓄積毒物，小劑量持續(xù)地進(jìn)入體內(nèi)能逐漸積累而呈現(xiàn)毒性作用。 ? （ 4）含油脂的樣品能使銅片表面形成油膜，汞難于附著在銅片上，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行有機(jī)質(zhì)破壞后再做試驗(yàn)。再加氯化亞錫酸溶液 1ml，在燒懷上標(biāo)明液面的高度。取 15ml硝酸（ ）加蒸餾水至 100ml。 ? （ 2） 5%二巰基丙磺酸鈉注射液 350500mg，一次皮下或肌肉注射，按 1kg體重 710mg用藥。 ? 臨床特征 ： 急性汞中毒以胃腸炎、氣管炎、支氣管炎、卻氣管肺炎、皮膚炎為特征，慢性汞中毒的典型病變?yōu)榭谇谎?、齒齦炎和神經(jīng)系統(tǒng)的中毒變化。幼畜進(jìn)行性消瘦，厭食，生長(zhǎng)阻滯，動(dòng)作不協(xié)調(diào)，無(wú)目的行走，失明，空嚼，呆滯，衰竭，昏睡狀態(tài)下死亡。（ 2）不溶于水，可通過(guò)表面的水封層蒸發(fā)到空氣中。 ? 這里著重講述 汞、砷、鉛 三種金屬的毒性， 錫、鉈、鎘等可自習(xí)。 ? [操作 ] 取檢樣 5:10g置于三角瓶中，加蒸餾水使呈粥狀，加 10%酒石酸酸化，立即在瓶口上懸一條事先準(zhǔn)備好的堿性苦味酸試紙條，蓋好膠塞，在小火上緩緩加熱，如有氰化物存在則試紙條變?yōu)?玫瑰紅色 。 ? [操作 ] . ? 取檢樣 510g置于三角燒瓶中，加蒸餾水，使成粥狀，加 10%酒石酸酸化，立即在瓶口上蓋一張濾紙，并迅速向?yàn)V紙的中央加 10%硫酸亞鐵 12滴，稍干，再加 10%氫氧化鈉 12滴，然后緩緩加熱，當(dāng)微沸有蒸氣產(chǎn)生時(shí)，把濾紙取下（瓶口再蓋一張濾紙，重復(fù)操作），向?yàn)V紙上滴加 10%鹽酸或?qū)V紙浸于 10%鹽酸溶液中，如有氰化物，濾紙立即顯 藍(lán)色 ，若含量低，可顯 藍(lán)綠色。 ? 富含氰甙的植物 ： ? 高粱屬植物 ? 亞麻，主要是亞麻葉、亞麻籽及亞麻籽餅； ? 木薯 ? 苦杏仁、銀杏、枇杷仁 ? 各種豆類 ? 牧草 ? 誤食或吸入氰化物農(nóng)藥 病因 ? （一）檢材 ? 供檢驗(yàn)氫氰酸和氰化物最適宜的檢材是中毒動(dòng)物吃剩的飼料，病畜的嘔吐物，其次是肺、腦、肝和血液。過(guò)濾，濾液盛于棕色瓶中備用。 ?（二）定性檢驗(yàn) ? 高鐵血紅蛋白的鑒定 ? （ 1） .取血液少許與小試管內(nèi) ,用力振搖 ,血液不變色 ,可認(rèn)為是高鐵血紅蛋白 .通常血液會(huì)與空氣中的氧結(jié)合呈鮮紅色。如要透析完全，則需時(shí)間長(zhǎng)些（最好在冰箱內(nèi)進(jìn)行，防止檢材腐?。⒏鼡Q膜外的蒸餾水?dāng)?shù)次，然后合并透析液，在水浴濃縮后供檢驗(yàn)用。 ? 檢驗(yàn)結(jié)果與臨床記錄完全相反。特別適用于高沸點(diǎn)、不能氣化或熱穩(wěn)定性差的有機(jī)物分離分析，在生物化學(xué)與分子生物學(xué)中的應(yīng)用日益廣泛。 ? 5） 、提取過(guò)程中往往有毒氣體或有機(jī)溶劑的蒸汽揮散，工作人員要注意防護(hù)。如有機(jī)磷農(nóng)藥易溶于有機(jī)溶劑，因而可以用有機(jī)溶劑浸泡或振搖提取。配試劑時(shí)，濃度要精確。 動(dòng)物試驗(yàn) ? 把可疑檢材 接種 給于動(dòng)物，觀察 其臨床癥狀和剖檢變化，可推出毒物的種類。陰性和陽(yáng)性樣品要同檢材做同樣的處理。如砷等金屬物質(zhì)，灼燒后在管壁上可見(jiàn)到升華物，置于顯微鏡下可見(jiàn)到不同形狀的結(jié)晶。 ? 急性中毒的動(dòng)物應(yīng)以取胃腸內(nèi)容物及肝臟、血液為主， ? 慢性中毒死亡者以取臟器及排泄物為主。檢材的種類、數(shù)量、包裝情況，取材日期，送檢目的和要求等。即是否中毒，是什么毒物引起的中毒 ,為中毒的診斷、急救和預(yù)防提供科學(xué)的依據(jù)。如果查不清毒物，單憑病史、癥狀、病理變化等是很難對(duì)中毒病進(jìn)行確診的。送檢單的內(nèi)容要填入“毒物檢驗(yàn)記錄”中。 ? 在未知毒物中毒時(shí)，取材應(yīng)盡可能全面，且數(shù)量要充足，以免事后無(wú)法彌補(bǔ)。如金屬砷汞等； ? 簡(jiǎn)單的化學(xué)方法 ， 如植物有毒成分的 分析 。 定性檢驗(yàn) ?又稱： 定量分析 。 ? 實(shí)驗(yàn)所用的動(dòng)物有青蛙、小白鼠、家兔等。 ? （ 3）要求現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑，一定要在使用前新配。但有機(jī)磷遇熱易揮發(fā)，在提出后揮散有機(jī)溶劑時(shí)，溫度不可過(guò)高。 ?三 、 層析法原理及其在毒物檢驗(yàn)中的應(yīng)用 層析技術(shù) 是利用混合物中各組分的 物理化學(xué)性質(zhì)(分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、 分子親和力、分配系數(shù)等 )的不同，使各組分以不同程度分布在 固定相和流動(dòng)相 中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)， 各組分以不同的速度移動(dòng) ，而達(dá)到分離的技術(shù)。 ? 高效液相層析法有哪些？ ? 1） .吸附層析 ? 2） .分配層析 ? 3） .離子交換層析 ? 4） .凝膠滲透層析 ? HPLC的特點(diǎn) ? 具有高壓、高速、高效、高靈敏度等特點(diǎn)，因此廣泛應(yīng)用于氨基酸、蛋白質(zhì)、甾族化合物、糖類、有機(jī)酸、生物堿、藥物、農(nóng)藥、抗菌素、維生素、高聚物以及各種無(wú)機(jī)鹽類的分離與分析。 ? 檢驗(yàn)結(jié)果陰性，但臨癥和尸變與該種毒物引起的中毒表現(xiàn)一致，要考慮送檢的檢材采集的部位是否合適。 亞硝酸鹽中毒 是由于采食 富含 亞硝酸鹽或硝酸鹽 的飼料，引起 高鐵（ Fe3+ ）血紅蛋白 血癥 ，導(dǎo)致組織缺氧的一種急性、亞急性中毒。 ? （ 2） .取血液少許與小試管內(nèi) ,滴入數(shù)滴 1%KCN溶液 ,若有高鐵血紅蛋白 ,血液立即由棕褐色變?yōu)轷r紅色。 ? [操作 ] 取檢液 1— 2滴，置白瓷反應(yīng)板上，加 1— 2滴聯(lián)苯胺冰醋酸溶液，如有亞硝酸鹽存在，即出現(xiàn) 紅棕色 。本實(shí)驗(yàn)采取 水蒸氣蒸餾法提取 口粘膜、食道和胃及胃內(nèi)容物。 ? [說(shuō)明 ] ? ⑴ 本方法不需水蒸餾，可用檢樣直接檢驗(yàn)，所以具有操作簡(jiǎn)便，快速等優(yōu)點(diǎn)。 ? 堿性苦味酸試紙制法 : 可取定性濾紙一條在 10%苦味酸溶液中浸濕，并用濾紙吸去多余溶液，再滴加飽和碳酸鈉溶液，陰干即可應(yīng)用。 ?一 、汞化合物的檢驗(yàn) (砷化物的檢驗(yàn) ) ?汞含 金屬汞、無(wú)機(jī)汞和有機(jī)汞 三種形式，其中有機(jī)汞的毒性較大。（ 3）粘度小而流動(dòng)性大，很易碎成小汞珠，無(wú)孔不入地留存于工作臺(tái)、地面等 處（ 4）地面、工作臺(tái)、墻壁十天花板等的表面都吸附汞蒸氣，有時(shí)，汞作業(yè)車間移作它用，仍殘留有汞危害的問(wèn)題 。有些動(dòng)物皮膚發(fā)癢，啃咬皮膚、擦癢等。 ? 含量監(jiān)測(cè) ： 病死動(dòng)物內(nèi)臟、肝、腎、毛、糞中汞測(cè)定，有助于診斷，當(dāng)腎汞達(dá)到 1015mg/kg即可認(rèn)為是汞中毒。 ? （ 3）注射用硫代硫酸鈉 13g加注射用水 1020ml，溶解后，一次靜脈注射，每天 23次。 ? （ 2）銅片 5 10mm或用玻璃棒將 20號(hào)銅絲繞成十圈螺旋狀。先在水浴上加熱 10min，以除去硫化物的干擾。 ? （ 5）如含汞量低時(shí)，可用鹽酸肼代替鹽酸進(jìn)行試驗(yàn)，其方法是取鹽酸肼 ，加入銅片（或銅絲）及檢液適量，加熱至微沸 5min再觀察結(jié)果。各種毒物均可發(fā)生，反芻動(dòng)物最敏感，主要發(fā)生于牛、羊、家禽。 （一） 中毒癥狀 分急性食鹽中毒和慢性食鹽中毒兩種 豬 臨床癥狀為食欲減少，口渴，流涎，頭碰撞物體，步態(tài)不穩(wěn)，轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)。 ? 設(shè)備簡(jiǎn)單、容易操作?？梢赃M(jìn)行定性鑒定，也可以進(jìn)行含量測(cè)定。若在吸附劑中加入一定量的粘性物質(zhì)即粘合劑，便可制成較牢固的薄層板。鋪層前應(yīng)用洗液浸洗，再用自來(lái)水、蒸餾水洗凈烘干，防止有油污和水漬?；蛘呷?CMC1g于燒杯中，加蒸餾水 100ml，在液面外和燒杯上劃一標(biāo)記，然后直火加熱至完全溶解，并補(bǔ)足消耗的水分。由于干板吸附劑顆粒較粗（太細(xì)推不成薄層），展開(kāi)后斑點(diǎn)不太集中，所以分離效果稍差。如果點(diǎn)樣量較大或?yàn)榱藵饪s的目的需要反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，每次點(diǎn)樣的量不可過(guò)大，樣點(diǎn)直徑必須控制在 3mm以內(nèi)，重復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，必須待前次點(diǎn)樣的樣點(diǎn)干后再點(diǎn)，以免樣點(diǎn)直徑擴(kuò)大。 展開(kāi)劑的選擇 常用的展開(kāi)劑是某種有機(jī)溶劑或混合有機(jī)溶劑。展開(kāi)槽可分為立式和臥式兩種。 ? （四）顯色 ? 有些物質(zhì)展開(kāi)后即能顯示不同顏色的斑點(diǎn)如染料；而大多數(shù)物質(zhì)展開(kāi)后看不到斑點(diǎn)位置，必須經(jīng)顯色才能確定斑點(diǎn)的位置。顯色后的薄層板應(yīng)立即觀察，否則置于空氣中過(guò)久，斑點(diǎn)上的顏色會(huì)因揮發(fā)而褪去。提取時(shí)原則上極性強(qiáng)的有機(jī)磷，用強(qiáng)極性的有機(jī)溶劑提取。加氯仿或苯（ 403020ml）浸泡，并不斷振搖， 1h后過(guò)濾，收濾液于蒸發(fā)皿中，殘?jiān)寐确禄虮较磧纱?，合并洗液于蒸發(fā)皿中，在 60℃ 以下水浴上蒸發(fā)近干，供檢。 ? [操作 ] ? 取乙酰膽堿試紙兩片置于載玻片兩端，分別加被檢病畜血和健康同種動(dòng)物血（或健康馬血） 1滴，標(biāo)記后，立即加蓋另一載玻片，用橡皮筋扎緊，置 37℃ 濕箱中或腋下保溫 20min后取出，觀察紙片顏色變化。 ? （ 4） 如無(wú)溴化乙酰膽堿，可用氯化乙酰膽堿代替，效果一樣。 ? [顯色 ] 展開(kāi)后的硬板取出放于通風(fēng)櫥中，待溶劑揮干后顯色。 ? （ 2）鋅粉。 ? [操作 ] 取苯或氯仿提取濃縮液 2ml,自然揮干，加蒸餾水 2ml溶解，移入小試管中，加 10%亞硝基鐵氰化鈉溶液 12滴， 10%氫氧化鈉溶液 5滴，置 2535℃ 水浴中加熱1— 2min，取出放冷，沿管壁