【正文】 液的濃度和 吸收層厚度的乘積成正比。 標準曲線的繪制 ? 配制一系列不同濃度的標準溶液，在一定條件下顯色，使用同樣厚度的吸收池，測定吸光度，然后以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖，得一條直線，在同樣條件下測出試樣溶液的吸光度，就可以從工作曲線上查出試樣溶液的濃度。 ? 但在實際工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)標準曲線不成直線的情況，特別是當吸光物質(zhì)的濃度高時，明顯的向上或向下偏離標準曲線，這種情況稱為偏離朗伯 比耳定律現(xiàn)象 引起偏離朗伯 比爾定律的原因 （ 1） 入射光為非單色光。 嚴格講朗伯 比耳定律只適用于單色光。應(yīng)選用 ?max處或肩峰處測定 . （ 2）溶液中的化學(xué)反應(yīng)。 離解、絡(luò)合、締合會破壞線性關(guān)系 , 應(yīng)控制條件 (酸度、濃度、介質(zhì)等 ). （ 3）比耳定律的局限性引起偏離。 嚴格說，比耳定律是一個有限定律，它只適用于濃度小于 。 定量分析 —— 溶液濃度的測定 工作曲線法 (標準曲線 ) y=a+bx 式中： x為標準溶液的濃度， y 為相應(yīng)的吸光度 0 c(mg/mL) A * Ax cx 一般來說：透光度在 20%～ 65%或吸光度值在 ～ ， 測定誤差相對較小。 對比法 (直接比較法 ) 對比法實際相當于工作曲線法的一個特例。 y=bx 實際就是只配制一個標準溶液，其中待測組分的濃度與試液盡量相近，選用最大吸收波長，在相同條件下依次測定二者的吸光度，按下式直接計算試液中待測組分的濃度。 c樣 =（ A樣 /A標） c標 需注意 ：標準樣品和待測樣品 濃度應(yīng)接近 ，且標準樣品的 吸光度在 。在只測一、二個樣品，且含量 大致已知時很方便。 分光光度計 ? 基本部件： 光源 單色器 檢測器 吸收池 顯示裝置 鎢燈 (320～ 2500nm)： 可見光區(qū) 氫燈、氘燈 (180～ 375nm)： 紫外區(qū) 氙燈（ 180～ 1000nm）： 紫外、可見光區(qū) ?/nm 鎢燈（ 熱輻射光源 ） 400 600 800 1000 氙燈（ 氣體放電光源 ） 氫燈、 氘燈 強度 光源： 發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜。 氙燈 氫燈 鎢燈 吸收池 （ 比色皿 、 比色杯 、 比色池 ） ： 用于盛待測及參比溶液 。 玻璃吸收池 （ 370～ 3200nm） ： 可見光區(qū) 石英吸收池 （ 185～ 4000nm） ： 紫外光區(qū) 、 可見光區(qū) ? 選用比色皿應(yīng)該考慮的主要因素 ⑴ 測定波長。 比色液吸收波長在 370nm以上時可選用玻璃或石英，在 370nm以下時必須使用石英比色皿。 ? ⑵ 光程。 比色皿有不同光程長度，通常多用 mm 的比色皿，選擇比色皿的光程長度應(yīng)視所測溶液的吸光度而定，以使其吸光度在 ～ 。 吸收池的清洗 ? 分光光度測定樣品時，比色皿表面不清潔是造成測量誤差的常見原因之一，每當測定有色溶液后，一定要充分洗滌。根據(jù)污染情況，可以用冷的或溫熱的（ 4050℃ ）陰離子表面活性劑的碳酸鈉溶液（ %2）浸泡，可加熱 10min左右。也可用（ 1+3）硝酸溶液浸泡，注意浸泡時間不宜過長，以防比色皿脫膠損壞。對于有色物質(zhì)的污染可用HCl(3mol/L)乙醇（ 1+1）溶液洗滌，如急用，可用乙醇、乙醚潤洗后用吹風機吹干。 ? 光度測定前可用柔軟的棉織物或擦鏡紙吸去光學(xué)窗面的液珠，將擦鏡紙折疊為四層輕輕擦拭至透明。 分光光度計實驗室具備條件 （ 1）儀器室 ? 室溫 宜保持在 15～ 28℃ 。 ? 相對濕度 宜控制在 45%～ 65%，不要超過 70%。 ? 防塵、防震和防電磁干擾 。儀器周圍不應(yīng)有強電磁場，應(yīng)遠離電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。 ? 防腐蝕 。應(yīng)防止腐蝕性氣體，如 SO NO2及酸霧等侵蝕儀器部件。應(yīng)與化學(xué)操作室隔開。當測量具有揮發(fā)性或腐蝕性樣品溶液時，吸收池應(yīng)加蓋。 ? 防日光照射 。 （ 2）電源、光源 ? 儀器的工作電源要求一般為 220V177。 20V。如供電電壓波動較大，最好配置穩(wěn)壓器。 721型分光光度計的操作步驟及注意事項 ? 操作步驟： 接通電源 → 選擇波長 → 粗調(diào)透光度T“O”( 開蓋 )和透光度 T“100%” ( 關(guān)蓋 )→ 預(yù)溫 20min→ 放入被測液 → 精確調(diào)節(jié)透光度T“O”( 開蓋 )和透光度 T“100%” ( 關(guān)蓋 )→ 測定，讀取各管吸光度 → 收場（關(guān)電源、罩儀器罩、登記、清洗比色杯等） ? 注意事項： 比色時，手拿比色杯的毛面，液體倒杯高的 2/3或 4/5，比色杯不能用硬毛刷刷洗，也不能用高溫烘烤。 ? 注意事項 ：⑴每臺儀器所配置的比色池不能與其他儀器上的比色池單個調(diào)換。⑵如果大幅度改變測試波長時，需等數(shù)分鐘才能正常工作。⑶不測量時不要開光源燈。 ? 儀器維護 ： ⑴ 儀器使用完畢后 ， 用隨機提供的套子罩住 ，在套子內(nèi)應(yīng)放數(shù)袋硅膠 ， 以免燈室受潮 。 ⑵ 經(jīng)常注意防潮硅膠是否變色 ， 如發(fā)現(xiàn)硅膠顏色變紅 ， 應(yīng)將其取出調(diào)換或烘干至藍色 ， 待冷卻后再置入 。 ⑶ 拿取吸收池時 ， 絕不可觸及光學(xué)窗面 ！ 使用完畢后 ， 應(yīng)立即清洗 ， 洗滌時只能涮洗 、 沖洗 、 浸泡 ， 絕不能刷洗 ！ 洗凈的吸收池易先倒置于干凈的吸水紙 （ 如濾紙 ） 上 ， 待吸干 、 控凈殘留水后 ， 再放回比色池的盒子內(nèi) 。 如吸收池光學(xué)窗面上沾附有水珠 ，只允許用鏡頭紙輕輕擦干 ⑷ 儀器工作數(shù)月后 ， 要校正一下波長 ， 用鐠釹濾光片校正 ⑸ 調(diào)換光源燈時 ， 帶上手套 ， 以防玷污燈的玻璃殼 。 分光光度計操作注意事項及維護 721型分光光度計波長的檢測與校正（鐠汝濾光片法） 在比色槽的光路上放一張小白紙，調(diào)節(jié)波長至 580nm。 旋動光量 T100%的旋鈕至最大，在小白紙上應(yīng)看到桔黃色的光斑 若光斑不是橘黃色，左右旋轉(zhuǎn)波長調(diào)節(jié)旋鈕使之出現(xiàn)橘黃色的光斑， 粗略判斷波長偏離的程度，選擇檢測的起始波長。 調(diào)節(jié)波長至 520nm，用蒸餾水或空氣調(diào) T“0” 和 T“100%” 。 將鐠汝濾光片推入光路中，記錄 T或 A值，退出鐠汝濾光片。 調(diào)節(jié)波長至 522nm，用蒸餾水或空氣調(diào) T“0” 和 T“100%” 。 再將鐠汝濾光片推入光路中，記錄 T或 A值，退出鐠汝濾光片。 如此反復(fù)測定直至 T值為最小或 A值為最大，記錄此點的指示波長。 將指示波長減去鐠汝濾光片吸收波長 (529nm)，即得被校儀器的波 長誤差。 如波長精度超出允許誤差 60600nm≤ 177。 3nm。600700≤ 177。 5nm。700 800≤ 177。8nm），打開分光光度計左側(cè)調(diào)節(jié)窗口蓋板，用螺絲刀試調(diào)波 長的調(diào)節(jié)桿。 1試調(diào)波長的調(diào)節(jié)桿后，再按步驟 38操作，直至分光光度計的波長精 度誤差在其允許范圍內(nèi)即可。 個人心得： 認真、負責態(tài)度 +掌握并正確應(yīng)用 方法原理 +規(guī)范操作 = 準確的分析結(jié)果 謝謝！