【正文】 致病和誘導(dǎo)機(jī)體宿主的免疫應(yīng)答作用密切相關(guān) ， 所以人歷來把研究的重點(diǎn)放在蛋白 E上 ， 現(xiàn)已深入到高級(jí)結(jié)構(gòu) ， 這將為基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用以及亞單位或基因工程疫苗提供了分子水平的依據(jù) 。 ? 研究結(jié)果表明： E蛋白上 E138和 E176位點(diǎn)上氨基酸乙腦的減毒過程中起了重要作用 ， 其中 E138的突變引起 E蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化 ， 這兩個(gè)位點(diǎn)氨基酸突變可能改變了 E蛋白對(duì)細(xì)胞受體的吸附性 ， 或者引起該病毒對(duì)其他細(xì)胞不可穿透 ， 這兩種機(jī)理導(dǎo)致病毒毒力減弱 ， E蛋白 138位點(diǎn)或 138和 176位點(diǎn)一起對(duì)乙腦病毒強(qiáng)毒株在連續(xù)傳代過程中減弱起了關(guān)鍵作用 。 ? ， 高株和中山株不能被 518McAb所中和 ， A2株介于兩者之間；用寡核酸指紋圖譜也表明 ， 高株比 A2多兩個(gè)斑點(diǎn) ， 但大多數(shù)是一樣 陳伯權(quán)等用多克隆抗體進(jìn)行分析時(shí) ， 我國分離到的乙腦病毒 SA1 P A2和高株無明顯差別 ，與日本分離到的中山株有些差別 ， 用單克隆抗體進(jìn)行分析 ， SA14和 P3抗原相似 。 ? NS1蛋白： 由大約 350個(gè)氨基酸組成 ， 是一種分泌型糖蛋白 , 含高甘露糖寡糖基團(tuán) ， 致使 NS1蛋白的分子量從 40Ku上升到 46Ku。 但由于在 130位和 207位存在 N連接糖鏈 , 在感染細(xì)胞內(nèi)其實(shí)際分子量為 46ku左右 。 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞的感染過程中 NS1蛋白是以膜結(jié)合的微粒子形式從感染細(xì)胞釋放的 ， 同時(shí)還以可溶性蛋白的形式存在 ， 在感染的細(xì)胞表面也存在 NS1蛋白 。 ? Mason等 （ 1987） 由大腸桿菌來表達(dá)JEV抗原 ， 證實(shí)在 JEV感染的細(xì)胞中 NS1蛋白以 NS1和 NS1180。兩種形式存在 ， NS1180。和 NS1在 N 末端具有相同的序列 ， 該段序列由基因組的 NS2A基因編碼 ， 使 NS1蛋白存在于細(xì)胞表面成為可能 。 NS1分子量為 40kD， NS1180。分子量為 58ku。 由于 NS1180。和 NS1存在相同的 N末端 ， 故有相同的抗原性和生化特性； NS1180。是主要的病毒產(chǎn)物 ， 而不是在 NS1產(chǎn)生過程中短暫存在的 。在細(xì)胞培養(yǎng)液中 NS1的量大 ， 可能是因?yàn)镹S1比 NS1180。更有效地分泌到細(xì)胞外或NS1180。在釋放過程中被降解為 NS1。 NS1蛋白特異性免疫探針與 JEV感染細(xì)胞結(jié)合結(jié)果 ， 說明分泌于感染細(xì)胞表面 。 另外 ， 感染細(xì)胞還分泌可溶性的 NS1。 ? Mason等 ](1987） 在 TritionX100存在的情況下通過超速離心發(fā)現(xiàn) NS1蛋白的沉降特征的改變 ， 說明 NS1蛋白與膜相互作用結(jié)合在一起 。 NS1是一種與膜功能相關(guān)的糖蛋白 , 其具體功能還不清 ,但認(rèn)為參與病毒復(fù)制的早期階段 .NS1還可能參與病毒組裝和釋放 , 是主要的抗原成分之一 , 由于 NS1蛋白不組成毒粒 , 所以沒有中和活性和血凝活性 ， 但它具有可溶性補(bǔ)體結(jié)合活性 ， 它在感染細(xì)胞表面 ， 成為殺傷感染的靶子 ， 因此它可在不出現(xiàn)中和抗體的情況下誘生保護(hù)力 ， 即誘生非中和性保護(hù)力 ，且不產(chǎn)生抗體依賴性增強(qiáng) ， 加之 NSI的基因和表型具有高度同源性 ， 因此它可作為具有廣泛作用的亞單位疫苗研制的絕好材料 。 ? 在 JEV感染的單層細(xì)胞和細(xì)胞液中存在包含 NS1和 NS1180。的二聚體，該二聚體耐 SDS，但對(duì)熱極敏感。 Flamand等（ 1992）用重組桿狀病毒表達(dá) NS1，發(fā)現(xiàn)當(dāng) NS1組合形成二聚體時(shí)可與膜相互作用，細(xì)胞外的 NS1二聚體自由存在或與膜相互作用形成復(fù)合物。 Winker等證明 NS1以二聚體形式出現(xiàn)是黃病毒感染的一個(gè)特點(diǎn)。在感染細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體內(nèi)， NS1和 E共同滯留一段時(shí)間，這就為 NS1在毒粒形成中起一定作用提供了證據(jù)。 ? NS2蛋白： JEV非結(jié)構(gòu)蛋白 NS2由其基因組 NS2區(qū)編碼， NS2蛋白還可被進(jìn)一步加工成兩個(gè)成熟的非結(jié)構(gòu)蛋白 NS2a和 NS2b， NS2a分子量約為 17ku, NS2b約為 13ku, 均為疏水性蛋白 , 在所有黃病毒中其同源性最低，目前有關(guān) NS2蛋白的功能了解得還不很清楚， NS2蛋白可能與膜功能有關(guān)。 ? NS3 蛋白： 分子量為 64ku, 非結(jié)構(gòu)蛋白 NS3是黃病毒科病毒非結(jié)構(gòu)蛋白中研究的比較多，對(duì)其功能也是了解得比較清楚的一種非結(jié)構(gòu)蛋白，其 C末端和 N末端的氨基酸組成已研究清楚 , 具有親水性基團(tuán) , 它不僅在病毒 RNA復(fù)制和多聚蛋白加工過程中具有重要的作用，而且在病毒與宿主細(xì)胞的相互作用中似乎也扮演了一個(gè)十分重要的角色。 ? 人們通過體外表達(dá) NS3蛋白 ， 建立體外非細(xì)胞反式切割分析體系 ， 證實(shí)了 NS3蛋白是一個(gè)具有三種酶活性的多功能蛋白：具有絲氨酸蛋白酶活性 (serine protease)、核 苷 三 磷 酸 酶 活 性 (nucleoside triphosphatase， NTPase)、 RNA解旋酶活性 (RNA helicase)， NS3蛋白的絲氨酸蛋白酶及其核苷三磷酸酶／解旋酶活性分別位于其 N端的 1／ 3區(qū)和 C端的 2／ 3區(qū) ， 在NS3蛋白多肽上處于兩個(gè)相對(duì)獨(dú)立的功能區(qū) ， 其絲氨酸蛋白酶的關(guān)鍵催化殘基 Ser的突變可致蛋白酶活性喪失 ， 但仍具有ATPase活性 ， 前者主要負(fù)責(zé)病毒多聚蛋白的翻譯后加工 ， 產(chǎn)生成熟的病毒蛋白 ，這是病毒自我復(fù)制和組裝的前提條件 。 ? TPase／ helicase則主要參與病毒 RNA的復(fù)制過程 ， 分子量為 70ku， 在病毒繁殖和復(fù)制過程中扮演重要的角色 ， 非常保守 ，具有三種酶的活性 ， 其氨基端結(jié)構(gòu)域具有絲氨酸蛋白酶超家族成員的結(jié)構(gòu) ， 能夠在連續(xù)兩個(gè)非氨基酸殘基和與之相鄰的帶有短的側(cè)鏈的氨基酸殘基間切割蛋白 。 ? Takegami等認(rèn)為 NS3蛋白是一個(gè)具有激酶和解旋酶特性的多功能蛋白 , 用在 .上表達(dá)的 NS3融和蛋白免疫得到的抗血清進(jìn)行的 Westernblot分析表明： NS3蛋白主要存于 JEV感染的細(xì)胞膜上 。 ? wang等 (等 (1998)研究發(fā)現(xiàn) NS3主要存在于感染鼠大腦錐體神經(jīng)元和小腦分子顆粒層 (Molecular and granular layers)。交叉免疫試驗(yàn)表明 NS3是最主要的交叉反應(yīng)蛋白 。 在體外加入 NS3抗血清可降低 JEV RNA的合成 ， NS3蛋白還具有與RNA結(jié)合及 ATP活性 。 Jan等 (1995)和Chen等 (1997)研究了 JEV 339。NCR與 NS3蛋白和 NS5蛋白的相互作用 ， 發(fā)現(xiàn) NS3和 NS5在體內(nèi)相互作用形成蛋白 蛋白復(fù)合物 ， 繼而與 339。NCR的莖環(huán)結(jié)構(gòu)形成復(fù)制復(fù)合體參與負(fù)鏈 RNA的合成 。 可見 ，NS3蛋白在病毒感染細(xì)胞中對(duì)病毒 RNA的復(fù)制具有十分重要的功能 。 ? NS4蛋白： NS4a和 NS4b是黃病毒科病毒基因組NS4區(qū)編碼的兩個(gè)成熟的蛋白多肽 ， 多聚蛋白產(chǎn)生后在 NS3蛋白酶的作用下水解產(chǎn)生 ， 目前對(duì) NS4b的功能并不十分清楚 ，但已發(fā)現(xiàn) HCV的 NS4a在病毒復(fù)制中 ， 多聚蛋白翻譯后加工過程中具有十分重要的作用 。 NS4a蛋白不僅在多聚蛋白前體的水解過程中扮演了十分重要的角色 ，同時(shí) NS4a在 NS5a蛋白的成熟過程中發(fā)揮著重要作用 。 ? NS5蛋白： 分子量為 105ku, 在黃病毒中其氨基酸序列同源性最高 , JEV與 WNV為 82%, JEV與 YFV為 60%, WNV與 YFV為 61%， 包括 JEV在內(nèi)的幾種不同 RNA病毒聚合酶共有的序列 Gly(甘） Asp（天冬） Asp （天冬） (GDD)，這個(gè)同源序列存在于多種正鏈 RNA病毒的 RNA依賴的 RNA聚合酶中，據(jù)此推測： NS5為一個(gè)參與病毒復(fù)制的依賴于 RNA的 RNA聚合酶，即病毒復(fù)制酶。現(xiàn)已證實(shí)黃病毒中一些病毒，如 DEN、HCV、 JEV等的 NS5依賴于 RNA的 RNA聚合酶活性。Rice等在 1985年提出了 NS5蛋白可能參與病毒 RNA聚合酶的組成。 Edward 和 Takegami(1993)以及余福勛等 (1998)的研究也揭示了 NS5蛋白的這一潛在功能。 ? 總之，對(duì)于非結(jié)構(gòu)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能有待進(jìn)一步的研究。