醫(yī)學檢驗本科班分子生物學檢驗技術(shù)試卷-資料下載頁
2025-08-09 05:55本頁面
【正文】 式的不同，將限制性內(nèi)切酶分3類，Ⅰ類和Ⅲ類限制性內(nèi)切酶在同一酶分子中兼有修飾（甲基化）作用和依賴于ATP的限制水解活性，Ⅱ類限制性內(nèi)切酶能識別并水解特異性的核苷酸序列是DNA重組技術(shù)中最重要的工具。2. PCR引物的設(shè)計應(yīng)遵循哪些原則。答：，分別設(shè)在被擴增目的的片段的兩端，并分別與模版正負鏈序列互補。，引物過長容易產(chǎn)生寡核苷酸的鏈內(nèi)互補，形成發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)，影響引物和模板之間的互補?！说男蛄胁荒苡谢パa，以免形成引物二聚體。，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積。，兩條引物的Tm值不能差太大。，可在合成引物時于其5’端加修飾成分。3. 試述實時熒光PCR水解探針法的實驗原理？答：原理：PCR反應(yīng)體系中除有兩條引物外還需要一條熒光素標記的探針。探針的5’端和3’端分別標記熒光報告基團R和熒光淬滅基團Q，當探針完整時R基團與Q基團分別位于探針的兩端，Q基團抑制R基團使其不能發(fā)射熒光。PCR過程中，TaqDNA聚合酶沿著模板移動各成新鏈，當移動到模板互補的探針處時，TaqDNA聚合酶同時還發(fā)揮其5’3’外切核酸酶活性，將探針的脫氧核苷三磷酸逐個水解，R基團與Q基團隨子分離。此時R基團不再受Q基團的抑制而發(fā)射熒光，儀器的檢測系統(tǒng)便可測得熒光信號。
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