醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)本科班分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試卷-資料下載頁(yè)
2025-08-09 05:55本頁(yè)面
【正文】 式的不同，將限制性?xún)?nèi)切酶分3類(lèi)，Ⅰ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)限制性?xún)?nèi)切酶在同一酶分子中兼有修飾（甲基化）作用和依賴(lài)于ATP的限制水解活性，Ⅱ類(lèi)限制性?xún)?nèi)切酶能識(shí)別并水解特異性的核苷酸序列是DNA重組技術(shù)中最重要的工具。2. PCR引物的設(shè)計(jì)應(yīng)遵循哪些原則。答：，分別設(shè)在被擴(kuò)增目的的片段的兩端，并分別與模版正負(fù)鏈序列互補(bǔ)。，引物過(guò)長(zhǎng)容易產(chǎn)生寡核苷酸的鏈內(nèi)互補(bǔ)，形成發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)，影響引物和模板之間的互補(bǔ)?！说男蛄胁荒苡谢パa(bǔ)，以免形成引物二聚體。，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積。，兩條引物的Tm值不能差太大。，可在合成引物時(shí)于其5’端加修飾成分。3. 試述實(shí)時(shí)熒光PCR水解探針?lè)ǖ膶?shí)驗(yàn)原理？答：原理：PCR反應(yīng)體系中除有兩條引物外還需要一條熒光素標(biāo)記的探針。探針的5’端和3’端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)R和熒光淬滅基團(tuán)Q，當(dāng)探針完整時(shí)R基團(tuán)與Q基團(tuán)分別位于探針的兩端，Q基團(tuán)抑制R基團(tuán)使其不能發(fā)射熒光。PCR過(guò)程中，TaqDNA聚合酶沿著模板移動(dòng)各成新鏈，當(dāng)移動(dòng)到模板互補(bǔ)的探針處時(shí)，TaqDNA聚合酶同時(shí)還發(fā)揮其5’3’外切核酸酶活性，將探針的脫氧核苷三磷酸逐個(gè)水解，R基團(tuán)與Q基團(tuán)隨子分離。此時(shí)R基團(tuán)不再受Q基團(tuán)的抑制而發(fā)射熒光，儀器的檢測(cè)系統(tǒng)便可測(cè)得熒光信號(hào)。
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