分子生物學技術(shù)(1)-資料下載頁
2025-01-13 07:55本頁面
【正文】 轉(zhuǎn)錄生成 cDNA, cDNA 為模板 PCR擴增 ?原位 PCR技術(shù) ?在組織切片或細胞涂片單個細胞內(nèi) PCR反應(yīng)，再進行原位雜交 ?實時 PCR技術(shù) ?引入一對特殊的熒光標記引物探針， 5’端有一個熒光報告分子， 3’端有一個熒光淬滅分子； PCR進行時 Taq酶遇到熒光探針可以酶切，根據(jù)熒光信號進行 定量 核酸序列分析 ?1965年 Robert Holly用了 7年完成了酵母丙氨酸 tRNA的 76個核苷酸的序列測定 ?DNA序列分析儀 24小時內(nèi)可完成約 10000個堿基序列的測定工作 DNA鏈末端合成終止法（ Sanger法） ?四種 2’,3’雙脫氧核苷酸（ ddNTP）代替部分脫氧核苷酸（ dNTP）作為底物進行 DNA合成反應(yīng)。 ?依據(jù)是 ddNTP核糖的第三位位碳原子上不含羥基，不能與下一核苷酸反應(yīng)形成磷酸二酯鍵，致使 DNA合成反應(yīng)終止。 ?模板分四組 ，反應(yīng)一定時間后， 每一管內(nèi)加入四種 ddNTP中的一種， 如果 ddNTP:dNTP的比例適當，即可獲得在不同部位終止反應(yīng)的大小不同的DNA鏈，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離這些片段，放射自顯影就可以讀出一段 DNA的序列。
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