分子生物學(xué)許曉東(1)-資料下載頁
2025-01-18 00:50本頁面
【正文】 性擴(kuò)增 無擴(kuò)增 以 為引物的 PCR 試驗(yàn)材料 Tester 探針材料 Driver 加去磷酸化的接頭 混合、變性、復(fù)性 填平粘性末端 指數(shù)擴(kuò)增 線性擴(kuò)增 無擴(kuò)增 以 為引物的 PCR 試驗(yàn)材料 Tester 探針材料 Driver Gateway大規(guī)?？寺〖夹g(shù) 基因的位圖克隆法 ? 所有具有某種表現(xiàn)型的基因都可通過該法克隆得到 。 首先 ， 通過構(gòu)建遺傳連鎖圖 ， 將目的基因定位到某染色體的特定位點(diǎn) ， 并在其兩側(cè)確定緊密連鎖的 RFLP或 RAPD分子標(biāo)記 。 ? 通過對許多不同的生態(tài)型及大量限制性內(nèi)切酶和雜交探針的分析 ， 找出與目的基因距離最近的 RFLP標(biāo)記 ， 通過染色體步移技術(shù)將位于這兩個標(biāo)記之間的基因片段克隆并分離出來 。 蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù) ? 蛋白質(zhì)組學(xué)（ Proteomics）一詞，源于蛋白質(zhì)（ protein）與基因組學(xué)（ genomics）兩個詞的組合，意指“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”，即包括一種細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。 ? 蛋白質(zhì)組本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過程的整體而全面的認(rèn)識。 雙向電泳技術(shù) ? 雙向電泳 （ 2DE ） 由 O’ Farrell’ s于 1975年首次建立并成功地分離約 1 000個 ， 并表明蛋白質(zhì)譜不是穩(wěn)定的 ， 而是隨環(huán)境而變化 。 ? 雙向電泳原理簡明 ， 第一向進(jìn)行等電聚焦 ， 蛋白質(zhì)沿 pH梯度分離 ， 至各自的等電點(diǎn)；隨后 ， 再沿垂直的方向進(jìn)行分子量的分離 。 pH3 pH10 IEF SDS Biochem. J. (2022) 378 (929–937) 蛋白質(zhì)印跡法 ? 分子生物學(xué)中最常用的蛋白質(zhì)技術(shù)可能是蛋白質(zhì)印跡法 （ Western bloting） ， 又稱免疫印跡法 （ immunobloting） 。 ? 原理：經(jīng)過 PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品 ， 轉(zhuǎn)移到固相載體 （ 例如硝酸纖維素薄膜 ） 上 ， 固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì) ， 且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變 。 以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原 ， 與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng) ， 再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng) ， 經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分 。 該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá) 。 延伸： Southern印跡法（ Southern blot）由英國人 Edwin Mellor Southern創(chuàng)建。 DNADNA雜交。 Northern 印跡法（ Northern blot）：將 RNA固定在硝酸纖維素膜上后 ,用互補(bǔ)的 ,具有放射性標(biāo)記的 RNA或 DNA探針與其雜交。 Western印跡法（ Western blot）：將 蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)移到膜上后，用特異性抗體進(jìn)行雜交。 蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析技術(shù) ? 質(zhì)譜由于很高的靈敏度、準(zhǔn)確性、易操作性、快速性及很好的普適性而倍受科學(xué)家的廣泛注意。在質(zhì)譜測序中，靈敏度及準(zhǔn)確性隨分子量增大有明顯降低，所以肽的序列分析比蛋白容易許多，許多研究也都是以肽作為分析對象進(jìn)行的。近年來隨著電噴霧電離質(zhì)譜(electrospray ionisation， ESI)及基質(zhì)輔助激光解吸質(zhì)譜(matrix assisted laser desorption/ionization， MALDI)等質(zhì)譜軟電離技術(shù)的發(fā)展與完善，極性肽分子的分析成為可能，檢測限下降到 fmol級別，可測定分子量范圍則高達(dá)100000Da，目前基質(zhì)輔助的激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法 (MALDI TOF MS)已成為測定生物大分子尤其是蛋白質(zhì)、多肽分子量和一級結(jié)構(gòu)的有效工具，也是當(dāng)今生命科學(xué)領(lǐng)域中重大課題 ——蛋白質(zhì)組研究所必不可缺的關(guān)鍵技術(shù)之一 。
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