分子生物學許曉東(1)-資料下載頁
2025-01-18 00:50本頁面
【正文】 性擴增 無擴增 以 為引物的 PCR 試驗材料 Tester 探針材料 Driver 加去磷酸化的接頭 混合、變性、復性 填平粘性末端 指數(shù)擴增 線性擴增 無擴增 以 為引物的 PCR 試驗材料 Tester 探針材料 Driver Gateway大規(guī)?？寺〖夹g 基因的位圖克隆法 ? 所有具有某種表現(xiàn)型的基因都可通過該法克隆得到 。 首先 ， 通過構建遺傳連鎖圖 ， 將目的基因定位到某染色體的特定位點 ， 并在其兩側確定緊密連鎖的 RFLP或 RAPD分子標記 。 ? 通過對許多不同的生態(tài)型及大量限制性內切酶和雜交探針的分析 ， 找出與目的基因距離最近的 RFLP標記 ， 通過染色體步移技術將位于這兩個標記之間的基因片段克隆并分離出來 。 蛋白質組與蛋白質組學技術 ? 蛋白質組學（ Proteomics）一詞，源于蛋白質（ protein）與基因組學（ genomics）兩個詞的組合，意指“一種基因組所表達的全套蛋白質”，即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。 ? 蛋白質組本質上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質的特征，包括蛋白質的表達水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質水平上的關于疾病發(fā)生，細胞代謝等過程的整體而全面的認識。 雙向電泳技術 ? 雙向電泳 （ 2DE ） 由 O’ Farrell’ s于 1975年首次建立并成功地分離約 1 000個 ， 并表明蛋白質譜不是穩(wěn)定的 ， 而是隨環(huán)境而變化 。 ? 雙向電泳原理簡明 ， 第一向進行等電聚焦 ， 蛋白質沿 pH梯度分離 ， 至各自的等電點；隨后 ， 再沿垂直的方向進行分子量的分離 。 pH3 pH10 IEF SDS Biochem. J. (2022) 378 (929–937) 蛋白質印跡法 ? 分子生物學中最常用的蛋白質技術可能是蛋白質印跡法 （ Western bloting） ， 又稱免疫印跡法 （ immunobloting） 。 ? 原理：經過 PAGE分離的蛋白質樣品 ， 轉移到固相載體 （ 例如硝酸纖維素薄膜 ） 上 ， 固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質 ， 且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變 。 以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原 ， 與對應的抗體起免疫反應 ， 再與酶或同位素標記的第二抗體起反應 ， 經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分 。 該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達 。 延伸： Southern印跡法（ Southern blot）由英國人 Edwin Mellor Southern創(chuàng)建。 DNADNA雜交。 Northern 印跡法（ Northern blot）：將 RNA固定在硝酸纖維素膜上后 ,用互補的 ,具有放射性標記的 RNA或 DNA探針與其雜交。 Western印跡法（ Western blot）：將 蛋白質 轉移到膜上后，用特異性抗體進行雜交。 蛋白質的質譜分析技術 ? 質譜由于很高的靈敏度、準確性、易操作性、快速性及很好的普適性而倍受科學家的廣泛注意。在質譜測序中，靈敏度及準確性隨分子量增大有明顯降低，所以肽的序列分析比蛋白容易許多，許多研究也都是以肽作為分析對象進行的。近年來隨著電噴霧電離質譜(electrospray ionisation， ESI)及基質輔助激光解吸質譜(matrix assisted laser desorption/ionization， MALDI)等質譜軟電離技術的發(fā)展與完善，極性肽分子的分析成為可能，檢測限下降到 fmol級別，可測定分子量范圍則高達100000Da，目前基質輔助的激光解吸電離飛行時間質譜法 (MALDI TOF MS)已成為測定生物大分子尤其是蛋白質、多肽分子量和一級結構的有效工具，也是當今生命科學領域中重大課題 ——蛋白質組研究所必不可缺的關鍵技術之一 。
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