分子生物學(xué)常用技術(shù)及其應(yīng)用-資料下載頁(yè)
2025-08-05 02:54本頁(yè)面
【正文】 ?綜合了分子生物學(xué)、微電子學(xué)、微加工和計(jì)算機(jī)等學(xué)科知識(shí) ?本質(zhì)：在固定的玻片等載體上的微型生物化學(xué)分析系統(tǒng)，芯片上每平方厘米可排列成千上萬(wàn)生物分子，能快速準(zhǔn)確地檢測(cè)核酸，并獲取樣品中的有關(guān)信息。 第四節(jié) DNA芯片技術(shù) 一、 DNA芯片技術(shù)的概念和主要類型 ?DNA芯片技術(shù) —— 指將大量已知寡核苷酸或 DNA探針（不標(biāo)記）按特定的排列方式固化在固相支持物（多用計(jì)算機(jī)硅芯片）表面，按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，與標(biāo)記的特異的單鏈 DNA或 RNA（待測(cè)樣品）分子雜交形成雙鏈，通過對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，得出樣品分子的數(shù)量和序列信息。 DNA芯片主要類型 ?原位合成芯片 才用光介導(dǎo)和壓電打印等技術(shù)在芯片的特定部位原位合成寡核苷酸而制成的芯片 ?DNA微集陣列 將預(yù)先制備的 DNA片段以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面而制成的芯片 二、 DNA芯片技術(shù)的基本原理與方法 DNA芯片技術(shù)工作流程主要包括： ?芯片制備 —— 關(guān)鍵 ?樣品的準(zhǔn)備與標(biāo)記 ?雜交 ?信號(hào)檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析處理 （一）、芯片的制備 支持物的預(yù)處理 ?支持物包括實(shí)性材料和膜性材料 ?實(shí)性材料包括硅芯片、玻片和瓷片等 實(shí)性材料需要進(jìn)行預(yù)處理，使其表面衍生出羥基、氨基等活性基團(tuán)，并在表面用光敏材料保護(hù)。 ?膜性材料包括聚丙烯膜、尼龍膜、硝酸纖維素膜等 膜性材料則要包被氨基硅烷或多聚賴氨酸。 原位合成芯片的制備 ?兩種方法：光介導(dǎo)原位合成法、壓電打印合成法 ?利用排列組合的原理，在一塊載體的不同位置合成不同的寡核苷酸片段 DNA微集陣列的制備 包括制備探針、打印、探針固化三個(gè)步驟 （二）樣品的準(zhǔn)備 ?包括分離純化、擴(kuò)增和標(biāo)記 （三）分子雜交 ?一般 30分鐘內(nèi)完成 （四）檢測(cè)分析 ?根據(jù)產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度分析樣品含量及樣品結(jié)合的探針類型，最后分析樣品核苷酸序列。 三、 DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用（自學(xué)） ?DNA序列測(cè)定 ?突變及多態(tài)性分析 ?基因表達(dá)分析 ?基因組研究 ?基因診斷 ?藥物研究與開發(fā) ?基因診斷 —— 以 DAN或 RNA為診斷材料，DNA反映基因的存在狀態(tài)、 RNA反映基因的表達(dá)狀態(tài)，通過檢查基因的存在、缺陷或表達(dá)異常。 ?常用的方法：包括核酸分子雜交、 PCR、單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測(cè)、限制性內(nèi)切酶酶譜分析、 DNA序列測(cè)定、 DNA芯片技術(shù) 第五節(jié) 基因診斷和基因治療 ?基因治療 —— 指以正?；虺C正、替代缺陷基因，或從基因水平調(diào)控細(xì)胞中缺陷基因的表達(dá)的一種治療疾病的方法。 ?基本過程： 選擇制備目的基因 選擇基因轉(zhuǎn)運(yùn)載體 選擇靶細(xì)胞 轉(zhuǎn)移基因 外源基因表達(dá)的篩選 回輸細(xì)胞到體內(nèi)
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