凝膠遷移實驗-資料下載頁
2025-08-05 02:51本頁面
【正文】 ◆ 陰性對照反應(yīng)(核蛋白＋標記探針)?！?陽性對照(核蛋白＋標記探針)◆ 探針冷競爭反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標記探針＋標記探針100倍量的未標記探針)；◆ 突變探針的冷競爭反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的 核蛋白＋標記探針＋標記探針100倍量的未標記突變探針)；◆ Supershift反應(yīng)(含激活的目的轉(zhuǎn)錄因子的核蛋白＋標記探針＋目的轉(zhuǎn)錄因子的特異抗體).（4）預(yù)電泳和電泳： TBE在冰上120V 預(yù)電泳1小時。 務(wù)必換掉預(yù)電泳的緩沖液, TB低溫下150V，電泳約60分鐘。注意橫壓電泳的時候注意電流的數(shù)字變化,記錄開始電泳和電泳結(jié)束的電流數(shù)據(jù)的變化!（5）電轉(zhuǎn)運 TBE中390mA電轉(zhuǎn)移40分鐘, 注意轉(zhuǎn)運膜的選擇, 有一種離子加強型的轉(zhuǎn)運效果比較好! 我當初選擇過一般的和離子加強型的,還是離子加強型結(jié)合效果好!（6）紫外交聯(lián): 正規(guī)的應(yīng)該是紫外交聯(lián)儀的使用,但是很多單位沒有交聯(lián)儀,那就用無菌操作臺上的紫外等下10cm處交聯(lián)10分鐘就可以了!這個數(shù)據(jù)是我做了好多次試驗才摸索出來的!（7）化學發(fā)光反應(yīng)包括Blocking Buffer 30分鐘封閉, StreptavidinHRP標記, Washing Buffer洗滌。 Equilibration Solution平衡, 這些按照規(guī)定操作即可! 沒有太多的細節(jié),只是注意兩點,一是期間結(jié)合膜的表面一定不能干燥!二是StreptavidinHRP不能加在膜上,而是加在液體中混韻后在將膜放在液體中孵浴.（8）化學發(fā)光圖像顯示兩種方法:化學發(fā)光數(shù)字成像與檢測和感光膠片沖印成像 操作基本和Western 試驗操作相當, 只是這個膜是一次性的,不能重復(fù)使用, 一定保存好圖片!由于跑得是非變性凝膠,蛋白保持天然構(gòu)想和活性,所以代條很可能是一塊一塊的而不像WB那樣很規(guī)整的一條細線,這個很正常!正德 利用 厚生 惟和
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