3-第三章-資料下載頁(yè)
2025-08-04 08:44本頁(yè)面
【正文】 NA損傷 。 小鼠胚胎肝細(xì)胞經(jīng)不同濃度阿霉素處理后 DNA損傷情況 對(duì)照組 100ng/ml阿霉素 200ng/ml阿霉素 （一）免疫細(xì)胞化學(xué) immunocytochemistry 根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。 免疫熒光法 （ immunofluorescent technique） ：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。 酶標(biāo)免疫法 （ enzymelabeled antibody method） ：常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。 七、免疫學(xué)方法對(duì)細(xì)胞組分的分析 （二）免疫電鏡技術(shù) Gold particles coated with protein A are used to detect an antibodybound protein by transmission electron microscopy. （三）免疫印跡 ——Western blotting 技術(shù) 八、其它生化分析方法 ——X射線晶體衍射 ——電泳、層析、色譜等 第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞工程 一、細(xì)胞培養(yǎng) （一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 群體培養(yǎng) （ mass culture） ：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，匯合（ confluence） 后形成均勻的單細(xì)胞層； 克隆培養(yǎng) （ clonal culture） ：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落，稱為克隆。 Population cell culture Cloning cell culture 原代培養(yǎng)（ primary culture） ：即培養(yǎng)直接來(lái)自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱為傳代或傳代培養(yǎng)（ Passage）。 細(xì)胞系（ cell line） ：具有特定生物學(xué)與遺傳學(xué)特征，且能在體外穩(wěn)定永久生生長(zhǎng)的細(xì)胞群體。通常可來(lái)自腫瘤組織的細(xì)胞群或培養(yǎng)中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。 有限細(xì)胞系 永生化細(xì)胞系 細(xì)胞株（ cell strain） ：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。 常用的幾種細(xì)胞系 （二）植物細(xì)胞培養(yǎng) 1. 外植體培養(yǎng)： 誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長(zhǎng)發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無(wú)性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。 2. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)： 適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。 3. 原生質(zhì)體培養(yǎng)： 培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)： – ① 比較容易攝取外來(lái)的遺傳物質(zhì)，如 DNA； – ② 便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞； – ③ 適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。 4. 單倍體培養(yǎng)： 通過(guò)花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。 二、細(xì)胞工程 （一）細(xì)胞融合 通過(guò)培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程稱為 細(xì)胞融合（ cell fusion）或細(xì)胞雜交。 同核體 ：相同基因型的細(xì)胞融合而成。 異核體 ：不同基因型的細(xì)胞融合而成。 自發(fā)融合 ：同種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。 誘發(fā)融合 ：異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法 ：生物方法（仙臺(tái)病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇 PEG）、物理方法（電擊和激光）。 （二）單克隆抗體技術(shù) 正常淋巴細(xì)胞（如小鼠脾細(xì)胞）具有分泌抗體的能力，但不能長(zhǎng)期培養(yǎng)，瘤細(xì)胞（如骨髓瘤）可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，但不分泌抗體。于是英國(guó)人Kohler和 Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而發(fā)明了單克隆抗體技術(shù)，獲 1984年諾貝爾獎(jiǎng)。 （三）顯微注射技術(shù) 尼康 NT88NE顯微操作 /注射儀 顯微操作技術(shù)（ micromanipulation technique）是指在高倍復(fù)式顯微鏡下，利用顯微操作器（ micromanipulator）進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動(dòng)的機(jī)械裝置。 顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植、顯微注射、嵌合體技術(shù)、胚胎移植以及顯微切割等。細(xì)胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史， Gordon等人（ 1962）對(duì)非洲爪蟾進(jìn)行核移植獲得成功。我國(guó)著名學(xué)者童第周等在魚類細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作，并取得了豐碩成果。 第四節(jié) 模式生物 由于基因在進(jìn)化上的保守性和遺傳密碼的通用性，從一種實(shí)驗(yàn)生物得到的有關(guān)基因性質(zhì)或功能方面的信息通常也適用于其他生物。 模式生物通常具有個(gè)體小、容易培養(yǎng)、操作簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)繁殖快等特點(diǎn)。 思考題 ?名詞解釋： 激光共聚焦顯微鏡 熒光漂白恢復(fù)技術(shù) 熒光能量共振轉(zhuǎn)移技術(shù) 冷凍蝕刻技術(shù) 電鏡負(fù)染技術(shù) 透射電子顯微鏡 顯微分光光度術(shù) 原代培養(yǎng) 克隆培養(yǎng) 細(xì)胞系 細(xì)胞株 原生質(zhì)體 模式生物 ?簡(jiǎn)述生物學(xué)研究的一般策略路線。 ?決定顯微鏡分辨率的參數(shù)有哪些？提高顯微鏡分辨率的途徑有哪些？ ?免疫熒光顯微術(shù)的原理與應(yīng)用。 ?流式細(xì)胞技術(shù)的原理及應(yīng)用。 ?透射電鏡及掃描電鏡技術(shù)的原理及成像特點(diǎn)。
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