【正文】 在2015版《藥典》中主要使用蛋白電泳手段鑒定蛋白類藥物中的蛋白純度，其中包括三種類型：1. 非還原型SDSPAGE電泳：鑒定蛋白電泳條帶純度。2. 還原型SDSPAGE電泳：鑒定蛋白分子量大小。3. 等電聚焦電泳：鑒定蛋白帶電性質(zhì)是否與標(biāo)準(zhǔn)品一致。（六）功能蛋白鑒別：在2015版《藥典》中主要使用免疫印跡法對(duì)第五條中的電泳條帶通過轉(zhuǎn)印儀器轉(zhuǎn)移到一張印跡膜上，再使用特異性抗體雜交檢測(cè)印跡膜上的蛋白條帶，以鑒別蛋白種類。還有一些則使用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）的方法，通過抗體特異性地鑒別目的蛋白。（七）多糖類疫苗測(cè)定：多糖類疫苗可以使用生物學(xué)層析介質(zhì)進(jìn)行分析，其原理和色譜一樣，但所用層析介質(zhì)更適合分辨大分子生物物質(zhì)。 藥物安全評(píng)價(jià)背景介紹體內(nèi)微核試驗(yàn)是國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議ICH推薦的遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組合之一。其檢測(cè)終點(diǎn)明確、結(jié)果重復(fù)性好且易于開展，已廣泛應(yīng)用于遺傳、食品、藥物、環(huán)境等多領(lǐng)域的遺傳毒性評(píng)價(jià)。該試驗(yàn)的理論基礎(chǔ)是正在復(fù)制的細(xì)胞由于出現(xiàn)染色體斷裂或者紡錘裝置功能異常而導(dǎo)致有絲分裂染色體分布紊亂，分裂后期這些染色體碎片或整條染色體從主核中排出存于胞漿中，即所謂的微核。常規(guī)的顯微鏡檢測(cè)微核方法耗時(shí)費(fèi)力且受主觀因素影響，尤其難以滿足快速高通量檢測(cè)需要。而流式細(xì)胞術(shù)是利用流式細(xì)胞儀對(duì)處在快速、直線、流動(dòng)狀態(tài)中的單細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速定量分析,同時(shí)對(duì)特定群體加以分選的現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù)，因其具有檢測(cè)速度快、測(cè)量指標(biāo)多、特異性好、采集數(shù)據(jù)量大、分析全面等特點(diǎn)，常應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境生態(tài)、制藥、食品、農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域。近年來,流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)開始廣泛應(yīng)用于毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)研究中。檢測(cè)原理 用于流式細(xì)胞儀分析的細(xì)胞制成懸液狀態(tài)，它們?cè)诿?xì)管柱隨鞘液流經(jīng)聚焦的激光束后，光電倍增管可以檢測(cè)到散射光和熒光信號(hào)，同時(shí)計(jì)算機(jī)進(jìn)行信號(hào)同步檢測(cè)分析。檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)：（1） 自動(dòng)化檢測(cè)結(jié)果與人工顯微鏡計(jì)數(shù)相當(dāng)（包括3個(gè)指標(biāo)：未成熟紅細(xì)胞中的微核率、成熟紅細(xì)胞中的微核率、未成熟紅細(xì)胞占所有紅細(xì)胞比例）；（2） 不管是染色體碎片還是整條染色體丟失，系統(tǒng)都要檢測(cè)出；（3） 自動(dòng)化計(jì)數(shù)重復(fù)性好，保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外部結(jié)果一致；（4） 自動(dòng)化系統(tǒng)必須能辨別一些已知的假陽性結(jié)果（如：血小板、嗜堿性小體、變性珠蛋白小體和聚集RNA等）檢測(cè)方法 染色技術(shù)Dertinger等開發(fā)了一種以碘化丙錠（propidium iodide,PI）、抗CD71異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）染色和RNA酶處理相結(jié)合的熒光染色技術(shù)，在488nm單激光激發(fā)下可以有效區(qū)分4種細(xì)胞群?！?】后續(xù)在這種兩色熒光標(biāo)記系統(tǒng)基礎(chǔ)上進(jìn)行了兩方面改良，提出三色染色標(biāo)記技術(shù)：增加抗血小板免疫球蛋白染色（建議嚙齒類樣品使用抗CD61PE染色，人樣品使用抗CD42bPE染色），排除血小板干擾；CD71相關(guān)熒光閾值技術(shù)，可以更迅速區(qū)分成熟紅細(xì)胞和非成熟紅細(xì)胞?！?】 分析窗的確定Asano等建議流式細(xì)胞檢測(cè)自動(dòng)獲取20,000個(gè)RETs（網(wǎng)織紅細(xì)胞）與顯微鏡觀察結(jié)果相當(dāng)，在研究低劑量化合物毒性生物學(xué)閾值時(shí)需要以每個(gè)動(dòng)物為統(tǒng)計(jì)單位，這時(shí)每個(gè)動(dòng)物樣品分析200,000或1,000,000個(gè)RETs【4】。參考文獻(xiàn)流式細(xì)胞儀技術(shù)在微核試驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展，周長(zhǎng)慧，常艷，王征，王慶利，林海霞?！?010年全國(guó)藥物毒理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集》2010年；4暫未找到二、主要儀器介紹PCR電泳成像系統(tǒng)PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。經(jīng)過3040個(gè)熱循環(huán)，實(shí)現(xiàn)在23小時(shí)內(nèi)將目的基因片段擴(kuò)增放大幾百萬倍。在電場(chǎng)的作用下，帶負(fù)電荷的PCR產(chǎn)物在電場(chǎng)中由陰極向陽極方向移動(dòng)，不同大小的DNA條帶在電泳介質(zhì)中的遷移率不同而分離開來，經(jīng)凝膠成像儀對(duì)條帶成像并分析，達(dá)到微量核酸定性檢測(cè)等目的。C1000 Touch PCR儀性能優(yōu)良，彩色大觸摸屏便于輕松編程。完全模塊化的設(shè)計(jì)可讓使用人員根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)的要求選擇不同的反應(yīng)模塊，而且無需工具就能快速完成更換。每個(gè) PCR 模塊都含有高度可調(diào)的熱蓋，適合于低位 PCR 耗材和普通PCR耗材。C1000 Touch PCR儀可與六個(gè)可互換的反應(yīng)模塊結(jié)合使用。BioRad 提供完整系列的電泳儀以滿足電泳技術(shù)最嚴(yán)格的要求。這些電泳儀輕便、編程簡(jiǎn)單，并經(jīng)最嚴(yán)格的國(guó)際安全標(biāo)準(zhǔn)IEC10101 認(rèn)證，以確保人員與環(huán)境的最高安全保證 。全能型成像分析系統(tǒng)ChemiDoc可以進(jìn)行普通成像、化學(xué)發(fā)光成像、多通道熒光成像，是一臺(tái)大而全的成像系統(tǒng)。ChemiDoc是一個(gè)高端實(shí)驗(yàn)室的明智之選，它同時(shí)提供出色的靈敏度和廣泛的適應(yīng)性。CFX96 Touch型熒光定量PCR系統(tǒng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTime Quantitative PCR）是一種核酸相對(duì)定量檢測(cè)技術(shù)，它通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣品初始模板的定性或定量檢測(cè)。目前，依據(jù)熒光定量PCR技術(shù)制定的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有很多，如動(dòng)物源性成分檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、過敏原檢測(cè)等。CFX96 Touch光學(xué)系統(tǒng)結(jié)合 C1000 Touch 熱循環(huán)儀，組成功能強(qiáng)大、檢測(cè)靈敏的實(shí)時(shí)定量 PCR 系統(tǒng)。六通道的實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)包括了先進(jìn)的光學(xué)系統(tǒng)和精確的溫控系統(tǒng)，可提供高靈敏、可信賴的檢測(cè)結(jié)果。 升級(jí)后的 CFX96 Touch 采用了 寸超大 LCD 彩色觸摸屏，利用觸摸屏可以更方便地進(jìn)行樣品的設(shè)置、程序的編輯等操作。而且通過此大屏幕，無需電腦在反應(yīng)進(jìn)行時(shí)即可對(duì)特定樣品孔的擴(kuò)增曲線進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)控。 CFX96 Touch 固定光路技術(shù)（六個(gè) LED 燈和六個(gè)光敏二極管）能夠使每個(gè)通道中染料的檢測(cè)達(dá)到最佳效果，對(duì)靶基因進(jìn)行精確定量和分型。主要特點(diǎn)如下： 工廠校準(zhǔn)，安裝簡(jiǎn)單，光路精準(zhǔn) 每次收集所有反應(yīng)孔的數(shù)據(jù)，無需在反應(yīng)前設(shè)置板文件，可以在任何時(shí)候設(shè)置；簡(jiǎn)化程序設(shè)置操作 多種數(shù)據(jù)采集模式，包括單色快速掃描 根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)選擇運(yùn)行方式 溫度梯度功能 一次反應(yīng)即可完成實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化，摸索引物最佳擴(kuò)增效率 CFX Manager 軟件 基因表達(dá)分析功能可對(duì)多個(gè)參考基因及每個(gè)基因的擴(kuò)增效率進(jìn)行歸一化QX200微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）是BioRad獨(dú)特的數(shù)字PCR技術(shù)。ddPCR可對(duì)DNA或RNA分子采用絕對(duì)定量的方式進(jìn)行分析，具有無可比擬的精確性，不再需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。ddPCR大大提升了數(shù)字PCR技術(shù)的可擴(kuò)展性與實(shí)用性。PCR技術(shù)通過對(duì)樣品的隨機(jī)分布以及后續(xù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析而邁入“數(shù)字化”時(shí)代。QX200系統(tǒng)采用先進(jìn)的微流體技術(shù)，每份樣品可生成20000個(gè)高度均一的納升級(jí)微滴，并且還可通過反應(yīng)孔合并對(duì)高達(dá)數(shù)以百萬計(jì)的微滴進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)單份樣品更高的檢測(cè)靈敏度，使定量分析達(dá)到一個(gè)全新的水準(zhǔn)。微滴式數(shù)字PCR的實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)單、友好：一次可處理8個(gè)樣品；實(shí)驗(yàn)流程擴(kuò)展性好，可在5個(gè)小時(shí)內(nèi)完成96個(gè)樣品的分析，一天內(nèi)更可運(yùn)行多次實(shí)驗(yàn)滿足高通量樣品實(shí)驗(yàn)室的要求。QX200 Droplet Digital PCR 系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn) 最準(zhǔn)確、最靈敏的數(shù)字 PCR 解決方案，具有廣泛的應(yīng)用? 靈活的數(shù)字 PCR 化學(xué)方法，已針對(duì)TaqMan水解探針和EvaGreen測(cè)定進(jìn)行優(yōu)化? 靈活的測(cè)定設(shè)置，可通過擴(kuò)展實(shí)現(xiàn)高度的靈敏性或較大的通量? 簡(jiǎn)便而易用的工作流程，通量達(dá) 96 個(gè)樣品 QX200 Droplet Digital技術(shù)的微滴劃分功能可減少擴(kuò)增效率和 PCR 抑制劑的影響? 便捷的測(cè)定設(shè)計(jì)，不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。iQCheck全自動(dòng)病原微生物檢測(cè)系統(tǒng)（iQCheck介紹，加上并強(qiáng)調(diào)去除死菌試劑盒）主要特點(diǎn)：? 最準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果:高靈敏度、高特異性，無假陰性 ? 最完善的檢測(cè)范圍:18 種致病菌? 最適合衛(wèi)生應(yīng)急:最快 2 小時(shí)獲得檢測(cè)結(jié)果? 最簡(jiǎn)單的專利 DNA 提取:只需一步，無需離心? 高通量檢測(cè)(48 或 96 樣品) ? 不同檢測(cè)項(xiàng)目可同時(shí)同機(jī)操作 ? 靈活、簡(jiǎn)單、易用? 專業(yè)化的分子生物學(xué)服務(wù)? 權(quán)威認(rèn)證：AOAC認(rèn)證、ISO 16140認(rèn)證、AFNOR認(rèn)證脈沖場(chǎng)電泳系統(tǒng) CHEF Mapper174。 XA介紹，特點(diǎn)蛋白純化系統(tǒng)NGC 中高壓層析系統(tǒng)是一套自動(dòng)化的液相層析系統(tǒng)。專用于生物分子的分離純 化，可滿足科學(xué)研究、工藝開發(fā)以及實(shí)驗(yàn)室規(guī)模制備等不同的應(yīng)用要求。由于 NGC 層析系統(tǒng)的核心是一個(gè)真正的模塊化平臺(tái)，具有近乎無限的拓展?jié)摿?，?直觀的操作軟件使系統(tǒng)控制和結(jié)果分析變得簡(jiǎn)單溶液。因此，NGC 中高壓層析 系統(tǒng)為您的分離純化提供了一個(gè)整體的解決方案。 細(xì)胞分選系統(tǒng)BioRad 推出的 S3 是第一臺(tái)全自動(dòng)化智能細(xì)胞分選儀，具備前所未有的分選精 度和自動(dòng)化程序設(shè)計(jì)，帶有 12 根激光，前向側(cè)向檢測(cè)器以及最多四色熒光檢測(cè) 器，是分選表達(dá)熒光蛋白細(xì)胞的理想選擇。S3 使用空氣激發(fā)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞，樣 本可以在高速情況下進(jìn)行分選，同時(shí)保證靈敏度和高純度。細(xì)胞分選一直以來都 是復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)，緊湊小巧的 S3 細(xì)胞分選儀將給所有的研究者帶來穩(wěn)定簡(jiǎn)單的細(xì) 胞分選實(shí)驗(yàn)。S3 細(xì)胞分選儀為研究者帶來:■ 簡(jiǎn)易的儀器設(shè)置 – 自動(dòng)化的液滴延遲計(jì)算和液滴斷點(diǎn)監(jiān)控使得只需很少的培訓(xùn)就能實(shí)現(xiàn)精確的 14 色分選■ 設(shè)計(jì)緊湊 – 尺寸僅為 70 x 65 x 65 cm，包括內(nèi)置的液流箱和溫控系統(tǒng)■ 極少的交叉污染 – 雙上樣臺(tái)設(shè)計(jì)保證管路的清潔■ 分選模式 – 純度，富集，單細(xì)胞■ 高速高純度 – 在保證高靈敏度和高純度的情況下高速分選■ 直觀的界面 – 界面友好的 ProSortTM 軟件帶來輕松的儀器控制和分選邏輯定義三、分子平臺(tái)推薦規(guī)劃1. 分子生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要求分子生物實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化等級(jí)要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。　　(1)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)　　該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對(duì)與氣流壓力的控制，本區(qū)應(yīng)對(duì)外界保持微正壓?！　?2)標(biāo)本制備區(qū)　　該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)?！　?3)PCR擴(kuò)增區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。此外，已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。(4)PCR產(chǎn)物分析區(qū)，該區(qū)域主要用于PCR產(chǎn)物的電泳、成像及分析，也可以兼容下游測(cè)序、雜交等實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)樣本主要為高濃度PCR產(chǎn)物，氣溶膠濃度極高，污染風(fēng)險(xiǎn)最大，應(yīng)嚴(yán)格保持負(fù)壓，并且獨(dú)立通風(fēng)。本實(shí)驗(yàn)室所有實(shí)驗(yàn)器具及人員實(shí)驗(yàn)服需要與其他實(shí)驗(yàn)室保持隔離，任何相關(guān)物品只進(jìn)不出，實(shí)驗(yàn)室中廢料也應(yīng)當(dāng)封存送出丟棄或清洗。為配合電泳需求，該實(shí)驗(yàn)室必須配有獨(dú)立水源及水槽。2. 分子生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)圖范例(1)常規(guī)4區(qū)PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案可見下圖：該方案可以簡(jiǎn)化為三間，將產(chǎn)物分析區(qū)取消，并在遠(yuǎn)離此區(qū)域的另一件非分子生物實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn)。(2)在實(shí)驗(yàn)室分布條件不適合建立PCR實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，可以嘗試將已有潔凈實(shí)驗(yàn)室作為試劑準(zhǔn)備區(qū)，已有開放實(shí)驗(yàn)室作為樣本制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)，并將遠(yuǎn)離這兩個(gè)區(qū)域的有水槽和水源的非核酸實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安放電泳、成像等產(chǎn)物分析設(shè)備。(3)在實(shí)驗(yàn)室空間不富足的情況下也可以通過分割空間的方式以單間實(shí)驗(yàn)室建立分子生物實(shí)驗(yàn)室，并同樣在遠(yuǎn)離此區(qū)域的另一件非分子生物實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn)。參考方案可見下圖：?jiǎn)伍g實(shí)驗(yàn)室分割方案1：?jiǎn)伍g實(shí)驗(yàn)室分割方案2：四、分子平臺(tái)推薦設(shè)備配置儀器設(shè)備名稱型號(hào)規(guī)格數(shù)量產(chǎn)地或單位放置區(qū)域冰箱1試劑準(zhǔn)備區(qū)渦旋混勻儀BR20001BioRad試劑準(zhǔn)備區(qū)臺(tái)式離心機(jī)Model 16K1BioRad樣本制備區(qū)掌上離心機(jī)Mini Centrifuge1BioRad試劑準(zhǔn)備區(qū)紫外線消毒車1試劑準(zhǔn)備區(qū)潔凈工作臺(tái)1試劑準(zhǔn)備區(qū)移液器1BioRad試劑準(zhǔn)備區(qū)移液器220ul1BioRad試劑準(zhǔn)備區(qū)移液器10100ul1BioRad樣本制備區(qū)移液器20200ul1BioRad試劑準(zhǔn)備區(qū)移液器1001000ul1BioRad試劑準(zhǔn)備區(qū)紫外線消毒車1樣本制備區(qū)臺(tái)式離心機(jī)Model 16K1BioRad樣本制備區(qū)掌上離心機(jī)Mini Centrifuge1B