國(guó)家基金申請(qǐng)存在的問(wèn)題和對(duì)策-資料下載頁(yè)
2025-07-18 17:23本頁(yè)面
【正文】 結(jié)合序列位于其中 。 進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示：神經(jīng)元凋亡時(shí) SP1被激活；負(fù)顯性 SP1突變體和 SP1DNA結(jié)合抑制劑mithramycin A可抑制 bim的上調(diào) 。 根據(jù)以上生物信息學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)觀察 ， 我們首次提出了 SP1介導(dǎo) bim上調(diào)這一新的 bim轉(zhuǎn)錄機(jī)制：神經(jīng)元凋亡時(shí)轉(zhuǎn)錄因子 SP1被激活 ， 激活的 SP1與 bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合 ， 從而轉(zhuǎn)錄激活 bim的表達(dá) 。 本項(xiàng)目擬進(jìn)一步采用負(fù)顯性 SP1突變體的腺病毒表達(dá)技術(shù)以及啟動(dòng)子點(diǎn)突變、 EMSA和 CHIP方法，旨在獲得 SP1直接調(diào)控 bim基因的可靠證據(jù)，為闡明 SP1對(duì)促凋亡蛋白 Bim的調(diào)控作用和機(jī)制并進(jìn)一步確立 SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提供更充分的科學(xué)依據(jù)。 研究基礎(chǔ)與工作條件 — 突出與項(xiàng)目相關(guān)的工作積累 1. 研究基礎(chǔ) 已取得的研究工作成績(jī)及與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累 (對(duì)于自由申請(qǐng)項(xiàng)目，著重填寫(xiě)申請(qǐng)人近期的主要工作業(yè)績(jī)；對(duì)于重點(diǎn)項(xiàng)目，請(qǐng)著重填寫(xiě)本課題組與本項(xiàng)目相關(guān)的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績(jī) ) 2. 工作條件 已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑 (包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門(mén)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況 ) 研究基礎(chǔ) 申請(qǐng)人近年有如下工作積累和成績(jī) ： 1. 申請(qǐng)人多年的研究興趣主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與基因調(diào)控、帕金森病的研究方面，發(fā)表了 36篇與神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控有關(guān)的 SCI論文，其中作為第一作者的有 2篇，作為通訊作者的有 10篇，作為共同作者的有 24篇。 2. 申請(qǐng)人在 GSK3β促神經(jīng)元凋亡研究方面有著厚實(shí)的工作基礎(chǔ)。申請(qǐng)人曾發(fā)現(xiàn) PKA可以直接使 GSK3β的 Ser9磷酸化并抑制其活性，并進(jìn)而闡明了 cAMP/PKA 通過(guò)磷酸化并抑制 GSK3β發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用 (Mol Cell Biol, 2022)。此外，申請(qǐng)人還證明了 GSK3β的抑制劑可以保護(hù)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元，并對(duì) MPTP 誘導(dǎo)的帕金森動(dòng)物模型有很好的治療效果 (Neuropharmocolgy, 2022)。 研究基礎(chǔ) 3. 申請(qǐng)人已經(jīng)排除了 AKT、 PKA、 p90RSK參與去極化時(shí) GSK3磷酸化，經(jīng)一致序列分析和抑制劑實(shí)驗(yàn)，提出 CaMKII介導(dǎo) GSK3磷酸化的可能性，進(jìn)一步的體外重組激酶反應(yīng)分析證明， CaMKII可直接磷酸化 GSK3α Ser21/ GSK3β Ser9。此外，申請(qǐng)人還用可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了CaMKII促神經(jīng)元存活作用。這些寶貴的研究資料是本項(xiàng)目重要的工作基礎(chǔ)之一。 4. 申請(qǐng)人一直進(jìn)行神經(jīng)元凋亡中一條重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 —— JNK/cJun 通 路的靶基因及其對(duì)神經(jīng)元凋亡調(diào)控的研究。在 cJun促凋亡靶基因的研究方面取得一定成績(jī)：首次證實(shí) bim不是 cJun的靶基因 (Neurosci Lett, 2022)，并從源頭 尋 找和確立了若干介導(dǎo)凋亡的新的 cJun靶基因。其中，已經(jīng)完成了 cJun直接調(diào)控促凋亡的 BH3only 蛋白 dp5的研究 (J Biol Chem,2022)，隨后又證實(shí)了 ATF3是 cJun的促凋亡靶基因 (Neuroscience, 2022) 。 工作條件 2022年回國(guó) ， 獲得 211基金 180萬(wàn)元 ， 組建了一流的分子 、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室 。 2022年 ， 作為負(fù)責(zé)人獲得一期 985學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi) 700萬(wàn)元 ， 籌建了一流的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室并正在主持開(kāi)展蛋白質(zhì)科學(xué)的前沿性工作 。 近三年 ， 培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科研隊(duì)伍 。 這些建設(shè)性工作為解決細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 、 基因調(diào)控以及本項(xiàng)目的核心問(wèn)題奠定了扎實(shí)的基礎(chǔ) 。 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人黎明濤所在單位 —— 中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院藥理教研室是 211項(xiàng)目資助學(xué)科和國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科。人才濟(jì)濟(jì)，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學(xué)科建設(shè)資金 3000萬(wàn)元，已購(gòu)置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機(jī)、流式細(xì)胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。這是申請(qǐng)者視為非?？少F的研究工作環(huán)境。 寫(xiě)好申請(qǐng)書(shū)是申請(qǐng)成功的關(guān)鍵 ? 評(píng)審實(shí)際上只評(píng)申請(qǐng)書(shū) ? 學(xué)術(shù)水平高不等于成功 ? 基金評(píng)審相對(duì)公正 撰寫(xiě)前的準(zhǔn)備 ? 好心情、好身體 想好再寫(xiě) 3h /天 ? 讀指南、讀通知 注意截止期 ? 熟知申請(qǐng)過(guò)程、有關(guān)規(guī)定 ? 讀標(biāo)書(shū)、讀高手、讀同行、讀自己 ? 選題 賣(mài)點(diǎn)：創(chuàng)新性 工作基礎(chǔ) ? 溝通 科研科、醫(yī)科處 工作基礎(chǔ) ： 本項(xiàng)目是在原工作基礎(chǔ)上的繼續(xù)和深入。近五年，本人共發(fā)表了 12篇 SCI論文，其中作為第一作者兩篇；通訊作者四篇（見(jiàn)工作基礎(chǔ)）。研究方向主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控。本課題組在研究 JNK/cJun通路靶基因時(shí) ,發(fā)現(xiàn) “ 促凋亡蛋白 bim上調(diào)不依賴(lài) JNK/cJun”。 我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí) JNK/cJun不參與 bim的上調(diào) [1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了 PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導(dǎo) bim的上調(diào) (未發(fā)表資料 )。最近，對(duì) bim的調(diào)控研究又取得了突 破性的進(jìn)展，即發(fā)現(xiàn)了 SP1調(diào)控 bim的轉(zhuǎn)錄機(jī)制(見(jiàn)立項(xiàng)依據(jù) )。這些研究工作改變了以往的觀點(diǎn) ,也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。 因此，我們具有完成本項(xiàng)目的切實(shí)可行的、扎實(shí)的前期工作基礎(chǔ)。 擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 獲得 SP1直接調(diào)控 bim基因表達(dá)的可靠依據(jù)。 什么是關(guān)鍵問(wèn)題？ — 研究過(guò)程中對(duì)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究?jī)?nèi)容或因素。 — 為達(dá)到預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。 撰寫(xiě)要求：找出關(guān)鍵問(wèn)題，問(wèn)題清晰，分析透徹， 合理的解決方法。 謝 謝！
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