【正文】 結合序列位于其中 。 進一步實驗顯示：神經(jīng)元凋亡時 SP1被激活；負顯性 SP1突變體和 SP1DNA結合抑制劑mithramycin A可抑制 bim的上調(diào) 。 根據(jù)以上生物信息學分析和實驗觀察 ， 我們首次提出了 SP1介導 bim上調(diào)這一新的 bim轉錄機制：神經(jīng)元凋亡時轉錄因子 SP1被激活 ， 激活的 SP1與 bim啟動子核心區(qū)的SP1結合序列結合 ， 從而轉錄激活 bim的表達 。 本項目擬進一步采用負顯性 SP1突變體的腺病毒表達技術以及啟動子點突變、 EMSA和 CHIP方法，旨在獲得 SP1直接調(diào)控 bim基因的可靠證據(jù)，為闡明 SP1對促凋亡蛋白 Bim的調(diào)控作用和機制并進一步確立 SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據(jù)。 研究基礎與工作條件 — 突出與項目相關的工作積累 1. 研究基礎 已取得的研究工作成績及與本項目有關的研究工作積累 (對于自由申請項目，著重填寫申請人近期的主要工作業(yè)績；對于重點項目，請著重填寫本課題組與本項目相關的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績 ) 2. 工作條件 已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑 (包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況 ) 研究基礎 申請人近年有如下工作積累和成績 ： 1. 申請人多年的研究興趣主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號轉導與基因調(diào)控、帕金森病的研究方面，發(fā)表了 36篇與神經(jīng)元凋亡的信號轉導和基因調(diào)控有關的 SCI論文，其中作為第一作者的有 2篇，作為通訊作者的有 10篇，作為共同作者的有 24篇。 2. 申請人在 GSK3β促神經(jīng)元凋亡研究方面有著厚實的工作基礎。申請人曾發(fā)現(xiàn) PKA可以直接使 GSK3β的 Ser9磷酸化并抑制其活性，并進而闡明了 cAMP/PKA 通過磷酸化并抑制 GSK3β發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用 (Mol Cell Biol, 2022)。此外，申請人還證明了 GSK3β的抑制劑可以保護黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元，并對 MPTP 誘導的帕金森動物模型有很好的治療效果 (Neuropharmocolgy, 2022)。 研究基礎 3. 申請人已經(jīng)排除了 AKT、 PKA、 p90RSK參與去極化時 GSK3磷酸化，經(jīng)一致序列分析和抑制劑實驗，提出 CaMKII介導 GSK3磷酸化的可能性，進一步的體外重組激酶反應分析證明， CaMKII可直接磷酸化 GSK3α Ser21/ GSK3β Ser9。此外，申請人還用可靠的實驗結果證明了CaMKII促神經(jīng)元存活作用。這些寶貴的研究資料是本項目重要的工作基礎之一。 4. 申請人一直進行神經(jīng)元凋亡中一條重要信號轉導通路 —— JNK/cJun 通 路的靶基因及其對神經(jīng)元凋亡調(diào)控的研究。在 cJun促凋亡靶基因的研究方面取得一定成績：首次證實 bim不是 cJun的靶基因 (Neurosci Lett, 2022)，并從源頭 尋 找和確立了若干介導凋亡的新的 cJun靶基因。其中，已經(jīng)完成了 cJun直接調(diào)控促凋亡的 BH3only 蛋白 dp5的研究 (J Biol Chem,2022)，隨后又證實了 ATF3是 cJun的促凋亡靶基因 (Neuroscience, 2022) 。 工作條件 2022年回國 ， 獲得 211基金 180萬元 ， 組建了一流的分子 、細胞生物學實驗室 。 2022年 ， 作為負責人獲得一期 985學科建設經(jīng)費 700萬元 ， 籌建了一流的蛋白質(zhì)組學實驗室并正在主持開展蛋白質(zhì)科學的前沿性工作 。 近三年 ， 培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學和蛋白質(zhì)組學研究的科研隊伍 。 這些建設性工作為解決細胞信號轉導 、 基因調(diào)控以及本項目的核心問題奠定了扎實的基礎 。 項目負責人黎明濤所在單位 —— 中山大學中山醫(yī)學院藥理教研室是 211項目資助學科和國家重點學科。人才濟濟，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學科建設資金 3000萬元，已購置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機、流式細胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。這是申請者視為非?？少F的研究工作環(huán)境。 寫好申請書是申請成功的關鍵 ? 評審實際上只評申請書 ? 學術水平高不等于成功 ? 基金評審相對公正 撰寫前的準備 ? 好心情、好身體 想好再寫 3h /天 ? 讀指南、讀通知 注意截止期 ? 熟知申請過程、有關規(guī)定 ? 讀標書、讀高手、讀同行、讀自己 ? 選題 賣點：創(chuàng)新性 工作基礎 ? 溝通 科研科、醫(yī)科處 工作基礎 ： 本項目是在原工作基礎上的繼續(xù)和深入。近五年，本人共發(fā)表了 12篇 SCI論文，其中作為第一作者兩篇；通訊作者四篇（見工作基礎）。研究方向主要集中在神經(jīng)元凋亡的信號轉導和基因調(diào)控。本課題組在研究 JNK/cJun通路靶基因時 ,發(fā)現(xiàn) “ 促凋亡蛋白 bim上調(diào)不依賴 JNK/cJun”。 我們首次報道了神經(jīng)元凋亡時 JNK/cJun不參與 bim的上調(diào) [1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了 PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導 bim的上調(diào) (未發(fā)表資料 )。最近，對 bim的調(diào)控研究又取得了突 破性的進展，即發(fā)現(xiàn)了 SP1調(diào)控 bim的轉錄機制(見立項依據(jù) )。這些研究工作改變了以往的觀點 ,也是本項目重要的立項依據(jù)之一。 因此，我們具有完成本項目的切實可行的、扎實的前期工作基礎。 擬解決的關鍵問題 獲得 SP1直接調(diào)控 bim基因表達的可靠依據(jù)。 什么是關鍵問題？ — 研究過程中對達到預期目標有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素。 — 為達到預期目標所必須掌握的關鍵技術或研究手段。 撰寫要求：找出關鍵問題，問題清晰，分析透徹， 合理的解決方法。 謝 謝！