枯草芽孢桿菌母藥標(biāo)準(zhǔn)-資料下載頁(yè)
2025-07-14 23:45本頁(yè)面
【正文】 該培養(yǎng)基平皿上，培養(yǎng)7d～14d，酪氨酸結(jié)晶被水解而變透明為陽(yáng)性，否則為陰性。 苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn):將菌株在苯丙氨酸培養(yǎng)基斜面上于37℃培養(yǎng)24d，然后將10%FeCl3溶液滴4滴～5滴于生長(zhǎng)菌的斜面上，當(dāng)斜面上的冷凝水中產(chǎn)生綠色時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng)，即表明已經(jīng)形成了苯丙酸銅，不變則為陰性。 卵黃反應(yīng)：將雞蛋表面用70%酒精擦洗干凈，在無(wú)菌條件下取卵黃加入等量的生理鹽水，搖勻后，取10mL懸液加入到融化的、約50℃～55℃的200mL培養(yǎng)基中，然后制成卵黃平板過(guò)夜后備用。取18h24h的斜面或培養(yǎng)液中的菌體點(diǎn)種在上述平板上，37℃培養(yǎng)24h48h后觀(guān)察，如菌落四周或下面有不透明的圈出現(xiàn)，表示卵磷脂分解生成脂肪，說(shuō)明卵磷脂酶陽(yáng)性。 硝酸鹽利用反應(yīng)：%的硝酸鉀，～。將菌株接種于硝酸鹽液體培養(yǎng)基中，置室溫培養(yǎng)1d、3d、5d，當(dāng)培養(yǎng)液中滴入A液、B液（參觀(guān)附錄B），如溶液變?yōu)榉奂t色、玫瑰紅色、橙色、棕色等表示有亞硝酸鹽存在，為硝酸鹽還原陽(yáng)性。如果無(wú)紅色出現(xiàn)，可滴加1滴～2滴二苯胺試劑，此時(shí)如呈藍(lán)色反應(yīng)，則表示培養(yǎng)液中仍無(wú)硝酸鹽，又無(wú)亞硝酸鹽反應(yīng)，表示無(wú)硝酸鹽還源作用；如不呈藍(lán)色反應(yīng)，表示硝酸鹽和形成的亞硝酸鹽都已還原成其他物質(zhì)，故仍應(yīng)按硝酸鹽還原陽(yáng)性處理。 吲哚反應(yīng)：將新鮮菌種接入蛋白胨水培養(yǎng)液中培養(yǎng)1d、2d、4d、7d，沿管壁緩緩加入3mm～5mm高的寇氏吲哚反應(yīng)試劑于培養(yǎng)液表面，在液層界面發(fā)生紅色，即為陽(yáng)性反應(yīng)。如顏色不明顯，可加入4滴5滴乙醚并搖勻，使乙醚分散于液體中，然后靜止片刻，待乙醚浮至液面后再加吲哚試劑。 馬尿酸鹽水解反應(yīng)：NB培養(yǎng)液中加入1%馬尿酸鈉，接入新鮮菌種，培養(yǎng)4周～6周后，%硫酸混合，若出現(xiàn)結(jié)晶，則表示馬尿酸鹽形成安息香酸，為馬尿酸鹽水解陽(yáng)性反應(yīng)。 pH反應(yīng)試驗(yàn)：，然后接入新鮮菌液一環(huán)，同時(shí)接種普通NB培養(yǎng)液（）作對(duì)照。適溫培養(yǎng)1d～3d后觀(guān)察生長(zhǎng)情況。該培養(yǎng)液要求十分澄清，pH應(yīng)準(zhǔn)確，最好用pH計(jì)調(diào)測(cè)。 NaCl反應(yīng)試驗(yàn)：用滅菌試管配制含表7%氯化鈉的NB培養(yǎng)液，然后在各試管中接種10微升菌液，37℃培養(yǎng)48h后肉眼觀(guān)察并記錄菌的生長(zhǎng)情況。 溫度反應(yīng)試驗(yàn)：將新鮮菌液接入NB培養(yǎng)液中，然后置于55℃溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，并設(shè)不接菌培養(yǎng)液作對(duì)照，3d后觀(guān)察生長(zhǎng)情況。附 錄 B（資料性附錄）稀釋液和培養(yǎng)基制備B1 稀釋液 結(jié)晶紫混合液甲液：結(jié)晶紫，；乙醇（95%），20mL；乙液：草酸銨，；蒸餾水，80mL；將甲乙兩液相混，靜置48h后過(guò)濾使用。 碘液碘，；碘化鉀，；蒸餾水，300mL。先用蒸餾水少量（3mL～5mL）深解碘化鉀，再投入碘片，待碘全部溶解后，加水稀釋至300mL。 格里斯氏（GRIESS）試劑A液：對(duì)氨基苯磺酸，；稀醋酸（10%）左右，150mL。B液：a萘乙酸，；蒸餾水，20mL；稀醋酸(10%)左右，150mL。 二苯胺試劑，用20mL蒸餾水稀釋。 寇氏（Kovacs’ reagent）吲哚試劑對(duì)二甲苯氨基苯甲醛，8g；乙醇，760mL；濃鹽酸，160mL。B2 培養(yǎng)基 成分 蛋白胨水培養(yǎng)液（ ）蛋白胨10g，蒸餾水，1000mL。 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）（～）牛肉膏，；蛋白胨，；瓊脂，蒸餾水，1000mL。 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NA）（～）牛肉膏，；蛋白胨，；蒸餾水，1000mL。 厭養(yǎng)培養(yǎng)基酪素水解物，20g；NaCl，5g；疏基醋酸鈉，1g；甲醛次硫酸鈉，1g；瓊脂，15g；蒸餾水，1000mL。（～）蛋白胨，5g；明膠，100g～150g；水，1000Ml。 丙酸鹽培養(yǎng)基（～）酵母膏，；硫酸銨，；磷酸氫二鉀，；磷酸二氫鉀，；NaCl，；丙二酸鈉，；溴百里酚藍(lán)，；水，1000mL。 檸檬酸鹽培養(yǎng)基（～）氯化鈉，；七水硫酸鎂，；磷酸二氫氨，；檸檬酸鈉，2g；%酚紅液；1000mL。 苯丙氨酸培養(yǎng)基（pH）酵母膏,3g；磷酸氫二納，1g；氯化鈉，；瓊脂，12g；L苯丙氨酸，1g；水，1000mL。 制法將上述成分溶解，分裝于三角瓶中，塞上棉塞包扎好后于（121177。1）℃下高壓滅菌20min。 10
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