內(nèi)切葡聚糖酶基因在巨大芽孢桿菌中重組表達(dá)載體的構(gòu)建-四川-資料下載頁
2025-07-29 19:05本頁面
【正文】 ng發(fā)現(xiàn)來自Thermobifida fusca的水解酶只有其密碼子適合巨大芽孢桿菌時才能成功的表達(dá)，黃玉杰等[23]人在巨大芽孢桿菌中克隆到了編碼內(nèi)切酶的基因，該基因片段同己發(fā)表的枯草芽孢桿菌glyB—aprE之間的同源性為35％；同芽孢桿菌BP23 celB、短小芽孢桿菌內(nèi)切葡聚糖酶和多粘芽孢桿菌β 1，4內(nèi)切葡聚糖酶的編碼基因的同源性只有27％。表明巨大芽孢桿菌在密碼偏愛性上與其他芽孢桿菌存在著差別。因此，在設(shè)計(jì)引物時，通過分析巨大芽孢桿菌和編碼該基因的密碼子使用頻率，引入堿基A。使編碼的內(nèi)切葡聚糖酶能夠正確的與表達(dá)載體pHIS1525上的信號肽融合而不至改變閱讀框。在本實(shí)驗(yàn)中，我們通過PCR去除枯草芽孢桿菌C36內(nèi)切葡聚糖酶基因中編碼信號肽的序列。4 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)成功去除枯草芽孢桿菌C36內(nèi)切葡聚糖酶基因中編碼信號肽的序列，并且將去除信號肽的枯草芽孢桿菌C36內(nèi)切葡聚糖酶基因與巨大芽孢桿菌表達(dá)載體pHIS1525進(jìn)行連接，成功構(gòu)建了重組表達(dá)載體。參考文獻(xiàn)[1] 謝占玲，[J],2004,21（4）:7275.[2] 徐昶，龍敏南，[J].廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)報(bào)），2005，44（1）：107111[3] 沈?qū)W亮，[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2002，22（1）：4751[4] 李育陽. 基因表達(dá)技術(shù)[M]. 北京, 科學(xué)出版社, 2002：2629[5] Vary PS. Prime time for Bacillus megaterium[J]. Microbiology, 1994, 140: 10011013[6] Rygus T, Hillen W. Inducible highlevel expression of heterologous genes in Bacillus megaterium using the regulatory elements of the xyloseutilization operon[J]. .,1991, 35: 594599[7] 魯小城，趙宇華，[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2007，33（1）：3439[8] , . 分子克隆試驗(yàn)指南[M].第三版, 北京, 科學(xué)出版社, 2002：）[9] [M].北京：中國財(cái)政經(jīng)濟(jì)出版社，1991：231237[10] 孫大慶，閆冰，[J].中國糧油學(xué)報(bào)，2007，22（1）：108113[11] p24和gp41融合基因載體的構(gòu)建以及融合蛋白在原核細(xì)胞中的表達(dá)[D].2004復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文. 2004..4[12] 潘延鳳，潘延鳳，賀永文等. PAPa/CD81LEL融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建[J] .中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2005，15（19）：29092911[13] 邵碧英，陳文炳，、轉(zhuǎn)化體系的建立[J].食品科技，2006,46(4):4649[14] 解玉紅，宋文華，[J].生物技術(shù)通訊，2007,18（1）:6871[15] 羅立新,黃志立,凌均建等. 納豆激酶基因重組表達(dá)載體的構(gòu)建及其穩(wěn)定性[J].華南理工大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）.2001,29(4):5962[16] 何偉 , 張敏 , 馮獻(xiàn)啟等. CD80/IgG融合基因重組表達(dá)載體的構(gòu)建及在CHO細(xì)胞中功能性表達(dá)的研究[J].2005,25(9):747751[17] Spizizen J. Transformation of bilchemically deficient of strains of Bacillus subtilis by deoxyribonucleate[J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1958, 44（10）: 10721078[18] Yang Y, Biedendieck R, Wang W, et al. High yield rebinant penicillin G amidase production and export into the growth medium using Bacillus megaterium[J]. Microb Cell Fact, 2006, 536[19] Nagarajan V, Namaley R, Albertson H, et al. Secretion of the streptavidin from Bacillus subtilis[J]. , 1993, 59: 38943898[20] 李相前, 邵蔚藍(lán). 極耐熱內(nèi)切葡聚糖酶Cel 12B的高效表達(dá)[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2006, 32（2）: 13[21] Rygus T, Hillen W. Inducible highlevel expression of heterologous genes in Bacillus megaterium using the regulatory elements of the xyloseutilization operon[J]. ., 1991, 35: 594599[22] Yang Y, Malten M, Grote A, et al. Codon optimized Thermobifida fusca hydrolase secreted by Bacillus megaterium[J]. Biotechnol Bioeng, 2007, 96（4）: 780794[23] 黃玉杰, 楊合同, 丁愛云等. 巨大芽孢桿菌內(nèi)切葡聚糖酶編碼基因的克隆及序列分析[J]. 中國生物防治, 2004, 20（4）: 256259致謝本文是在導(dǎo)師陳惠教授，以及生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室?guī)熜謧兙闹笇?dǎo)下完成的。在學(xué)習(xí)和研究等方面他們都給予了悉心的指導(dǎo)和關(guān)懷，培養(yǎng)了我較強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)動手能力和思考能力。他們嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的態(tài)度和孜孜不倦的精神感染了我，激勵我不斷的前進(jìn)。在此論文完成之際，我向指導(dǎo)了我的導(dǎo)師和師兄致以最衷心的感謝！吳琦老師、韓學(xué)易老師在我論文設(shè)計(jì)及完成過程中，提出了許多寶貴和富有建設(shè)性的意見，在此表示感謝！生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究生胥兵、官興穎、李陳、李成磊、吳正芳、曾民在我實(shí)驗(yàn)過程中都給予了極大的幫助和關(guān)心，在此，我對他們一并表示最衷心的感謝！最后，感謝我的家人和朋友！他們一直默默地支持我，關(guān)心我，鼓勵我，是我論文順利完成的堅(jiān)強(qiáng)后盾。感謝所有關(guān)心和幫助過我的人
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