化妝品生產(chǎn)產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)-資料下載頁
2025-07-14 19:23本頁面
【正文】 10g，加到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩混勻，靜置15min。用其上清液作為1:10的檢液。 疏水性樣品：稱取10g，置于滅菌的研缽中，加10mL滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加入10mL滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70mL滅菌生理鹽水，在40℃～44℃水浴中充分混合，制成1：10檢液。 固體樣品 稱取10g，加到90mL滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置后，取上清液作為1：10的檢液。使用均質(zhì)器時(shí)，則采用滅菌均質(zhì)袋，將上述水溶性膏、霜、粉劑等，稱10g樣品加入90mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)1min～2min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品，加10mL滅菌液體石蠟，10mL吐溫80，70mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)3min～5min。 批準(zhǔn) 審核編制 文件名稱菌落總數(shù)的測定版本文件編號(hào)ZJBZ0206制定部門質(zhì)檢部頁次目的：保證所的生產(chǎn)的產(chǎn)品符合公司規(guī)定，滿足客戶品質(zhì)要求，制定準(zhǔn)確可行的試驗(yàn)方法，真是有效的反應(yīng)出產(chǎn)品的各種檢測指標(biāo)。范圍：本規(guī)范規(guī)定了化妝品中菌落總數(shù)的檢驗(yàn)方法；本規(guī)范適用于化妝品菌落總數(shù)的測定； 定義 菌落總數(shù) Aerobic bacterial count 化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。 測定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。儀器和設(shè)備三角瓶，250mL。量筒，200mL。pH計(jì)或精密pH試紙。高壓滅菌器。試管，18mm150mm。滅菌平皿，直徑90mm。滅菌刻度吸管，10mL、1mL。酒精燈。恒溫培養(yǎng)箱，36℃177。1℃。放大鏡。恒溫水浴箱，55℃177。1℃。培養(yǎng)基和試劑 生理鹽水：。 卵磷脂、吐溫80—營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 氯化鈉 5g 瓊脂 15g 卵磷脂 1g 吐溫80 7g 蒸餾水 1000mL制法：先將卵磷脂加到少量蒸餾水中，加熱溶解，加入吐溫80，將其他成分（除瓊脂外）加到其余的蒸餾水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐溫80，混勻，～，加入瓊脂，121℃高壓滅菌20min，儲(chǔ)存于冷暗處備用。 %氯化三苯四氮唑（2,3,5triphenyl terazolium chloride，TTC） 成分：TTC 蒸餾水 100mL 制法：溶解后過濾除菌，或115℃高壓滅菌20min，裝于棕色試劑瓶，置4℃冰箱備用。 6 操作步驟 用滅菌吸管吸取1：10稀釋的檢液2mL，分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。另取1mL注入到9mL滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液面），更換一支吸管，并充分混勻，制成1:100檢液。吸取2mL，分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL。如樣品含菌量高，還可再稀釋成1:1000，1:10000，……等，每個(gè)稀釋度應(yīng)換1支吸管。 將融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注到平皿內(nèi)，每皿約15mL，隨即轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h177。2h。另取一個(gè)不加樣品的滅菌空平皿，加入約15mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h177。2h，為空白對(duì)照。 為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL %的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。7 菌落計(jì)數(shù)方法先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用5倍～10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長時(shí)，該平皿不宜計(jì)數(shù)。若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以2，以代表全皿菌落數(shù)。8 菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法 首先選取平均菌落數(shù)在30～300之間的平皿，作為菌落總數(shù)測定的范圍。當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例1）。 若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30～300之間，則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來決定，若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)報(bào)告之（見表1中例2及例3）。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例4）。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1例5）。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一個(gè)稀釋度大于300，而相鄰的另一稀釋度小于30時(shí)，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1中例6）。 若所有的稀釋度均無菌生長，報(bào)告數(shù)為每g或每mL小于10CFU。 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告之，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù)，可用10的指數(shù)來表示（見表1報(bào)告方式欄）。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí)，應(yīng)注明樣品的稀釋度。 按重量取樣的樣品以CFU/g 為單位報(bào)告；按體積取樣的樣品以CFU/mL為單位報(bào)告 批準(zhǔn) 審核編制
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