【正文】 1 材料與方法 供試菌株供試菌株是從云南省宣威市的玉米和馬鈴薯多樣性混栽田塊中海禾1號玉米品種上采集到的病標樣單孢分離得到。 試驗方法 單胞分離將帶有大斑病斑的葉片剪成3～4cm長段，用自來水沖洗后，放人70％的酒精中30s，用滅菌水連續(xù)沖洗數(shù)次。再置于培養(yǎng)皿中潮濕的濾紙上，于室溫(22～24)培養(yǎng)2～3d后，在顯微鏡下鏡檢病斑上的分生孢子情況，并置于培養(yǎng)皿中的干濾紙上8～12 h后，輕輕地將孢子振落到較薄的清水瓊脂培養(yǎng)基(16～18g瓊脂，1000mL水)上，在顯微鏡下(1010)鏡檢，若1個視野只有1個孢子，則用蘸有藍墨水的竹簽正對著孢子作標記，在無菌條件下采用改造的移植環(huán)將含單個分上孢子的小膠塊切下轉移至斜面試管培養(yǎng)基(PDA)上于27溫箱中培養(yǎng)。 不同培養(yǎng)基對玉米大斑病菌生長的影響培養(yǎng)基的配方[8]:：30g燕麥，15g蔗糖，16～18g瓊脂，1000mL水。：30g燕麥，15g蔗糖，25 mL玉米汁，16～18g瓊脂，1000mL水。：30g燕麥，15g蔗糖，25mL桔子汁，16～18g瓊脂，1000mL水。d．燕麥加桔子汁加玉米汁培養(yǎng)基：30g燕麥，15g蔗糖，25mL桔子汁，25mL玉米汁，16～18g瓊脂，1000mL水。將供試菌株移人裝有上述4種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內，倒置于27恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d后測量菌落直徑。 碳源對玉米大斑病菌生長的影響以燕麥培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，按照相同比例分別以蔗糖加玉米汁、淀粉、麥芽糖、葡萄糖、乳糖和蔗糖6種處理作為不同碳源，分別以不加糖為對照，接病原菌后于27恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)觀察培養(yǎng)10d，分別于第5d，7d，10d測量菌落直徑，每個處理重復3次。培養(yǎng)基配方如下：CK：30g燕麥，16～18g瓊脂，1000mL水。A：30g燕麥，15g蔗糖，16～18g瓊脂，25mL玉米汁，1000mL水。B：30g燕麥，15g淀粉，16～18g瓊脂，1000mL水。C：30g燕麥，15g麥芽糖，16～18g瓊脂，1000mL水。D：30g燕麥，15g葡萄糖，16～18g瓊脂，1000mL水。E：30g燕麥，15g乳糖，16～18g瓊脂，1000mL水。F：30g燕麥，15g蔗糖，16～18g瓊脂，1000mL水。 光照對大斑病菌產(chǎn)孢的影響將供試菌株移人對照及不同糖的6種培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內，倒置于27恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10d，用棉簽把菌絲刮斷，放到20的恒溫人工氣候箱中產(chǎn)孢(注意稍微錯開皿蓋)3d．處理1：每天光照24h；處理2：每天光照12h，黑暗12h．2 結果與分析 單胞分離用本文所述的單孢分離方法，對從云南省13個縣市的113份玉米大斑病病標樣進行單孢分離，共得到239個單孢菌株，選X02—9為供試菌株。 培養(yǎng)基對大斑病菌生長的影響將培養(yǎng)5d后的菌落，用直尺量取菌落直徑，結果如圖1.圖l 不同培養(yǎng)基對病原菌生長的影響 Effects of different media on the mycelial growth從圖1可以看出，菌落在a和c上生長速度快(～)，在b和d上生長速度慢(～)，并且在a和c上菌絲較厚、結構緊密，在b和d上菌絲較短、稀疏。 碳源對病原菌生長的影響將單胞菌株移人對照及6種不同碳源的培養(yǎng)基內，培養(yǎng)5d，7d，10d后，用直尺量取菌落直徑，結果如表1.表1 碳源對病原菌生長的影響 Effects of carbon source on mycelial growth培養(yǎng)基菌落直徑/cm5d7d10dABCDEFCK從表1可以看出，不同碳源對該病原菌菌絲生長的影響有明顯的差異，在5～7d這個階段，該病原菌對D(葡萄糖)和F(蔗糖)的利用效果較好，其中又以蔗糖對玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)生長最有效，從第10d的結果可看出，F(xiàn)(蔗糖)以及A(蔗糖加玉米汁)菌落平均直徑最高，也說明該病原菌對玉米汁的利用效果也很好。前期病原菌在無糖的條件下也能生長得很好，后期由于糖分不足生長速度逐漸減慢。 不同光照條件對產(chǎn)孢的影響將培養(yǎng)皿放在不同光照條件下產(chǎn)孢3d后，在顯微鏡(1010)下鏡檢，結果如表2.表2 不同光照條件對產(chǎn)孢的影響 The effects on spore product in different illumination培養(yǎng)基類型產(chǎn)孢條件平均產(chǎn)孢量/（－1）t 檢驗蔗糖＋玉米汁處理1－**處理2淀粉處理1－**處理2無糖處理1－處理2麥芽糖處理1－**處理2葡萄糖處理1－*處理2乳糖處理1－**處理2蔗糖處理1－**處理2注：**表示處理1和處理2之間差異極顯著；*表示處理1和處理2之問差異顯著。從表2可以看出，處理1和處理2相比，～。經(jīng)t檢驗，處理1和處理2的平均產(chǎn)孢量差異除加葡萄糖的培養(yǎng)基為顯著外，其它均是極顯著。在未加糖的培養(yǎng)基對照中，由于養(yǎng)分不足處理1和處理2的平均產(chǎn)孢量差異不顯著。3 討論國外玉米產(chǎn)區(qū)對此病已進行了廣泛而深入的研究。我國自20世紀70年代初開展玉米病害攻關研究以來，在病原菌生理小種、抗病育種等方面取得了重大進展，緩解了玉米大斑病的發(fā)生和危害。然而，盡管栽培技術不斷改革，玉米品種更換和病原菌群體變異，玉米大斑病仍是生產(chǎn)上不可忽視的重要病害。在開花前期發(fā)病嚴重時，可使產(chǎn)量下降50％，甚至更多[9]。本試驗中的單孢分離法與水洋菜平板稀釋法[6]、微塊單孢分離法等相比具有簡便易行、準確率高、不易污染等優(yōu)點。菌絲在不同培養(yǎng)基上生長差異顯著，菌絲在燕麥和燕麥桔子汁培養(yǎng)基上生長較好，且菌絲顏色一致、結構緊密，有利于生長。在燕麥玉米汁和燕麥桔子汁加玉米汁兩種培養(yǎng)基生菌絲顏色不一致，且稀疏，不利于菌絲生長。該病原菌在不同的產(chǎn)孢條件下，產(chǎn)孢量差異大。光暗交替條件下產(chǎn)孢量較大，在培養(yǎng)基表面能夠看到一層灰褐色的孢子層，本試驗結果與Thakur[10]，LEATHS等[11]報道的降低光照強度利于病害的發(fā)生相一致。本研究結果對進一步研究玉米大斑病菌提供了簡便易行的一種研究方法。致謝 試驗得到了云南農(nóng)業(yè)大學2000級植保班劉會英、李佳、王洪海等人的幫助，特此致謝。[參考文獻][1] 高衛(wèi)東，戴法超．玉米大斑病研究的新進展[J].植物病理學報，1993，23(3)：193—195.[2] PERKINSJM, PEDERSENWL．Disease development and yield losses associated with northern leaf blight on [J]．Plant disease, 1987,71: 940—943.[3] ULLSTRUP A J, MILES S A. The effects of some lea blights of on grain yield[J]. Phytopathology, 1957,47:331—336.[4] CARSON M L，VAN DYKE C G. Effect of Light and Temperature on Expression of Partial Resistance of Maize to Exserohilum turcicum [J]. Plant disease，1994,78:519—522.[5] 安鑫龍,董金皋,，[J].河北農(nóng)業(yè)大學學報,2001,24(1):38—41.[6] [M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1994.[7] 成剛．玉米大斑病菌生理小種2號的分布與防治[J]．玉米科學,1993,1(1):65—70.[8] (第三版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998.[9] 王慶華,楊繼良,尹小燕,[J].玉米科學,2002,10(2):93—96.[10] THAKUR R P，LEONARD K J，JONKS R K. Characterization of a new race of Exserohilum turcicum virulent on corn with resistance gene HtN [J]. Plant disease,1989,73：151—155.[11] IEAIH S, THAKUR R P，LEONARD K J. Effect of Light and Temperature on reaction of corn to race 3 of Exserohilum turcictm [J]. Phytopathology,1987,77:1737.附件四：云南農(nóng)業(yè)大學本科生畢業(yè)論文（設計）管理參考表格云南農(nóng)業(yè)大學本科生畢業(yè)論文（設計）選題匯總表學院專業(yè)年（班）級學 號姓 名畢業(yè)論文（設計）選題題目課題類型注：課題類型填寫“科研型”、“工程設計型”、或者“生產(chǎn)實踐型”。云南農(nóng)業(yè)大學本科生畢業(yè)論文(設計)開題報告 學院 專業(yè)( 科) 級 班論文題目： 畢業(yè)論文(設計)起止時間：年　 月　 日～　　 　　年　 月　 日(共　　周)學生姓名： 學號：指導教師： 報告日期： 云南農(nóng)業(yè)大學教務處 制年　月　日云南農(nóng)業(yè)大學畢業(yè)論文(設計)開題報告1．本課題所涉及的問題在國內(外)的研究現(xiàn)狀綜述2．本人對課題提出的任務要求及實現(xiàn)預期目標的可行性分析云南農(nóng)業(yè)大學畢業(yè)論文(設計)開題報告3．本課題需要重點研究的、關鍵的問題及解決的思路4．完成本課題所必須的工作條件(如工具書、實驗設備或實驗環(huán)境條件、某類市場調研、計算機輔助設計條件等)及解決的辦法云南農(nóng)業(yè)大學畢業(yè)論文(設計)開題報告5．完成本課題的工作方案及進度計劃6．指導教師審閱意見指導教師(簽字)：　　　　　　 年 月 日說明：1．本報告必須由承擔畢業(yè)論文(設計)課題任務的學生在第1周至第3周獨立撰寫完成，并交指導教師審閱。2．每一個畢業(yè)論文(設計)課題撰寫開題報告一份，作為指導教師審查學生能否承擔該畢業(yè)論文 (設計)課題任務的依據(jù)，并接受學院和學校的抽查。 50 云南農(nóng)業(yè)大學本科生畢業(yè)論文(設計)答辯委員名單 學院 專業(yè) 年級人員性質姓名職稱職務人員性質姓名職稱職務人員性質姓名職稱職務主任委員委員秘書委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員委員注意：若此表欄數(shù)不夠，可自行擴張云南農(nóng)業(yè)大學本科生畢業(yè)論文(設計)答辯教師分組名單 學院 專業(yè) 年級第一組姓名第二組姓名第三組姓名第四組姓名第五組姓名第六組姓名組長組長組長組長組長組長秘書秘書秘書秘書秘書秘書組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員組員注意：若此表