醫(yī)學(xué)超級(jí)全核醫(yī)學(xué)第六章-資料下載頁(yè)
2025-05-28 01:34本頁(yè)面
【正文】 反應(yīng)試管對(duì)微量抗原、抗體的吸附。 ?：多功能的螯合劑，可以去除樣品中的鈣鎂離子。 ?％疊氮鈉：防腐劑。 73 （三）反應(yīng)的溫度和時(shí)間 ?溫度升高，抗原抗體結(jié)合的親和力要下降，溫度每升高 10℃ ，抗原抗體結(jié)合達(dá)到平衡的速度約提高一倍，達(dá)到平衡的時(shí)間縮短，反應(yīng)時(shí)間縮短。 ?溫度降低，親和常數(shù)提高，增加了反應(yīng)的靈敏度。 74 （四）操作基本步驟 RIA的操作一般包括加樣、孵育、分離、測(cè)量和數(shù)據(jù)處理 5個(gè)部分。 1. 加樣：注意所有的試管加樣總體積要保持一致 ， 所處的介質(zhì)環(huán)境也要一致 。 2. 孵育：根據(jù)不同的分析對(duì)象孵育的溫度和時(shí)間不同 ， 一般是 37℃ 。 3. 分離：選擇好的分離方法進(jìn)行分離 。 4. 測(cè)量：測(cè)量游離或結(jié)合物部分的放射性 。 5. 數(shù)據(jù)處理：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)物濃度的計(jì)算。 75 免疫放射分析 immunoradiometric assay, IRMA 76 *Ab + Ag*Ab + *Ab Ag （ B） （ F） 在體外條件下 , 利用 Ag與過(guò)量的 *Ab的非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定放射性復(fù)合物的量來(lái)計(jì)算出 Ag 量的一種超微量分析技術(shù)。 基本原理 77 基本原理 ? 免疫放射分析是一種非競(jìng)爭(zhēng)性的抗原抗體反應(yīng)，是用過(guò)量的放射性標(biāo)記抗體來(lái)測(cè)定樣品中的抗原，其中標(biāo)記抗體是過(guò)量的，抗原全部是非標(biāo)記的。 ? 將放射性核素標(biāo)記在抗體上，用過(guò)量的抗體與抗原結(jié)合，反應(yīng)平衡后，用分離方法除去多余的抗體，測(cè)量抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性。利用抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性活度與抗原劑量之間的函數(shù)關(guān)系來(lái)測(cè)定待測(cè)抗原的量。 78 IRMA的基本方法 根據(jù) IRMA的分離方法一般可以分為： 雙抗夾心法 :（最常用） 將分離抗體涂在反應(yīng)容器的壁上，稱固相抗體。固相抗體先于抗原反應(yīng)，形成固相抗體－抗原復(fù)合物，再與標(biāo)記抗體反應(yīng)，形成固相抗體－抗原－標(biāo)記抗體復(fù)合物附著在管壁上，傾去上清液直接測(cè)量反應(yīng)容器的放射性。 79 80 標(biāo)記第三抗體法： 用雙抗夾心法中的第二抗體（標(biāo)記抗體）作為抗原免疫其他的動(dòng)物獲得的抗體為第三抗體。反應(yīng)后得到固相抗體－抗原－第二抗體－標(biāo)記第三抗體的復(fù)合物。 一般第三抗體是由兔抗鼠 IgG的抗血清制成的，對(duì)于所有使用小鼠 IgG作為第二抗體的反應(yīng)系統(tǒng)都能形成抗原抗體復(fù)合物，又稱為通用性標(biāo)記抗體。 81 生物素－親和素系統(tǒng)： 一個(gè)抗體分子可以連接多個(gè)生物素分子，而每一個(gè)生物素分子都可以連接一個(gè)親和素且連接很緊密。用放射性核素標(biāo)記親和素，可以使這個(gè) IRMA系統(tǒng)的靈敏度大大提高。 82 IRMA和 RIA的區(qū)別 反應(yīng)機(jī)制不同： RIA是競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)； IRMA是非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng) 反應(yīng)試劑： RIA主要試劑有三種，標(biāo)記的是抗原； IRMA主要試劑只有兩種，標(biāo)記的是抗體。 83 分離方法不同： IRMA需要 2個(gè)或 2個(gè)以上的抗原決定簇； RIA只需要一個(gè)抗原決定簇。 劑量關(guān)系： 待測(cè)抗原復(fù)合物的放射性在 RIA中于待測(cè)抗原的量呈負(fù)相關(guān)； 在 IRMA中呈正相關(guān)。 84 反應(yīng)中的 NSB： 在 RIA主要影響高劑量反應(yīng)； 在 IRMA中主要影響低劑量反應(yīng)。 擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線 擬合的 NSB 擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線 擬合的 NSB IRMA的標(biāo)準(zhǔn)曲線及非特異結(jié)合曲線 RIA的標(biāo)準(zhǔn)曲線及非特異結(jié)合曲線 85 RIA IRMA 競(jìng)爭(zhēng)性抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 非競(jìng)爭(zhēng)性抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 采用標(biāo)記抗原 采用標(biāo)記抗體 三種主要反應(yīng)試劑 二種主要反應(yīng)試劑 所用抗體是限量的 所用抗體是過(guò)量的 AgAb的量與待測(cè) Ag的量呈負(fù)相關(guān) AgAb的量與待測(cè) Ag的量呈正相關(guān) 反應(yīng)到達(dá)平衡慢 反應(yīng)到達(dá)平衡快 非特異結(jié)合主要影響高劑量區(qū) 非特異結(jié)合主要影響低劑量區(qū) 低劑量區(qū)有不確定因素 低劑量區(qū)無(wú)不確定因素 IRMA與 RIA工作原理的主要區(qū)別 86 IRMA在實(shí)際應(yīng)用中的特點(diǎn) ? 標(biāo)記物的穩(wěn)定性好：標(biāo)記的是抗體 IgG蛋白分子，含有多個(gè)酪氨酸或組氨酸殘基，標(biāo)記方法簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好。 ? 反應(yīng)動(dòng)力學(xué)：非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，且抗體是過(guò)量的，反應(yīng)速度快，反應(yīng)容易達(dá)到平衡，溫度變化對(duì)結(jié)果影響不大。 87 ? 靈敏度：理論上比 RIA高出 10～ 100倍。但是要求有良好的分離方法的保證。 ? 特異性：由于使用的是單克隆抗體，所以特異性一般比較高。 ? 加樣誤差：由于抗體是過(guò)量的，所以在 IRMA的加樣誤差主要來(lái)自抗原一個(gè)環(huán)節(jié)。而 RIA的抗體、待測(cè)抗原、標(biāo)記抗原都可能產(chǎn)生加樣誤差。 88 ?優(yōu)點(diǎn)：是非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng) ， 靈敏度明顯高于 RIA。 ?缺點(diǎn)：需要特殊的分離方法。 由于 IRMA中要分離的是游離抗體和抗原抗體復(fù)合物，都屬于大分子，非特異的分離方法很難奏效。主要是靠單克隆抗體作為分離劑，因此在 IRMA系統(tǒng)中需要兩種抗體，至少需要兩個(gè)抗原決定簇，對(duì)小分子的半抗原不合適。
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