血型分子診斷技術(shù)進展與應(yīng)用-資料下載頁
2025-05-26 18:24本頁面
【正文】 （抗體缺乏） ? 譜細胞 紅細胞血型中采用的技術(shù) ? PCRRFLP ? PCRSSP – 多重 PCR技術(shù) ? PCRSBT ? PCRSSCP ? PCRRQ ? 基因芯片 ? 方法的優(yōu)缺點 ? 與血清學方法的比較 紅細胞血型系統(tǒng)基因分型技術(shù) PCRRFLP(限制性片段長度多態(tài)性 ) ? 通過 PCR擴增出包含突變位點的特定片段 ? 利用限制性內(nèi)切酶消化 ? 片段經(jīng)凝膠電泳 ? 不同的片斷大小檢測便能確認基因型 ? 方法特性 – 操作較簡單 – 酶切過程需要控制 PCRRFLP ? 復(fù)合 PCRRFLP技術(shù)檢測ABO基因型 .中華醫(yī)學遺傳學雜志 ,1999年第 2期 復(fù)合 PCR 技術(shù)在 ABO 血型基因分型中的應(yīng)用 ,北京醫(yī)學 2022 年第 29 卷第 2 期 PCRSSP ? 利用 3‘堿基特性 ? 分別 設(shè)計 一系列序列 特異性引物 ? 直接擴增出目的基因片段 ? 通過凝膠電泳觀察 ? 方法特性 – 簡單快捷 – 易于操作 – 基于已知序列 PCRSSCP ? 選擇性擴增基因片段 ? 加熱或用變性劑解開 DNA雙鏈 ? 由于等位基因的核苷酸順序的不同 ， 二級結(jié)構(gòu)產(chǎn)生差異 ? 在聚丙烯酰胺凝膠電泳中 電泳遷移率 不同 ? 分析電泳帶型即可區(qū)別開等位基因 DNA測序法 ? 通過 PCR擴增基因的主要片段 ， 然后對產(chǎn)物進行序列分析測定 ， 分析發(fā)生突變的堿基便可確認血型 ? 血型及其亞型的分子基礎(chǔ) ? 本方法結(jié)果 準確可靠 ? 需要特殊的儀器設(shè)備 ? 操作煩瑣 ， 成本高 測序技術(shù) ? 測序技術(shù) ? 雙脫氧終止法 ? 化學降解法 ? 高通量測序 Partial sequence in exon 6 O01 allele Bw12 allele ?A novel allele 基因芯片技術(shù) ? 2022年 Transfusion 45(5):6549 – Transfusion 45(5):667679 – 高通量 – 同時分析多個系統(tǒng) – 多個位點 (等位基因 ） – 快速可靠 – 可 自動化 – 國外產(chǎn)品為主 實時熒光技術(shù) (PCRRQ) ? Prediction of fetal Rh D and Rh CcEe phenotype from maternal plasma with realtime polymerase chain reaction. Transfusion and Apheresis Science 27 (2022) 217–223 ? 實時定量 ? 熒光基團 ? 特異性探針 ? 產(chǎn)前診斷 RTPCR ? 逆轉(zhuǎn)錄 ? mRNA和 cDNA ? 全部編碼序列 ? 無內(nèi)含子區(qū)域 ? 功能研究 – 克隆 – 體外表達 – 突變功能 RTPCR to amplify the full length cDNA of RHD 2022bp 1000bp 1 2 M Primer: RHF amp。 RHR 國內(nèi)紅細胞血型系統(tǒng)基因診斷情況 ? 基因分型方法的建立 ? 分子遺傳多態(tài)性檢測 ? 罕見表型分析 ? RHD基因 ? ABO血型亞型 ? 類孟買型 ? 其他 ? 功能表達 紅細胞血型基因分型 ? 不能完全取代傳統(tǒng)的血清學方法， 其原因有： – 血清學方法快速、簡單，易于操作 – 血清學試驗比 PCR方法成本低 – DNA技術(shù)不能用于抗體篩選，至少目前尚沒有合適的方法 – DNA技術(shù)只能預(yù)測血型表現(xiàn)型 ? 基因分型方法： – 樣本來源更廣，保存時間更長 – 稀有表型鑒定 、疑難樣本鑒定、闡明分子機理等 – 目前 DNA分型結(jié)果應(yīng)該與血清學結(jié)果相互補充 血型分子診斷發(fā)展 ? 小結(jié)： ? 血型分子機制 ? ABO ? RHD ? FUT1 ? 診斷技術(shù) 血型分子診斷發(fā)展 ? 高通量技術(shù) ? 表觀遺傳 ? RNA干擾 ? 等位基因數(shù)量 ? 分子機制 ? 表達調(diào)控 ?謝謝各位同仁的支持！ ?不當之處請指正
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