結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)新進(jìn)展-資料下載頁(yè)
2025-05-26 18:08本頁(yè)面
【正文】 能力有限； ②需要大量的基因組 DNA，操作步驟繁瑣且工作量大； ③各實(shí)驗(yàn)室所采用的 IS6110RFLP分型方法的標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，不同實(shí)驗(yàn)室的 IS6110RFLP分型結(jié)果難于進(jìn)行比對(duì)。 二、 新診斷技術(shù)和方法 （ 5）分子分型技術(shù) 42 42 直接重復(fù)片段及寡核苷酸多態(tài)性分型： 基于直接重復(fù)區(qū)（ RD區(qū)）的多態(tài)性。DR區(qū)只出現(xiàn)于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群中。由若干個(gè)保守的長(zhǎng)為 36bp的直接重復(fù)序列 組成，并被非重復(fù)序列即 間隔區(qū)分開 。每隔間隔區(qū)序列長(zhǎng)為 3441bp。通常 間隔區(qū)的順序在所有菌株都是相同的，但可能發(fā)生某一間隔區(qū)的插入或缺失， 因此利用Spoligotyping就可以對(duì)結(jié)核分支桿菌進(jìn)行株水平的鑒定。 可以區(qū)分結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和 BCG 二、 新診斷技術(shù)和方法 （ 5）分子分型技術(shù) 43 43 直接重復(fù)片段及寡核苷酸多態(tài)性分型： Spoligotyping ① 該方法 對(duì)菌株的分辨能力明顯弱于 IS6110一 RFLP方法，特別是不能有效分辨北京家族菌株，而在我國(guó)目前流行的結(jié)核菌株中，大約 50%屬于北京家族 ； ② 同時(shí)與其他方法相比有高估菌株間流行病學(xué)聯(lián)系的傾向。 二、 新診斷技術(shù)和方法 分子生物學(xué) 44 44 可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列： MIRUVNTR 該技術(shù)是近年發(fā)展起來的以 PCR為基礎(chǔ)的分型技術(shù)。 MIRU為 40100bp的 DNA元件 ，通常以串聯(lián)重復(fù)形式散步于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群基因中。 H37Rv基因組中含41個(gè) MIRU區(qū) ，其中有 12個(gè)區(qū)具有多態(tài)性 ，其拷貝數(shù)在不同菌株之間 12個(gè)區(qū)拷貝數(shù)在 不同菌株之間存在差異 。 MIRU技術(shù)利用不同菌株之間這 12個(gè)區(qū)拷貝數(shù)的差異達(dá)到鑒定菌株的目的。 二、 新診斷技術(shù)和方法 分子生物學(xué) 45 45 可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列： MIRUVNTR 該方法操作簡(jiǎn)單 ,分辨率高 ,結(jié)果容易分析 ,具有很高的可重復(fù)性 ,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間具有非常好的可比性 ,并能提供數(shù)字化的分型信息 ,適宜于進(jìn)行大量樣本和網(wǎng)絡(luò)化分析。 二、 新診斷技術(shù)和方法 分子生物學(xué) （ 5）分子分型技術(shù) 46 46 DNA測(cè)序法被認(rèn)為是檢測(cè)變異的“金標(biāo)準(zhǔn)”，可檢測(cè)出待檢基因上的所有突變位置和突變情況。已用于 RFP、 INH、 PZA、EMB等耐藥基因的檢測(cè)。 缺陷：專業(yè)設(shè)備，專業(yè)技術(shù)，限制其廣泛應(yīng)用。 二、 新診斷技術(shù)和方法 其他 （ 1） DNA測(cè)序法 47 47 在應(yīng)用某項(xiàng)新技術(shù)時(shí)，需要考慮的一般性問題： —— 是否有足夠的經(jīng)過培訓(xùn)的人員 —— 有效的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體制 —— 能否得到備用設(shè)備和耗材 —— 技術(shù)支持的可獲得程度 —— 工作環(huán)境的條件 等等 二、 新診斷技術(shù)和方法 未來實(shí)驗(yàn)室的診斷模式 需要810周時(shí)間 需要4天時(shí)間 患者標(biāo)本 分子方法 傳統(tǒng)方法 菌種鑒定 藥敏試驗(yàn) 涂片 培養(yǎng) 菌種鑒定和藥敏試驗(yàn) 結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室未來檢測(cè)模式 可疑結(jié)核病患者的標(biāo)本 涂片陽(yáng)性或二者均陽(yáng)性 二者均陰性 培養(yǎng)陽(yáng)性 基因分型 復(fù)發(fā)再感染或流行規(guī)律研究 快速藥敏試驗(yàn) 利福平耐藥 利福平敏感 耐藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 臨床治療方案 耐藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 臨床治療方案 快速菌種鑒定 涂片 未來實(shí)驗(yàn)室的診斷模式 以病人為中心的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)平臺(tái) 固體培養(yǎng) ? 監(jiān)測(cè) ? 應(yīng)急處置 ? 網(wǎng)絡(luò)建設(shè) ?主要篩查耐藥 ? 診斷治療 ? 主動(dòng)發(fā)現(xiàn) ? 被動(dòng)的病人發(fā)現(xiàn) ? 診斷治療 地市 縣區(qū) HIV/TB雙重感染 MDRTB/TBMM 省級(jí) 萋尼 熒光 涂片檢查 推薦耐藥可疑者 iLED LAMP等 手動(dòng)分子診斷 HIV/TB雙重感染 分子診斷 MDRTB/TBMM 固體培養(yǎng) 分子診斷 LPA等 應(yīng)急處置 TB 疫情監(jiān)測(cè) 傳統(tǒng)方法 / 新診斷技術(shù) 確定治療方案 51 The End
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