【正文】 ? 唾液酸苷酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?半乳糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?巖藻糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 唾液酸 苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?半乳糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的內(nèi)切糖 苷酶 ? 內(nèi)切糖苷酶主要體現(xiàn)在對(duì)糖基一側(cè)整個(gè)寡糖鏈的結(jié)構(gòu)有專一要求。 ? 它們 作用于 糖鏈的中間打斷糖苷鍵，水解產(chǎn)物為分子量小于原來底物的寡糖。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的內(nèi)切糖 苷酶 ? ?N乙酰葡糖胺內(nèi)切酶 ? ?N乙酰半乳糖胺內(nèi)切酶 ? ?半乳糖苷內(nèi)切酶 ? ?1,6甘露聚糖內(nèi)切酶 ? ?1,4氨基半乳糖苷內(nèi)切酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 幾種內(nèi)切糖 苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1) ?N乙酰 葡糖胺內(nèi)切酶 ? 按其來源和底物專一性的差別，共分四種。 (1)它們都能水解 N型糖中緊挨著天冬酰胺的兩個(gè) N乙酰葡糖胺之間的 ?1,4連接鍵。 (2)EndoD和 EndoC1的底物專一性完全相同。 都要求在糖基一側(cè)有一個(gè)三碳結(jié)構(gòu)。非還原末端的?甘露糖殘基必需沒有被其他糖取代。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?N乙酰葡糖胺內(nèi)切酶 (3)indoH的底物專一性，在糖基一例要求一個(gè)四糖結(jié)構(gòu) : 非還原末端的 ?甘露糖必需是，或者不被取代、或者是僅僅取代在 C2位置上。 卵清蛋白糖肽的一條糖鏈 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?N乙酰葡糖胺內(nèi)切酶 (4)EndoC11的底物專一性，在糖基一側(cè)要求一個(gè)分枝的五糖單位，并且兩個(gè)處于還原末端的 ?甘露糖殘基都必需、或者不被別的糖基取代 ， 或者僅取代在 C2位置上。 ? EndoC11在糖苷配基一側(cè)的專一性要求，和 EndoH一樣，不容許有巖藻糖的取代。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (2) ?N乙酰半乳糖苷內(nèi)切酶 ? 蛋白的 O型糖鏈中最常見的一種，是由糖鏈還原末端的 N乙酰半乳糖胺和糖鏈中的絲氨酸或蘇氨酸的羥基以 ?0糖苷鍵連接而成。 ?N乙酰半乳糖胺內(nèi)切酶能夠切開這個(gè)連鍵，把 0型糖鏈和肽鏈完全分開。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (3) ? 半乳糖苷內(nèi)切酶 ? 糖基一側(cè)必須是一個(gè)三糖單位，失去非還原末端的半乳糖 乙酰半乳糖胺，都不能成為該酶的底物。 ? 糖苷配基一側(cè)必須是 N乙酰葡糖胺或葡萄糖。 ? 被酶水解打開的糖苷鍵必須是 ?1,4連接。 ? 這個(gè)內(nèi)切酶只能用于帶有血型 A(或 B)決定簇的糖鏈，能作用于血型物質(zhì) H。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (4) 其他內(nèi)切糖 苷酶 ? 來自灰色鏈霉菌發(fā)酵液的一個(gè)氨基半乳糖苷內(nèi)切酶，可以水解 ?氨基半乳糖苷鍵。用于一種真菌所產(chǎn)生的氨基半乳聚糖的結(jié)構(gòu)研究。 ? 來自一株土壤芽孢桿菌的 ?1,6甘露聚糖酶，能水解無側(cè)鏈取代的 ?1,6甘露糖糖苷鍵，在研究酵母胞壁外層甘露聚糖結(jié)構(gòu)時(shí)，將大分子甘露聚糖外側(cè)鏈打斷，獲得靠近天冬酰胺結(jié)合位置的內(nèi)核結(jié)構(gòu)。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 應(yīng)用中的問題 ? 在應(yīng)用糖苷酶進(jìn)行糖鏈結(jié)構(gòu)研究時(shí)，所取得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)對(duì)照其他技術(shù)方法提供的信息，小心加以解釋，以免引出錯(cuò)誤的結(jié)論。 ? 影響糖苷酶測(cè)定結(jié)果的因素很多，大致有以下幾個(gè)方面： TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1) 工具酶的選擇 ? 任何一助糖苷酶都可用于糖鏈結(jié)構(gòu)研究的工具酶。 ? 一般應(yīng)選擇文獻(xiàn)中常用的，底物專一性清楚的糖苷酶作為工具酶。 ? 一種新分離純化的糖苷酶，應(yīng)該用各種常見的糖苷鍵結(jié)構(gòu)類型作底物，做一系列酶活性測(cè)定，確定其底物專一性，然后才能用做工具酶。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (2) 工具酶的純度 ? 所采用的工具酶不應(yīng)混雜有別的酶。 ? 如果有少量蛋白酶沒有除盡，則可能在酶反應(yīng)中將所用的工具酶水解掉，使糖鏈水解過程中斷，并使產(chǎn)物中混入不應(yīng)有的雜質(zhì)，結(jié)果分析帶來困難。 ? 如果有少量別種的糖敢酶摻雜在工具酶中，有可能帶來錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (3) 遮蔽效應(yīng) ? 按照其他技術(shù)方法得到的信息，選擇了一個(gè)合適的糖苷酶，可得不到預(yù)期的結(jié)果。 ? 可能是預(yù)先得到的信息有錯(cuò)誤。 ? 可能是另一個(gè)原因，底物結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，造成了分子的空間遮蔽效應(yīng)。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (4) 其他方面 ? 在應(yīng)用糖苷酶于糖鏈結(jié)構(gòu)分析，遇到意料之外的負(fù)結(jié)果時(shí)，應(yīng)考慮以下幾種情況。 (1)底物是否充分溶解了 ? ? 有的樣品在水溶液中溶解不好，尤其是糖脂和膜結(jié)合糖蛋會(huì)極大地影響糖苷酶的水解效果。 ? 適當(dāng)?shù)丶尤肴ノ奂】稍鰪?qiáng)糖昔酶對(duì)糖脂的水解。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 其他方面 (2)是否有抑制劑存在 ? ? 在復(fù)雜的無細(xì)胞制劑系統(tǒng)中，抑制劑存在的可能性更大。 ? 要考慮底物抑制或單糖抑制的可能性。 (3)是否遇到了不常見的呋喃糖環(huán) ? ? 因?yàn)榻^大多數(shù)工具糖苷酶，是專一于吡喃環(huán)形式的。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?L巖藻糖苷酶測(cè)定的臨床應(yīng)用 ? ?L巖藻糖苷酶是一種溶酶體酸性水解酶。 ? 以往主要用于遺傳性 AFU缺乏引起的巖藻糖貯積病的診斷。 ? 近年來發(fā)現(xiàn)， ?L巖藻糖苷酶 測(cè)定對(duì)肝癌的診斷具有較高的敏感性和特異性 。 ? 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有利于肝癌的早期診斷、鑒別診斷 , 并可作為轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的指標(biāo) ， 也可用于白血病及卵巢癌的診斷。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 葡萄糖苷酶可以使白葡萄酒的香氣提高 ? 葡萄酒的香氣和味道是受聯(lián)結(jié)在一起的非易失性的化合物影響的，它可以被葡萄糖苷酶所損壞。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 內(nèi)切木聚糖酶與木糖苷酶預(yù)處理 對(duì)麥草漿漂白性能的影響 ? 結(jié)果表明 ， 無論是內(nèi)切木聚糖酶還是木糖苷酶預(yù)處理漂白漿的白度均比對(duì)照漿高，分別高出對(duì)照漿的 2. 5 和 1. 9 個(gè)百分點(diǎn)，同時(shí)漂白漿的強(qiáng)度也好于對(duì)照漿的強(qiáng)度。 ? 內(nèi)切木聚糖酶和木糖苷酶混合預(yù)處理漂白漿的白度分別比內(nèi)切木聚糖酶和木糖苷酶高出 0. 9 和 1. 5 個(gè)百分點(diǎn) ， 這表明內(nèi)切木聚糖酶和木糖苷酶在紙漿預(yù)處理過程中具有協(xié)同作用。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 血漿殼三糖苷酶活性與冠狀動(dòng)脈病變密切相關(guān) ? 對(duì) 126例冠狀動(dòng)脈造影術(shù)患者按冠狀動(dòng)脈狹窄程度分組 ， 將狹窄程度 50%者列為對(duì)照組 ， ≥ 50%者列為病變組 ， 比較各組血清殼三糖苷酶及血脂等指標(biāo) ， 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 ? 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病變組血清殼三糖苷酶水平較對(duì)照組顯著升高 。