【正文】 ? 唾液酸苷酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?半乳糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?巖藻糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 唾液酸 苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?半乳糖苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結構研究的內切糖 苷酶 ? 內切糖苷酶主要體現(xiàn)在對糖基一側整個寡糖鏈的結構有專一要求。 ? 它們 作用于 糖鏈的中間打斷糖苷鍵，水解產(chǎn)物為分子量小于原來底物的寡糖。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 用于糖鏈結構研究的內切糖 苷酶 ? ?N乙酰葡糖胺內切酶 ? ?N乙酰半乳糖胺內切酶 ? ?半乳糖苷內切酶 ? ?1,6甘露聚糖內切酶 ? ?1,4氨基半乳糖苷內切酶 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 幾種內切糖 苷酶的底物專一性 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1) ?N乙酰 葡糖胺內切酶 ? 按其來源和底物專一性的差別，共分四種。 (1)它們都能水解 N型糖中緊挨著天冬酰胺的兩個 N乙酰葡糖胺之間的 ?1,4連接鍵。 (2)EndoD和 EndoC1的底物專一性完全相同。 都要求在糖基一側有一個三碳結構。非還原末端的?甘露糖殘基必需沒有被其他糖取代。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?N乙酰葡糖胺內切酶 (3)indoH的底物專一性，在糖基一例要求一個四糖結構 : 非還原末端的 ?甘露糖必需是，或者不被取代、或者是僅僅取代在 C2位置上。 卵清蛋白糖肽的一條糖鏈 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?N乙酰葡糖胺內切酶 (4)EndoC11的底物專一性，在糖基一側要求一個分枝的五糖單位，并且兩個處于還原末端的 ?甘露糖殘基都必需、或者不被別的糖基取代 ， 或者僅取代在 C2位置上。 ? EndoC11在糖苷配基一側的專一性要求，和 EndoH一樣，不容許有巖藻糖的取代。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (2) ?N乙酰半乳糖苷內切酶 ? 蛋白的 O型糖鏈中最常見的一種，是由糖鏈還原末端的 N乙酰半乳糖胺和糖鏈中的絲氨酸或蘇氨酸的羥基以 ?0糖苷鍵連接而成。 ?N乙酰半乳糖胺內切酶能夠切開這個連鍵，把 0型糖鏈和肽鏈完全分開。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (3) ? 半乳糖苷內切酶 ? 糖基一側必須是一個三糖單位，失去非還原末端的半乳糖 乙酰半乳糖胺，都不能成為該酶的底物。 ? 糖苷配基一側必須是 N乙酰葡糖胺或葡萄糖。 ? 被酶水解打開的糖苷鍵必須是 ?1,4連接。 ? 這個內切酶只能用于帶有血型 A(或 B)決定簇的糖鏈，能作用于血型物質 H。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (4) 其他內切糖 苷酶 ? 來自灰色鏈霉菌發(fā)酵液的一個氨基半乳糖苷內切酶，可以水解 ?氨基半乳糖苷鍵。用于一種真菌所產(chǎn)生的氨基半乳聚糖的結構研究。 ? 來自一株土壤芽孢桿菌的 ?1,6甘露聚糖酶，能水解無側鏈取代的 ?1,6甘露糖糖苷鍵，在研究酵母胞壁外層甘露聚糖結構時，將大分子甘露聚糖外側鏈打斷，獲得靠近天冬酰胺結合位置的內核結構。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 應用中的問題 ? 在應用糖苷酶進行糖鏈結構研究時，所取得的實驗結果，應對照其他技術方法提供的信息，小心加以解釋，以免引出錯誤的結論。 ? 影響糖苷酶測定結果的因素很多，大致有以下幾個方面： TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (1) 工具酶的選擇 ? 任何一助糖苷酶都可用于糖鏈結構研究的工具酶。 ? 一般應選擇文獻中常用的，底物專一性清楚的糖苷酶作為工具酶。 ? 一種新分離純化的糖苷酶，應該用各種常見的糖苷鍵結構類型作底物，做一系列酶活性測定，確定其底物專一性，然后才能用做工具酶。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (2) 工具酶的純度 ? 所采用的工具酶不應混雜有別的酶。 ? 如果有少量蛋白酶沒有除盡，則可能在酶反應中將所用的工具酶水解掉，使糖鏈水解過程中斷，并使產(chǎn)物中混入不應有的雜質，結果分析帶來困難。 ? 如果有少量別種的糖敢酶摻雜在工具酶中，有可能帶來錯誤的實驗結果。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (3) 遮蔽效應 ? 按照其他技術方法得到的信息，選擇了一個合適的糖苷酶，可得不到預期的結果。 ? 可能是預先得到的信息有錯誤。 ? 可能是另一個原因，底物結構較為復雜，造成了分子的空間遮蔽效應。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY (4) 其他方面 ? 在應用糖苷酶于糖鏈結構分析，遇到意料之外的負結果時，應考慮以下幾種情況。 (1)底物是否充分溶解了 ? ? 有的樣品在水溶液中溶解不好，尤其是糖脂和膜結合糖蛋會極大地影響糖苷酶的水解效果。 ? 適當?shù)丶尤肴ノ奂】稍鰪娞俏裘笇μ侵乃狻? TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 其他方面 (2)是否有抑制劑存在 ? ? 在復雜的無細胞制劑系統(tǒng)中，抑制劑存在的可能性更大。 ? 要考慮底物抑制或單糖抑制的可能性。 (3)是否遇到了不常見的呋喃糖環(huán) ? ? 因為絕大多數(shù)工具糖苷酶，是專一于吡喃環(huán)形式的。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY ?L巖藻糖苷酶測定的臨床應用 ? ?L巖藻糖苷酶是一種溶酶體酸性水解酶。 ? 以往主要用于遺傳性 AFU缺乏引起的巖藻糖貯積病的診斷。 ? 近年來發(fā)現(xiàn)， ?L巖藻糖苷酶 測定對肝癌的診斷具有較高的敏感性和特異性 。 ? 動態(tài)監(jiān)測有利于肝癌的早期診斷、鑒別診斷 , 并可作為轉移、復發(fā)的指標 ， 也可用于白血病及卵巢癌的診斷。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 葡萄糖苷酶可以使白葡萄酒的香氣提高 ? 葡萄酒的香氣和味道是受聯(lián)結在一起的非易失性的化合物影響的，它可以被葡萄糖苷酶所損壞。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 內切木聚糖酶與木糖苷酶預處理 對麥草漿漂白性能的影響 ? 結果表明 ， 無論是內切木聚糖酶還是木糖苷酶預處理漂白漿的白度均比對照漿高，分別高出對照漿的 2. 5 和 1. 9 個百分點，同時漂白漿的強度也好于對照漿的強度。 ? 內切木聚糖酶和木糖苷酶混合預處理漂白漿的白度分別比內切木聚糖酶和木糖苷酶高出 0. 9 和 1. 5 個百分點 ， 這表明內切木聚糖酶和木糖苷酶在紙漿預處理過程中具有協(xié)同作用。 TOOLS FOR GLYCOBIOLOGY 血漿殼三糖苷酶活性與冠狀動脈病變密切相關 ? 對 126例冠狀動脈造影術患者按冠狀動脈狹窄程度分組 ， 將狹窄程度 50%者列為對照組 ， ≥ 50%者列為病變組 ， 比較各組血清殼三糖苷酶及血脂等指標 ， 進行統(tǒng)計學分析。 ? 結果發(fā)現(xiàn)，病變組血清殼三糖苷酶水平較對照組顯著升高 。