【導讀】毛角蛋白II型中間絲基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關。高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程如圖。過程①中最常用的運載工具是__________，所需要的酶是限制酶和_____________。在過程②中，用__________處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。程中，將成纖維細胞置于5%CO2的氣體環(huán)境中，CO2的作用是________________。在過程③中，用___________處理以獲得更多的卵（母）細胞。在核移植前需要進行____________處理。在胚胎移植前，通過____________技術(shù)可獲得較多胚胎。運載工具（體）包括質(zhì)粒、噬菌體衍生物及動植物病毒,其中質(zhì)粒是主要運載體;所需工具酶是限制酶和DNA連接酶。程中，CO2的作用是維持培養(yǎng)液pH的相對穩(wěn)定。胞在核移植前需要進行去核處理，以保證克隆后代的遺傳性狀主要了來自供體核。為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復合體”獲得DNA片段信息的過程圖。的識別序列進行對比，以確定選用何種酶。加在飼料中可以降解AFB1，清除其毒性。鏈進入動物體內(nèi)并蓄積，引起瘤變。②過程Ⅱ中，根據(jù)圖示，可以看出與引物結(jié)合的模版是cDNA.

　　

【正文】 1和 7不能連接 【答案】 （ 9分） ，差異表達的基因最少 2020全國卷Ⅱ 5.（ 6分）下列敘述符合基因工程概念的是（ ） A． B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中含有 B淋巴細胞中的抗體基因 B．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株 C．用紫外線照射青霉菌，使其 DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產(chǎn) 菌株 D．自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后其 DNA整合到細菌 DNA上 【答案】 （ 6分） B 2020 天津 7.Ⅰ .（ 14分） 本卷第 24 頁（ 共 43 頁） 下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術(shù)路線。圖中 tetR表示四環(huán)素抗性基因， ampR表示氨芐青霉素抗性金銀， BamHI、 HindIII、 SmaI 直線所示為三種限制酶的酶切位點。據(jù)圖回答： （ 1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用 限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含 的培養(yǎng)基上進行。 （ 2） 能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調(diào)控序列是 （填字母代號）。 B. tetR D. ampR （ 3）過程①可采用的操作方法是 （填字母代號）。 B. 大腸桿菌轉(zhuǎn)化法 D. 細胞融合 （ 4）過程②可采用的生物技術(shù)是 。 （ 5）對早期胚胎進行切割，經(jīng)過程②可獲得多個新個體。這利用了細胞的 性。 （ 6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用 （填字母代號）技術(shù)。 B. 基因序列分析 — 抗體雜交 D. PCR 【答案】 Ⅰ .（ 14分） （ 1） HindⅢ和 BamHⅠ；氨芐青霉素 （ 2） A （ 3） C （ 4） 胚胎移植技術(shù) （ 5） 全能 （ 6） C 【解析】 I（ 1）據(jù) 圖，僅將人乳鐵蛋白基因切割出來，需要在人乳鐵蛋白基因的左側(cè)用 BanHI 切割，右側(cè)用 HindIII 切割。當人乳鐵蛋白基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒后， TETR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而 anpR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸肝菌首先需要字含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。 5 （ 2）基因表達的調(diào)控序列在啟動子上。 本卷第 25 頁（ 共 43 頁） （ 3）將重組質(zhì)粒導入動物細胞，常采用顯微鏡的方法。 （ 4）過程②的左側(cè)是早期胚胎，右側(cè)是代孕牛，過程②采用的生物技術(shù)是胚胎移植。 （ 5）將細胞培養(yǎng)為個體，利用了細胞的全能性。 （ 6）檢測目 的基因在手提細胞中是否表達，常采用抗原 抗體雜交技術(shù)。 2020 福建 32.[生物 現(xiàn)代生物科技專題 ]（ 10 分）紅細胞生成素（ EPO）是體內(nèi)促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然 EPO來源極為有限，目前臨床上使用的紅細胞生成素主要來自于基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細胞生成素（ rhEPO），其簡要生產(chǎn)流程如右圖。請回答： （ 1）圖中①所指的是 技術(shù)。 （ 2）圖中②所指的物質(zhì)是 ，③所指的物質(zhì)是 。 （ 3）培養(yǎng)重組 CHO細胞時， 為便于清除代謝產(chǎn)物，防止細胞產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，應定期更換 。 （ 4）檢測 rhEPO的體外活性需要抗 rhEPO的單克隆抗體。分泌該單克隆抗體的 細胞，可由 rhEPO免疫過的小鼠 B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成。 【答案】 （ 10分） （ 1） PCR （ 2） mRNA； rhEPO （ 3） 培養(yǎng)液 （ 4） 雜交瘤 2020浙江（ 6分） ，下列操作錯誤的是 （ ） A. 用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草 花 葉病毒的核酸 B. 用 DNA連接酶連 接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體 C. 將重組 DNA分子導入原生質(zhì)體 D. 用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細胞 【答案】（ 6分） A 【解析】 本題考查基因工程的有關知識，基因工程的一般過程：①用限制性核酸內(nèi)切酶切割含目的基因的 DNA 分子（除草劑基因）和運載體（質(zhì)粒），②用 DNA連接酶連接切割好的目的基因和運載體③重組 DNA分子導入受體細胞，因為是植物可以說是原生質(zhì)體④用相應的試劑和病原體帥選轉(zhuǎn)基因細胞⑤用植物組織培養(yǎng)技術(shù)抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草（表達）。所以答案 A。 2020江蘇 27．（ 8 分）下表中列出了幾種限制酶識別序列及其 切割位點， 圖 l、 圖 2 中箭頭表示相關限制 本卷第 26 頁（ 共 43 頁） 酶的酶切位點。請回答下列問題： （ 1）一個圖 1所示的質(zhì)粒分子經(jīng) Sma Ⅰ 切割前后，分別含有 個游離的磷酸基團。 （ 2）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的 SmaⅠ 酶切位點越 多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越 。 （ 3）用圖中的質(zhì)粒和外源 DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用 Sma Ⅰ 切割，原因是 。 （ 4）與只使用 EcoR I相比較，使用 BamH Ⅰ 和 Hind Ⅲ 兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止 。 （ 5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入 酶。 （ 6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。 （ 7）為了從 cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體 ，然后在 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。 【答案】（ 8分）（ 1） 0、 2 （ 2）高 （ 3） SmaⅠ 會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源 DNA中的目的基因 （ 4）質(zhì)粒和含目的基因的外源 DNA片段自身環(huán)化 （ 5） DNA連接 （ 6）鑒別和篩選含有目的基因的細胞 （ 7）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì) 【解析】本題考查基因工程的限制性內(nèi)切酶的作用特點 （ 1）質(zhì)粒切割前是雙鏈環(huán)狀 DNA分子，所有磷酸基團參與形成磷酸二酯鍵，故不含游離的磷酸基團。從 圖 1可以看出，質(zhì)粒上只含有一個 SmaⅠ 的切點，因此被改酶切割后，質(zhì) 粒變?yōu)榫€性雙鏈 DNA分子，因每 條鏈上含有一個游離的磷酸基團，因此切割后含有兩個游離的磷酸基團。 （ 2）由題目可知， SmaⅠ 識別的 DNA 序列只有 G和 C，而 G和 C之間可以形成三個氫鍵， A和 T之間可以 本卷第 27 頁（ 共 43 頁） 形成二個氫鍵，所以 SmaⅠ 酶切位點越多，熱穩(wěn)定性就越高 （ 3）質(zhì)?？股乜剐曰驗闃擞浕颍蓤D 2 可知，標記基因和外源 DNA 目的基因中均含有 SmaⅠ 酶切位 點，都可以被 SmaⅠ 破壞，故不能使用該酶剪切含有目的基因的 DNA （ 4）只使用 EcoR I，則質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端相同，用連接酶連接時，會產(chǎn)生質(zhì)粒和目 的基因 自身連接物，而利用 BamH Ⅰ 和 Hind Ⅲ 剪切時，質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端不同，用DNA連接酶連 接時，不會產(chǎn)生自身連接產(chǎn)物。 （ 5）質(zhì)粒和目的基因連接后獲得重組質(zhì)粒，該過程需要連接酶作用，故混合后加入 DNA 連接酶。 （ 6）質(zhì)粒上的抗性基因為標記基因，用于鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒的受體細胞。 （ 7）將重組質(zhì)粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，含有重組質(zhì)粒的個體才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作為唯一碳源的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)受體細胞，含有重組質(zhì)粒的細胞才能存活，不含有重組質(zhì)粒的因不能獲得碳源而死亡， 從而達到篩選目的。 2020年浙江 3．（ 6分）下列關于基因工程的敘述， 錯誤 ． ． 的是（ ） A．目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物 B．限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA連接酶是兩類常用的工具酶 C．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性 D．載體上的抗性基因有利于篩選含重組 DNA的細胞和促進目的基因的表達 【 答案 】 D 【 解析 】基因工程中目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和 DNA 連接酶；人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性，只有經(jīng)過一定的物 質(zhì)激活以后，才有生物活性。載體上的抗性基因主要是有利于篩選含重組 DNA的細胞，不能促進目的基因的表達。所以 D錯誤。 2020年山東 35.（ 8分）（生物一現(xiàn)代生物科技專題） 人類在預防與診療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為 RNA病毒，該病毒表面的 A蛋白為主要抗原，且 疫 苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：請回答： （ 1）過程 ① 代表的是 。 （ 2）過程 ② 構(gòu)建 A基因表 達 載體時，必須使用 和 兩種工具酶。 本卷第 28 頁（ 共 43 頁） （ 3）過程 ③ 采用的 實驗技術(shù)是 ， 獲得的 X是 。 （ 4） 對健康人進行該傳染病免疫預防時，可選用圖中基因工程 生產(chǎn)的 所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，可 以疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進行 比較；或用 圖中的 進行特異性結(jié)合檢測。 【答案】（ 8分） （ 1）逆 （反） 轉(zhuǎn)錄 （ 2）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶、限制性內(nèi)切酶） DNA連接酶（兩空可以互換） （ 3）細胞融合 雜交瘤細胞 （ 4） A蛋白 核酸 （基因）序列 抗 A蛋白的單克隆抗體 【解析】 本題以圖展示了疫苗的生產(chǎn)和單克隆抗體的制備的過程，考察了中心法則、基因工程、動物細胞工程等現(xiàn)代生物科技。 （ 1）中心法則中，對于少數(shù)的以 RNA為遺傳物質(zhì)的病毒，其遺傳信息的傳遞過程需要補充的過程有 RNA的逆轉(zhuǎn)錄和 RNA的復制的過程，圖中過程 ① 正代表的是逆轉(zhuǎn)錄的過程 （ 2）基因工程的步驟是：目的基因的提取 —— 構(gòu)建基因表達載體 —— 導入受體細胞 ——目的基因的檢測和表達，其中構(gòu)建基因表達載體中需要限制酶來切割以獲取目的基因，同時需要相同的限制酶切割運載體以獲 取與目的基因相同的黏性末端，再通過 DNA 連接酶連接目的基因和運載體。 （ 3）過程 ③ 是將瘤細胞與 B淋巴細胞融合的過程，獲得的叫雜交瘤細胞，其具備了瘤細胞的無限增殖的特性和 B淋巴細胞的產(chǎn)生抗體的特性，從而制備單克隆抗體。 （ 4）本題考察了免疫預防的操作過程，以及欲確診疑似患者而采取的方法。本題中提示該 RNA病毒表面的 A蛋白為主要的抗原，故而可選用通過基因工程生產(chǎn)的 A蛋白制備疫苗；確診時為判斷該病毒是否為題目中的 RNA病毒，可以進行核酸序列的比對，也可以利用單克隆抗體具備特異性，利用抗 A蛋白的特異性單克隆抗體通 過能否特異性結(jié)合判斷病毒表面是否有 A蛋白的存在進一步進行檢測是否為目的 RNA病毒。 2020年四川 31．（ 20分）大豆是兩性花植物。下面是大豆某些性狀的遺傳實驗： （ 1）大豆子葉顏色（ BB 表現(xiàn)深綠； Bb 表現(xiàn)淺綠； bb 呈黃色，幼苗階段死亡）和花葉病的抗性（由 R、 r基因控制）遺傳的實驗結(jié)果如下表： 組合 母本 父本 F1的表現(xiàn)型及植株數(shù) 一 子葉深綠不抗病 子葉淺綠抗病 子葉深綠抗病 220株；子葉淺綠抗病 217株 二 子葉深綠不抗病 子葉淺綠抗病 子葉深綠抗病 110株；子葉深綠不抗病 109株； 子葉淺綠抗病 108株；子葉淺綠不抗病 113株 ① 組合一中父本的基因型是 _____________，組合二中父本的基因型是 _______________。 ② 用表中 F1 的子葉淺綠抗病植株自交，在 F2 的成熟植株中，表現(xiàn)型的種類有_____ ， 其比例為 ___________。 本卷第 29 頁（ 共 43 頁） ③ 用子葉深綠與子葉淺綠植株雜交得 F1， F1隨機交配得到的 F2成熟群體中， B基因的基因頻率為 _________。 ④ 將表中 F1 的子葉淺綠抗病植株的花粉培養(yǎng)成單倍體植株，再將這些植株的葉肉細胞制成不同的原生質(zhì)體。如要 得到子葉深綠抗病植株，需要用 _________________基因型的原生質(zhì)體進行融合 ⑤ 請選用表中植物材料設計一個雜育種方案，要求在最短的時間內(nèi)選育出純合的子葉深綠抗病大豆材料。 （ 2）有人試圖利用細菌的抗病毒基因?qū)Σ豢共〈蠖惯M行遺傳改良，以獲得抗病大豆品種。 ① 構(gòu)建含外源抗病毒基因的重組 DNA分子時，使用的酶有 ____________